mahsulot

Sinov printsipi

Ushbu to'plam bilvosita raqobatdosh ELISA texnologiyasiga asoslangan.Mikrotitr quduqlari biriktiruvchi antijen bilan qoplangan.Flumequinenamunadagi qoldiq antikor uchun mikrotitr plastinkasida qoplangan antigen bilan raqobatlashadi.Anti-antikor etiketli ferment qo'shilgandan so'ng, rangni ko'rsatish uchun TMB substrati ishlatiladi.Namuna yutilishi undagi tetratsiklin moddasi bilan salbiy bog'liq, standart egri chiziq bilan solishtirgandan so'ng, suyultirish ko'paytmasiga ko'paytirilgandan so'ng, namunadagi Flumequine qoldiq miqdorini hisoblash mumkin.

Ilovalar

Ushbu to'plam asaldagi flumekin qoldiqlarini miqdoriy va sifat jihatidan tahlil qilish uchun ishlatilishi mumkin.

O'zaro reaktsiyalar

Flumequine …………………..……………………… 100%

Kerakli materiallar

Uskunalar

┅┅Mikrotitr plastinka spektrofotometri (450nm/630nm)

┅┅Gomogenizator yoki oshqozon

┅┅Shaker

┅┅Vortex mikser

┅┅Sentrifuga

┅┅Analitik muvozanat (induktivlik: 0,01g)

┅┅Batuvchi pipetka: 15ml

┅┅Kauchuk pipetkali lampochka

┅┅Polistirol santrifüj trubkasi: 15ml, 50ml

┅┅Shisha probirka: 10ml

┅┅Mikropipetlar: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipet

Reaktivlar

┅┅n-geksan(AR)

┅┅metilenxlorid (AR)

┅┅Asetonitril (AR)

┅┅Deionlashtirilgan suv

----- Konsentrlangan xlorid kislotasi (AR)

Kit komponentlari

● Antigen bilan qoplangan 96 ta quduqli mikrotitr plitasi

● Standart eritmalar (6 shisha×1ml/shisha)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Yuqori konsentratsiyali standart nazorat: (1ml/shisha)

……………………………………………………100ppb

● Enzim konjugati 12ml………………………… qizil qopqoq

● Antikor eritmasi 7ml …………..……..….…..yashil qopqoq

● A eritmasi 7ml……..…………………..………..oq qopqoq

● B eritmasi 7ml …………….…………..………… qizil qopqoq

● To'xtatilgan eritma 7ml ………………………………………………………………………………………………………………………………………хоихои sariq qopqoq

● 20XKonsentrlangan yuvish eritmasi 40ml

………………………………………………..shaffof qalpoq

●2X Ekstraksiya eritmasi 50ml…………………… ko‘k qopqoq

Reaktivlarni tayyorlash

7.1 Asal namunasi

Eritma 1: 0,2 M xlorid kislota eritmasi

Og'irligi 41,5 ml Konsentrlangan xlorid kislotasi, deionizatsiyalangan suv bilan 500 ml gacha suyultiriladi.

Yechim 2: eritmani yuving

Konsentrlangan yuvish eritmasini 1:19 hajm nisbatida deionizatsiyalangan suv bilan suyultiring, bu esa plitalarni yuvish uchun ishlatiladi.suyultirilgan eritma 4 ℃ haroratda 1 oy davomida saqlanishi mumkin.

Yechim3: ekstraksiya eritmasi

2× konsentrlangan ekstraksiya eritmasini deionlangan suv bilan 1:1 hajm nisbatida suyultiring (yoki talabga qarab), u namuna olish uchun ishlatiladi.Ushbu suyultirilgan eritma 4 ° C da 1 oy davomida saqlanishi mumkin.

Tayyorlash namunalari

8.1 Ishlashdan oldin foydalanuvchilar uchun ogohlantirish va ehtiyot choralari

(a) Iltimos, tajriba jarayonida bir martalik maslahatlardan foydalaning va turli reagentlarni qabul qilganda maslahatlarni o'zgartiring.

(b) Barcha eksperimental asboblar toza ekanligiga ishonch hosil qiling, aks holda bu tahlil natijasiga ta'sir qiladi.

8.2Asal namunasi

----- 2g ± 0,05 g asal namunasini 50 ml polistirolli santrifuga trubkasiga torting,

----- 2 ml 0,2 M xlorid kislota eritmasi (1-eritma) qo'shing, uni to'liq aralashtirish uchun vorteks qiling, so'ngra 8 ml metilen xlorid qo'shing, to'liq erishi uchun 5 daqiqa davomida shaker bilan silkiting;

----- Xona haroratida (20-25 ℃) kamida 3000 g, 10 daqiqa davomida santrifüj qiling;

----- Supernatant fazasini olib tashlang, 10 ml shisha naychaga 2 ml substrat organik eritmasini oling. Substatni azot oqimi (50-60 ℃) suv hammomida quriting.

----- 1 ml n-geksan qo'shing, 30 soniya davomida aylantiring, so'ngra 1 ml ekstraksiya eritmasini (3-eritma) qo'shing, yana 1 daqiqa davomida aylantiring.5 daqiqa davomida santrifüj qiling, xona haroratida kamida 3000 g (20-25 ℃);

----- Supernatant fazasini olib tashlang, tahlil uchun 50 ml oling;

9. Tahlil jarayoni

9.1 Tahlil qilishdan oldin ogohlantirish

9.1.1 Barcha reagentlar va mikro quduqlar xona haroratida (20-25 ℃) ekanligiga ishonch hosil qiling.

9.1.2 Qolgan barcha reagentlarni ishlatilgandan so'ng darhol 2-8 ℃ ga qaytaring.

9.1.3 Mikro quduqlarni to'g'ri yuvish tahlil jarayonida muhim qadamdir;bu Elishay tahlilining takrorlanishining muhim omilidir.

9.1.4 Inkubatsiya vaqtida yorug'likdan qoching va mikro quduqlarni yoping.

9.2 Tahlil bosqichlari

9.2.1 Barcha reagentlarni xona haroratida (20-25 ℃) 30 daqiqadan ko'proq vaqt davomida olib tashlang, ishlatishdan oldin bir hil holga keltiring.

9.2.2 Zarur bo'lgan mikro quduqlarni chiqarib oling va qolganlarini zudlik bilan 2-8 ℃ haroratda qulflangan qopga qaytaring.

9.2.3 Ishlatishdan oldin suyultirilgan yuvish eritmasi xona haroratida bo'lishi uchun qayta isitilishi kerak.

9.2.4Raqam:Har bir mikroquduq o'rnini raqamlang va barcha standartlar va namunalar ikki nusxada bajarilishi kerak.Standartlar va namunalar pozitsiyalarini yozib oling.

9.2.5Standart yechim/namuna qo'shing:Tegishli quduqlarga 50 µl standart eritma yoki tayyorlangan namuna qo‘shing.50 µl antikor eritmasi qo‘shing.Plastinani qo'lda silkitib, sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 25 ° C da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.

9.2.6Yuvish:Qopqoqni muloyimlik bilan echib oling va suyuqlikni quduqlardan tozalang va mikro quduqlarni 250 µl suyultirilgan yuvish eritmasi (2-eritma) bilan 10 soniya oralig‘ida 4-5 marta yuving.Qolgan suvni changni yutish qog'oz bilan so'rang (qolgan havo pufakchasini ishlatilmagan uchi bilan yo'q qilish mumkin).

9.2.8.Ferment konjugati:Har bir quduqqa 100 ml ferment konjugati eritmasini qo'shing, plastinkani qo'lda silkitib, sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 25 ℃ da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.Yuvish bosqichini yana takrorlang.

9.2.8Rang:Har bir quduqqa 50 µl A eritmasi va 50 µl B eritmasi qo‘shing.Plastinani qo'lda silkitib, sekin aralashtiramiz va qopqoq bilan 25 ℃ da 15 daqiqa davomida inkubatsiya qiling (12.8 ga qarang).

9.2.9O'lchov:Har bir quduqqa 50 µl to‘xtatuvchi eritma qo‘shing.Plastinani qo'lda silkitib, sekin aralashtiramiz va havo plitasiga nisbatan 450 nm chastotada absorbansni o'lchang (Bu ikki to'lqin uzunligi 450/630 nm bilan o'lchash tavsiya etiladi. To'xtash eritmasi qo'shilgandan keyin 5 daqiqa ichida natijani o'qing. ) (Ko'rish orqali ham o'lchashimiz mumkin. ELIASA asbobidan qisqacha to'xtashsiz yechim)

Natijalar

10.1 Foiz yutilish

Standartlar va namunalar uchun olingan absorbans qiymatlarining o'rtacha qiymatlari birinchi standartning absorbans qiymatiga (nol standart) bo'linadi va 100% ga ko'paytiriladi.Shunday qilib, nol standarti 100% ga teng bo'ladi va absorbans qiymatlari foizlarda ko'rsatilgan.

Absorbans (%) = B/B0 ×100%

B —— absorbsiya standarti (yoki namunasi)

B0 ——yutilish nol standarti

10.2 Standart egri chiziq

Standart egri chizish uchun: y o'qi sifatida standartlarning absorbans qiymatini, x o'qi sifatida flumekin standart eritmasi (ppb) konsentratsiyasining yarim logarifmikini oling.

--- Theflumekinkalibrlash egri chizig'idan o'qilishi mumkin bo'lgan har bir namunaning konsentratsiyasi (ppb) kuzatilgan har bir namunaning mos keladigan suyultirish karrali bilan ko'paytiriladi va namunaning haqiqiy konsentratsiyasi olinadi.

Elishay to'plamlari ma'lumotlarini qisqartirish uchun maxsus dasturiy ta'minot ishlab chiqilgan bo'lib, ular so'rov bo'yicha taqdim etilishi mumkin.

11. Sezuvchanlik, aniqlik va aniqlik

Sinov sezgirligi:0,3 ppb

Asal namunasini suyultirish omili: 2

Aniqlash chegarasi

Asal namunasi------------------------------------------------- -1ppb

Aniqlik

Asal namunasi --------------------------------------------- 90±20 %

Aniqlik

ELISA to'plamining o'zgaruvchanlik koeffitsienti 10% dan kam.

12. Eslatma

12.1 Agar reagentlar va namunalar xona haroratiga (20-25 ℃) sozlanmagan bo'lsa, standartlar va namunalar uchun olingan absorbans qiymatlarining o'rtacha qiymatlari kamayadi.

12.2 Muvaffaqiyatsiz takrorlanishni oldini olish uchun qadamlar orasida mikro quduqlarning qurib ketishiga yo'l qo'ymang va mikro quduq ushlagichiga tegib bo'lgandan so'ng darhol keyingi bosqichni bajaring.

12.3.Ishlatishdan oldin har bir reagentni bir hil holga keltiring.

12.4.Teringizni to'xtatuvchi eritmadan uzoqroq tuting, chunki u 2M H₂SO₄yechim.

12.5 Eskirgan to'plamlardan foydalanmang.Turli partiyalarning reagentlarini almashtirmang, chunki bu sezgirlikni pasaytiradi.

12.6 Saqlash holati:

ELISA to'plamlarini 2-8 ℃ haroratda saqlang, muzlatib qo'ymang.Mikroquduq plitalarini muhrlab qo'ying Barcha inkubatsiyalar davomida to'g'ridan-to'g'ri quyosh nuridan saqlaning.Mikrotitr plitalarini yopish tavsiya etiladi.

12.7 Reaktivlarning yomonlashishiga ko'rsatmalar:

Substrat eritmasi ranglarini o'zgartirsa, undan voz kechish kerak.

Nol standartining absorbsiya qiymati (450/630nm) 0,5 (A450nm＜0,5) dan kam bo'lsa, reaktivlar yomonlashishi mumkin.

12.8 A eritmasi va B eritmasi qo'shilgandan so'ng rang berish reaktsiyasi 15 minutni talab qiladi. Agar rangni aniqlash uchun juda ochiq bo'lsa, inkubatsiya vaqtini 20 daqiqadan ko'proqqa uzaytirishingiz mumkin.Hech qachon 25 daqiqadan oshmang, aksincha, inkubatsiya vaqtini to'g'ri qisqartiring.

12.9 Optimal reaksiya harorati 25 ℃.Yuqori yoki past harorat sezgirlik va absorbans qiymatlarining o'zgarishiga olib keladi.

13. Saqlash

Saqlash holati: 2-8 ℃.

Saqlash muddati: 12 oy.