ọja

Ilana Idanwo

Ohun elo yii da lori imọ-ẹrọ ELISA aiṣe-idije.Awọn kanga microtiter ti wa ni ti a bo pẹlu antijeni pọ.Flumequinealoku ninu awọn ayẹwo figagbaga pẹlu awọn antijeni ti a bo lori microtiter awo fun agboguntaisan.Lẹhin afikun ti enzymu ti a samisi egboogi-egboogi, a lo sobusitireti TMB lati ṣafihan awọ naa.Gbigba ayẹwo jẹ ni odi ni ibatan si tetracycline ti ngbe inu rẹ, lẹhin ifiwera pẹlu Standard Curve, isodipupo nipasẹ ọpọ dilution, iye aloku Flumequine ninu apẹẹrẹ le ṣe iṣiro.

Awọn ohun elo

Ohun elo yii le ṣee lo ni titobi ati igbekale agbara ti iyoku flumequine ninu oyin.

Cross-aati

Flumequine …………………………………………………………………………………………………………………….

Awọn ohun elo ti a beere

Awọn ohun elo

spectrophotometer awo Microtiter (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer tabi ikun

┅┅Shaker

┅┅Aladapọ Vortex

┅┅Centrifuge

┅┅ Iwọntunwọnsi itupalẹ (inductance: 0.01g)

┅┅ pipette ti o gboye: 15ml

┅┅ Roba pipette boolubu

tube Centrifuge Polystyrene: 15ml, 50ml

┅┅ tube idanwo gilasi: 10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene kiloraidi (AR)

┅┅Acetonitrile (AR)

┅┅ Omi ti a ti sọ diionized

--Hydrochloric acid (AR) ti o ni idojukọ

Ohun elo Kit

● Microtiter awo pẹlu 96 kanga ti a bo pẹlu antijeni

● Awọn ojutu boṣewa (igo 6 × 1 milimita / igo)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Iṣakoso boṣewa ifọkansi giga: (1 milimita / igo)

…………………………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………………. fila pupa

● Ojutu antibody 7ml ………………………………………………….. fila alawọ ewe

● Solusan A 7ml ………………………………………………….. fila funfun

● Solusan B 7ml ………………………………………………………… fila pupa

● Da ojutu 7ml ………………………………………………… fila ofeefee

● 20XConcentrated w ojutu 40ml

…………………………………………………………………. fila sihin

●2X Ojutu isediwon 50ml……………………………… fila buluu

Igbaradi Reagents

7.1 Honey ayẹwo

Solusan 1: 0.2 M Hydrochloric acid ojutu

Iwọn 41.5ml Ogidi hydrochloric acid, dilute pẹlu omi deionized si 500 milimita.

Solusan 2: Fifọ ojutu

Di ojutu iwẹ ifọkansi pẹlu omi deionized ni ipin iwọn didun ti 1:19, eyiti yoo ṣee lo fun fifọ awọn awo naa.ojutu ti fomi le wa ni ipamọ ni iwọn 4 ℃ fun oṣu kan.

Ojutu3: isediwon ojutu

Dilute 2 × ojutu isediwon ifọkanbalẹ pẹlu omi ti a ti sọ diionized ni iwọn iwọn didun ti 1: 1 (tabi da lori ibeere), eyi ti yoo ṣee lo fun isediwon ayẹwo.Ojutu ti fomi le wa ni ipamọ fun oṣu kan ni 4℃.

Apeere Igbaradi

8.1 Akiyesi ati awọn iṣọra fun awọn olumulo ṣaaju ṣiṣe

(a) Jọwọ lo ọkan-pipa awọn italologo ninu awọn ilana ti ṣàdánwò, ki o si yi awọn italologo nigbati fa orisirisi reagent.

(b) Rii daju pe gbogbo awọn ohun elo idanwo jẹ mimọ, bibẹẹkọ yoo ni ipa abajade idanwo naa.

8.2Apeere oyin

- - Ṣe iwọn 2g ± 0.05g ayẹwo oyin sinu tube centrifuge polystyrene 50ml,

--Fikun 2ml 0.2M Hydrochloric acid ojutu (Ojutu 1), vortex lati dapọ patapata, lẹhinna fi 8ml methylene chloride, gbọn pẹlu gbigbọn fun 5min lati tu patapata;

--Centrifuge fun iṣẹju 10, o kere ju 3000g ni iwọn otutu yara (20-25 ℃);

-----Yọ awọn supernatant alakoso, ya 2 milimita ti awọn sobusitireti Organic ojutu si kan 10 milimita gilasi tube.gbẹ awọn substate labẹ omi wẹ ti Nitrogen sisan (50-60 ℃)

--Ṣafikun milimita 1 n-hexane, vortex fun 30s, lẹhinna ṣafikun ojutu isediwon 1ml (ojutu 3), vortex lẹẹkansi fun iṣẹju 1.Centrifuge fun iṣẹju 5, o kere ju 3000g ni iwọn otutu yara (20-25℃);

-----Yọ awọn supernatant alakoso, ya 50ml fun assay;

9. Ilana ayẹwo

9.1 Ṣe akiyesi ṣaaju ayẹwo

9.1.1 Rii daju pe gbogbo reagents ati microwells wa ni gbogbo ni yara otutu (20-25 ℃).

9.1.2 Pada gbogbo awọn reagents isinmi pada si 2-8 ℃ lẹsẹkẹsẹ lẹhin lilo.

9.1.3 Fifọ awọn microwells ti o tọ jẹ igbesẹ pataki ninu ilana ti iṣiro;o jẹ ifosiwewe pataki si atunwi ti itupalẹ ELISA.

9.1.4 Yago fun ina ati ki o bo awọn microwells nigba abeabo.

9.2 Assay Igbesẹ

9.2.1 Ya gbogbo reagents jade ni yara otutu (20-25 ℃) fun diẹ ẹ sii ju 30min, homogenize ṣaaju lilo.

9.2.2 Gba awọn microwells ti o nilo jade ki o da iyoku pada sinu apo titiipa zip ni 2-8℃ lẹsẹkẹsẹ.

9.2.3 Ojutu fifọ ti a fomi yẹ ki o tun ṣe atunṣe lati wa ni iwọn otutu yara ṣaaju lilo.

9.2.4Nọmba:Nọmba gbogbo ipo microwell ati gbogbo awọn iṣedede ati awọn ayẹwo yẹ ki o ṣiṣẹ ni ẹda-ẹda.Ṣe igbasilẹ awọn iṣedede ati awọn ipo apẹẹrẹ.

9.2.5Ṣafikun ojutu boṣewa/apẹẹrẹ:Ṣafikun 50 µl ti ojutu boṣewa tabi apẹẹrẹ ti a pese silẹ si awọn kanga ti o baamu.Fi 50µl ojutu antibody kun.Illa rọra nipa gbigbọn awo pẹlu ọwọ ati incubate fun 30min ni 25℃ pẹlu ideri.

9.2.6Fọ:Yọ ideri naa jẹjẹ ki o si wẹ omi naa kuro ninu awọn kanga ki o si fi omi ṣan awọn microwells pẹlu 250µl ti fomi ojutu (ojutu 2) ni aarin 10s fun awọn akoko 4-5.Fa omi to ku pẹlu iwe ifamọ (okuta afẹfẹ iyokù le yọkuro pẹlu imọran ti ko lo).

9.2.8.Enzyme conjugate:Fi ojutu conjugate enzymu kun 100ml si kanga kọọkan, Dapọ rọra nipa gbigbọn awo pẹlu ọwọ ati incubate fun 30min ni 25℃ pẹlu ideri.Tun igbesẹ fifọ lẹẹkansi.

9.2.8Àwọ̀:Fi ojutu 50µl A ati 50µl ojutu B si kanga kọọkan.Darapọ mọra nipa gbigbọn awo pẹlu ọwọ ati incubate fun iṣẹju 15 ni 25℃ pẹlu ideri (wo 12.8).

9.2.9Iwọn:Fi 50µl ojutu iduro si kanga kọọkan.Illa rọra nipa gbigbọn awo pẹlu ọwọ ati wiwọn ifasilẹ ni 450nm lodi si ofifo afẹfẹ (O jẹ wiwọn ti a daba pẹlu iwọn gigun-meji ti 450 / 630nm. Ka abajade laarin 5min lẹhin afikun ti ojutu iduro. ) (A tun le ṣe iwọn nipasẹ oju. laisi ojutu iduro ni kukuru ti ohun elo ELIASA)

Awọn abajade

10,1 Ogorun absorbance

Awọn iye iwọn ti awọn iye ifunmọ ti a gba fun awọn iṣedede ati awọn apẹẹrẹ ti pin nipasẹ iye gbigba ti boṣewa akọkọ (boṣewa odo) ati isodipupo nipasẹ 100%.Iwọnwọn odo jẹ bayi jẹ dogba si 100% ati awọn iye gbigba ni a sọ ni awọn ipin ogorun.

Imukuro (%) = B/B0 ×100%

B ——boṣewa gbigba (tabi apẹẹrẹ)

B0 ——absorbance odo bošewa

10.2 Standard ekoro

Lati fa a boṣewa ti tẹ: Mu awọn absorbance iye ti awọn ajohunše bi y-axis, ologbele logarithmic ti ifọkansi ti flumequine awọn ajohunše ojutu (ppb) bi x-apa.

--- Awọnflumequinefojusi ti kọọkan ayẹwo (ppb), eyi ti o le wa ni ka lati calibration ti tẹ, ti wa ni isodipupo nipasẹ awọn ti o baamu dilution ọpọ ti kọọkan ayẹwo atẹle, ati awọn gangan ifọkansi ti awọn ayẹwo ti wa ni gba.

Fun idinku data ti awọn ohun elo ELISA, sọfitiwia pataki ti ni idagbasoke, eyiti o le pese lori ibeere.

11. ifamọ, išedede ati konge

Idanwo Ifamọ:0.3ppb

Oyin Ayẹwo Dilution ifosiwewe: 2

Iwọn wiwa

Apeere oyin --------------------------------- -1ppb

Yiye

Apeere oyin ------------------------------------------------- 90 ± 20 %

Itọkasi

Olusọdipúpọ iyatọ ti ohun elo ELISA ko kere ju 10%.

12. Akiyesi

12.1 Awọn iye iwọn ti awọn iye gbigba ti o gba fun awọn iṣedede ati awọn ayẹwo yoo dinku ti awọn atunto ati awọn ayẹwo ko ba ti ni ilana si iwọn otutu yara (20-25 ℃).

12.2 Ma ṣe gba awọn microwells laaye lati gbẹ laarin awọn igbesẹ lati yago fun atunwi ti ko ni aṣeyọri ati ṣiṣẹ ni igbesẹ ti n tẹle lẹsẹkẹsẹ lẹhin titẹ ohun mimu microwells.

12.3.Homogenize kọọkan reagent ṣaaju lilo.

12.4.Jeki awọ ara rẹ kuro ni ojutu iduro nitori pe o jẹ 2M H₂SO₄ojutu.

12.5 Maṣe lo awọn ohun elo ti ọjọ.Maṣe paarọ awọn reagents ti awọn ipele oriṣiriṣi, nitori yoo ju ifamọ naa silẹ.

12.6 Ipo ipamọ:

Jeki awọn ohun elo ELISA ni 2-8℃, maṣe di didi.Di awọn apẹrẹ microwell isinmi Yago fun imọlẹ orun taara lakoko gbogbo awọn ifibọ.Ibora awọn apẹrẹ microtiter ni a ṣe iṣeduro.

12.7 Awọn itọkasi fun awọn reagents ti lọ buburu:

Ojutu sobusitireti yẹ ki o kọ silẹ ti o ba yi awọn awọ pada.

Awọn reagents le jẹ buburu ti iye gbigba (450/630nm) ti boṣewa odo jẹ kere ju 0.5 (A450nm ~ 0.5).

12.8 Imudara awọ nilo 15min lẹhin fifi Solusan A ati Solusan B. Ati pe o le fa awọn sakani akoko incubation gigun lati 20min si diẹ sii ti awọ ba jẹ imọlẹ pupọ lati pinnu.Maṣe kọja iṣẹju 25, Ni ilodi si, kuru akoko isubu daradara.

12.9 Awọn iwọn otutu lenu ti o dara julọ jẹ 25 ℃.Iwọn giga tabi isalẹ yoo yorisi awọn iyipada ti ifamọ ati awọn iye gbigba.

13. Ibi ipamọ

Ipo ipamọ: 2-8℃.

Akoko ipamọ: 12 osu.