önüm

Synag ýörelgesi

Bu toplum gytaklaýyn bäsdeşlik edýän ELISA tehnologiýasyna esaslanýar.Mikrotiter guýulary antigen bilen birleşdirilen.Flumequinenusgadaky galyndy antikor üçin mikrotiter plastinkasynda örtülen antigen bilen bäsleşýär.Antikorlara garşy ferment goşulandan soň, reňk görkezmek üçin TMB substraty ulanylýar.Nusganyň siňdirilmegi, içindäki tetrasiklin bilen negatiw baglanyşyklydyr, adaty egrilik bilen deňeşdirilende, köpeltmek bilen köpeldilensoň, nusgadaky Flumekiniň galyndy mukdary hasaplanyp bilner.

Goýmalar

Bu toplum baldaky flýukin galyndysynyň mukdar we hil derňewinde ulanylyp bilner.

Kesgitli reaksiýalar

Flumekin ………………… .. ……………………… 100%

Gerekli materiallar

Enjamlar

IcMikrotiter plastinka spektrofotometri (450nm / 630nm)

OmGomogenizator ýa-da stomacher

Ak Şaker

OrtWorteks mikser

Ent Merkez

An Analitik deňagramlylyk (induksion: 0.01g)

UedGradylan turba: 15ml

Ub Rezin turba lampasy

OstPolistirol merkezden gaçyryş turbasy: 15ml, 50ml

Lass Aýna synag turbasy ： 10ml

IcMikropipetler: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

Reagentler

┅┅n-heksan (AR)

Et Metilen hlorid (AR)

EtAketonitril (AR)

EionDionizirlenen suw

----- Konsentrirlenen gidroklor turşusy (AR)

Kit komponentleri

96 Antigen bilen örtülen 96 guýy bilen mikrotiter plastinka

● Adaty çözgütler (6 çüýşe × 1ml / çüýşe)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● concentokary konsentrasiýa standart gözegçiligi: (1ml / çüýşe)

…………………………….100ppb

12 12ml ferment konýugaty ……………………… ... gyzyl gapak

● Antikor çözgüdi 7ml ………… .. …… ..….… .. ýaşyl gapak

7 7ml çözgüt …… .. ………………… .. ……… .. ak gapak

7 B çözgüdi B 7ml ……………. ………… .. ………… gyzyl gapak

Solution 7ml çözgüdi bes ediň …………………… .. ……… sary gapak

X 20XKonsentrirlenen ýuwujy ergin 40ml

………………………………… ..… .. açyk gapak

● 2X çykarmak çözgüdi 50ml ……………… ...… gök gapak

Reagentleri taýýarlamak

7.1 Bal nusgasy

Çözgüt 1: 0,2 M Gidroklor kislotasynyň ergini

Agramy 41.5ml Konsentrirlenen gidroklor turşusy, deionizirlenen suw bilen 500 ml çenli suwuklaň.

Çözgüt 2: ergini ýuwuň

Plastinalary ýuwmak üçin ulanyljak konsentrirlenen ýuwujy ergini 1: 19 ses derejesinde deionizirlenen suw bilen garyşdyryň.suwuklandyrylan ergini 4 at 1 aý saklap bolýar.

Çözgüt3: çykarmak çözgüdi

2 × konsentrirlenen ekstraksiýa erginini 1: 1 (ýa-da talaplara baglylykda) deionizirlenen suw bilen garyşdyryň, bu nusga almak üçin ulanylar.Bu suwuklandyrylan ergini 4 at 1 aýlap saklap bolýar.

Nusga taýýarlyklary

8.1 Ulanyjylar üçin amaldan öň duýduryş we seresaplyklar

(a) Synag wagtynda bir gezeklik maslahatlary ulanyň we dürli reagenti siňdireniňizde maslahatlary üýtgediň.

(b) Synag gurallarynyň hemmesiniň arassadygyna göz ýetiriň, ýogsam bu synag netijesine täsir eder.

8.2Bal nusgasy

----- 50ml polistirol sentrifuga turbasyna 2g ± 0.05g bal nusgasy,

----- 2ml 0,2 M Gidroklor kislotasynyň erginini (1-nji çözgüt), doly garyşdyrmak üçin worteks goşuň, soňra 8ml metilen hlorid goşuň, 5 minutlap doly eremegi üçin silkdiň;

----- 10 minut üçin sentrifuga, otag temperaturasynda azyndan 3000g (20-25 ℃);

----- Adatdan daşary fazany aýyryň, 10 ml aýna turbasyna 2 ml substrat organiki erginini alyň. Azot akymynyň suw wannasynyň aşagynda guradyň (50-60 ℃)

----- 30 ml üçin 1 ml n-heksan, worteks goşuň, soňra 1ml çykarmak ergini (3-nji ergin), worteks ýene 1 minut goşuň.5 minut üçin sentrifuga, otag temperaturasynda azyndan 3000g (20-25 ℃);

----- Adatdan daşary fazany aýyryň, barlag üçin 50ml alyň;

9. Derňew prosesi

9.1 Derňewden öň duýduryş beriň

9.1.1 rehli reagentleriň we mikrotolkunlaryň hemmesiniň otag temperaturasynda bolandygyna göz ýetiriň (20-25 ℃).

9.1.2 Galan reagentleriň hemmesini ulanylandan soň derrew 2-8 to yzyna gaýtaryň.

9.1.3 Mikrotolkunlary dogry ýuwmak, barlag işinde möhüm ädimdir;ELISA derňewiniň gaýtalanmagy üçin möhüm faktor.

9.1.4 lightagtylykdan gaça duruň we inkubasiýa wagtynda mikrotolkunlary ýapyň.

9.2 Derňew ädimleri

9.2.1 Reagentleri otag temperaturasynda (20-25 ℃) 30 minutdan gowrak çykaryň, ulanmazdan ozal birleşdiriň.

9.2.2 Gerekli mikrotolkunlary alyň we galanlaryny derrew 2-8 at aralygynda zip-gulp haltasyna gaýtaryň.

9.2.3 Suwuklandyrylan ýuwujy ergin, ulanmazdan ozal otag temperaturasynda bolmagy üçin täzeden işlenmeli.

9.2.4Belgi:Her mikrotolkun pozisiýasyny sanlaň we ähli standartlar we nusgalar iki gezek işlemeli.Standartlary we nusgalaryň ýagdaýyny ýazga alyň.

9.2.5Adaty çözgüt / nusga goşuň:Degişli guýulara 50 µl standart ergin ýa-da taýýarlanan nusga goşuň.50µl antikor erginini goşuň.Tabagy el bilen silkip, ýuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 25 at 30 minut inkubasiýa etmeli.

9.2.6Washuwmak:Gapagy ýuwaşlyk bilen aýyryň we suwuklygy guýulardan arassalaň we mikrotolkunlary 250µl suwuklandyrylan ýuwujy ergin (2-nji ergin) bilen 10s aralygynda 4-5 gezek ýuwuň.Galyndy suwy siňdiriji kagyz bilen siňdiriň (galan howa köpügi ulanylmadyk uç bilen ýok edilip bilner).

9.2.8.Ferment birleşmesi:Her guýa 100ml ferment konýugat erginini goşuň, tabagy el bilen silkip, ýuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 30 minut inkubasiýa ediň.Washuwmak ädimini gaýtalaň.

9.2.8Reňk:Her guýa 50µl ergin A we 50µl ergin goşuň.Tabagy el bilen silkip, ýuwaşlyk bilen garmaly we gapagy bilen 25 at 15 minut inkubasiýa ediň (12.8 seret).

9.2.9Ölçeg:Her guýa 50µl durmak çözgüdi goşuň.Tabagy el bilen silkip, ýuwaşlyk bilen garyşdyryň we howa boşlugyna 450nm-de sorulmagy ölçäň (450/630nm goşa tolkun uzynlygy bilen ölçemek teklip edilýär. Netijäni togtatmak çözgüdi goşulandan soň 5 minutyň içinde okaň.) (Şeýle hem göz bilen ölçäp bileris ELIASA guralynyň gysgaça çözgüdi bolmazdan)

Netijeler

10.1 göterimiň siňdirilmegi

Standartlar we nusgalar üçin alnan siňdiriş bahalarynyň ortaça bahalary birinji standartyň (nol standart) siňdiriş bahasy bilen bölünýär we 100% köpelýär.Şeýlelik bilen nol standart 100% deňdir we siňdiriş bahalary göterimlerde getirilýär.

Absorbsiýa (%) = B / B0 × 100%

B ——absorbance standarty (ýa-da nusga)

B0 —— sorulma nol standart

10.2 Adaty egrilik

Adaty egrini çyzmak üçin: ülňüleriň siňdiriş bahasyny y oky, flýukin standartlary ergininiň (ppb) konsentrasiýasynyň ýarym logarifmini rentgen oky hökmünde alyň.

---flumequineKalibrleme egrisinden okap bolýan her nusganyň (ppb) konsentrasiýasy, her nusganyň degişli eritmesi bilen köpeldilýär we nusganyň hakyky konsentrasiýasy alynýar.

ELISA toplumlaryny maglumatlary azaltmak üçin isleg boýunça üpjün edilip bilinjek ýörite programma üpjünçiligi döredildi.

11. Duýgurlyk, takyklyk we takyklyk

Duýgurlygy barlaň：0.3ppb

Bal nusgasynyň eritme faktory: 2

Ectionüze çykarmak çägi

Bal nusgasy ------------------------------------------------ -1ppb

Takyklyk

Bal nusgasy --------------------------------------------- 90 ± 20 %

Takyklyk

ELISA toplumynyň üýtgeýiş koeffisiýenti 10% -den az.

12. Üns beriň

12.1 Reagentler we nusgalar otag temperaturasyna (20-25 ℃) kadalaşdyrylmadyk bolsa, ülňüler we nusgalar üçin alnan siňdiriş bahalarynyň ortaça bahalary azalýar.

12.2 Şowsuz gaýtalanmazlyk üçin ädimleriň arasynda mikrotolkunlaryň guramagyna ýol bermäň we mikrotolkunlaryň eýesine degeniňizden soň indiki ädimiňizi işlediň.

12.3.Ulanylmazdan ozal her reagenti birleşdiriň.

12.4.Deriňizi 2M H.₂SO₄çözgüt.

12.5 Kitaplary köne ulanmaň.Dürli partiýalaryň reagentlerini çalyşmaň, sebäbi duýgurlygy peselder.

12.6 Saklamagyň ýagdaýy:

ELISA toplumlaryny 2-8 at derejesinde saklaň, doňmaň.Dynç alýan mikrotolkun plitalary, ähli inkubasiýa wagtynda göni gün şöhlesinden gaça duruň.Mikrotiter plitalaryny ýapmak maslahat berilýär.

12.7 Reagentleriň erbetleşmeginiň görkezijileri:

Substrat ergini reňk öwürse terk edilmelidir.

Nol standartyň siňdiriş bahasy (450 / 630nm) 0,5 (A450nm ＜ 0,5) -den pes bolsa, reagentler erbet bolup biler.

12.8 Reňkleme A çözgüdi we B çözgüdi goşulandan soň 15 minut gerek, we reňk kesgitlenip bilinmeýän bolsa inkubasiýa wagtyny 20 minutdan köpeldip bilersiňiz.Hiç haçan 25min-den geçmeli däl, tersine, inkubasiýa wagtyny dogry gysgaldyň.

12.9 Iň amatly reaksiýa temperaturasy 25 ℃.Higherokary ýa-da pes temperatura duýgurlygyň we siňdiriş bahalarynyň üýtgemegine getirer.

13. Saklamak

Saklamagyň ýagdaýy: 2-8 ℃.

Saklamak möhleti: 12 aý.