ผลิตภัณฑ์

หลักการทดสอบ

ชุดนี้ใช้เทคโนโลยี ELISA ที่มีการแข่งขันทางอ้อมหลุมไมโครไทเทอร์เคลือบด้วยแอนติเจนคู่ควบฟลูเมอควินสารตกค้างในตัวอย่างแข่งขันกับแอนติเจนที่เคลือบบนแผ่นไมโครไทเทอร์สำหรับแอนติบอดีหลังจากการเติมเอนไซม์ที่มีข้อความว่าแอนติบอดี สารตั้งต้น TMB จะถูกใช้เพื่อแสดงสีการดูดซับของตัวอย่างมีความสัมพันธ์เชิงลบกับเตตราไซคลีนที่อยู่ในนั้น หลังจากเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐาน คูณด้วยค่าเจือจางหลาย ๆ ครั้ง จะสามารถคำนวณปริมาณสารตกค้าง Flumequine ในตัวอย่างได้

แอพพลิเคชั่น

ชุดนี้สามารถใช้ในการวิเคราะห์เชิงปริมาณและคุณภาพของสารตกค้างฟลูมิควินในน้ำผึ้ง

ปฏิกิริยาข้าม

Flumequine …………………..……………………… 100%

วัสดุที่จำเป็น

อุปกรณ์

┅┅ไมโครไทเทอร์เพลทสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (450nm/630nm)

┅┅โฮโมจีไนเซอร์ หรือ สเตมเมอร์

┅┅เชคเกอร์

┅┅เครื่องผสม Vortex

┅┅เครื่องหมุนเหวี่ยง

┅┅เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ (ค่าความเหนี่ยวนำ: 0.01g)

┅┅Graduated pipette: 15ml

┅┅หลอดปิเปตแบบยาง

┅┅หลอดโพลีสไตรีนเซนติฟิวจ์: 15ml, 50ml

┅┅หลอดทดลองแก้ว：10ml

┅┅ไมโครปิเปต: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - มัลติปิเปต

รีเอเจนต์

┅┅n-เฮกเซน(AR)

┅┅เมทิลีนคลอไรด์(AR)

┅┅อะซิโตไนไทรล์ (AR)

┅┅น้ำปราศจากไอออน

----- กรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น (AR)

ส่วนประกอบชุด

● แผ่น Microtiter ที่มี 96 หลุมเคลือบด้วยแอนติเจน

● สารละลายมาตรฐาน (6 ขวด×1มล./ขวด)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● การควบคุมมาตรฐานความเข้มข้นสูง:(1ml/ขวด)

…………………………………………………......100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………….ฝาสีแดง

● สารละลายแอนติบอดี 7ml …………..……..….…..ฝาสีเขียว

● น้ำยา A 7ml……..…………………..………..ฝาสีขาว

● Solution B 7ml …………….…………..………… ฝาสีแดง

● Stop solution 7ml ……………………..………ฝาเหลือง

● 20Xน้ำยาล้างจานเข้มข้น 40ml

………………………………………..…..ฝาใส

●2X น้ำยาสกัด 50ml………………………… ฝาสีฟ้า

การเตรียมรีเอเจนต์

7.1 ตัวอย่างน้ำผึ้ง

สารละลาย 1 : 0.2 M สารละลายกรดไฮโดรคลอริก

น้ำหนัก 41.5ml กรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น เจือจางด้วยน้ำปราศจากไอออนถึง 500 มล.

แนวทางที่ 2: น้ำยาล้าง

เจือจางน้ำยาล้างจานเข้มข้นด้วยน้ำปราศจากไอออนในอัตราส่วนปริมาตร 1:19 ซึ่งจะใช้สำหรับล้างจานสารละลายที่เจือจางสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 ℃ เป็นเวลา 1 เดือน

สารละลาย3: สารละลายสกัด

เจือจางสารละลายสกัดเข้มข้น 2× กับน้ำปราศจากไอออนในอัตราส่วนปริมาตร 1:1 (หรือขึ้นอยู่กับความต้องการ) ซึ่งจะใช้สำหรับการสกัดตัวอย่างสารละลายที่เจือจางนี้สามารถเก็บไว้ได้นาน 1 เดือนที่อุณหภูมิ 4 ℃

การเตรียมตัวอย่าง

8.1 ประกาศและข้อควรระวังสำหรับผู้ใช้ก่อนดำเนินการ

(ก) โปรดใช้ทิปแบบใช้ครั้งเดียวในกระบวนการทดลอง และเปลี่ยนทิปเมื่อดูดซับรีเอเจนต์ที่แตกต่างกัน

(b) ตรวจสอบให้แน่ใจว่าเครื่องมือทดลองทั้งหมดสะอาด มิฉะนั้น จะส่งผลต่อผลการทดสอบ

8.2ตัวอย่างน้ำผึ้ง

----- ชั่งน้ำหนักตัวอย่างน้ำผึ้ง 2 ก. ± 0.05 ก. ในหลอดหมุนเหวี่ยงโพลีสไตรีนขนาด 50 มล.

----- เติมสารละลายกรดไฮโดรคลอริก 0.2 M 2 มล. (สารละลาย 1) กระแสน้ำวนเพื่อผสมให้สมบูรณ์ จากนั้นเติมเมทิลีนคลอไรด์ 8 มล. เขย่าด้วยเชคเกอร์เป็นเวลา 5 นาทีเพื่อให้ละลายหมด

-----ปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาที อย่างน้อย 3000g ที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃)

----- ถอดเฟสส่วนเกินออก นำสารละลายอินทรีย์ของสารตั้งต้น 2 มล. ไปใส่ในหลอดแก้วขนาด 10 มล. ทำให้สารตั้งต้นแห้งภายใต้อ่างน้ำที่มีการไหลของไนโตรเจน (50-60 ℃)

----- เติม n-hexane 1 มล. วอร์เท็กซ์เป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นเติมสารละลายสกัด 1 มล. (สารละลาย 3) วอร์เท็กซ์อีกครั้งเป็นเวลา 1 นาทีหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาที อย่างน้อย 3000g ที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃)

----- นำส่วนเหนือตะกอนออก ใช้ 50 มล. เพื่อตรวจวิเคราะห์

9. กระบวนการทดสอบ

9.1 แจ้งให้ทราบก่อนการทดสอบ

9.1.1 ตรวจสอบให้แน่ใจว่ารีเอเจนต์และไมโครเวลล์ทั้งหมดอยู่ที่อุณหภูมิห้อง (20-25°C)

9.1.2 คืนรีเอเจนต์ที่เหลือทั้งหมดไปที่ 2-8 ℃ทันทีหลังจากใช้งาน

9.1.3 การล้างไมโครเวลล์อย่างถูกต้องเป็นขั้นตอนที่สำคัญในกระบวนการวิเคราะห์เป็นปัจจัยสำคัญต่อความซ้ำซ้อนของการวิเคราะห์ ELISA

9.1.4 หลีกเลี่ยงแสงและปิดหลุมไมโครระหว่างการบ่ม

9.2 ขั้นตอนการทดสอบ

9.2.1 นำรีเอเจนต์ทั้งหมดออกมาที่อุณหภูมิห้อง (20-25℃) นานกว่า 30 นาที ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันก่อนใช้งาน

9.2.2 นำไมโครเวลล์ที่ต้องการออกและนำส่วนที่เหลือใส่ถุงซิปล็อคทันทีที่อุณหภูมิ 2-8 ℃

9.2.3 ควรอุ่นน้ำยาซักล้างที่เจือจางแล้วให้อยู่ในอุณหภูมิห้องก่อนใช้งาน

9.2.4ตัวเลข:หมายเลขทุกตำแหน่งของไมโครเวลล์ และมาตรฐานและตัวอย่างทั้งหมดควรทำซ้ำกันบันทึกมาตรฐานและตำแหน่งตัวอย่าง

9.2.5เพิ่มโซลูชัน/ตัวอย่างมาตรฐาน:เติมสารละลายมาตรฐานหรือตัวอย่างที่เตรียมไว้ 50 µl ลงในหลุมที่เกี่ยวข้องเติมสารละลายแอนติบอดี 50µlผสมเบา ๆ โดยการเขย่าจานด้วยมือและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25 ℃พร้อมฝาปิด

9.2.6ล้าง:ค่อยๆ ถอดฝาครอบออกและทำให้ของเหลวบริสุทธิ์ออกจากหลุม และล้างไมโครเวลด้วยน้ำยาล้างเจือจาง 250µl (สารละลาย 2) ในช่วงเวลา 10 วินาที เป็นเวลา 4-5 ครั้งดูดซับน้ำที่เหลือด้วยกระดาษซับ (สามารถกำจัดฟองอากาศที่เหลือได้ด้วยปลายที่ไม่ได้ใช้)

9.2.8.เอนไซม์คอนจูเกต:เติมเอนไซม์คอนจูเกต 100 มล. ในแต่ละหลุม ผสมเบา ๆ โดยการเขย่าจานด้วยมือและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25 ℃พร้อมฝาปิดทำซ้ำขั้นตอนการล้างอีกครั้ง

9.2.8สี:เติมสารละลาย A 50µl และสารละลาย B 50µl ลงในแต่ละหลุมผสมอย่างเบามือด้วยการเขย่าจานด้วยตนเอง และบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 25°C พร้อมฝาปิด (ดูข้อ 12.8)

9.2.9วัด:เติมสารละลายหยุด 50µl ลงในแต่ละหลุมผสมอย่างเบามือด้วยการเขย่าจานด้วยมือแล้ววัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรเทียบกับช่องว่างอากาศ (แนะนำให้วัดด้วยความยาวคลื่นคู่ที่ 450/630 นาโนเมตร อ่านผลภายใน 5 นาทีหลังจากเติมสารละลายหยุด) (เราสามารถวัดด้วยสายตาได้เช่นกัน โดยไม่ต้องหยุดการแก้ปัญหาโดยย่อจากเครื่องมือ ELIASA)

ผล

10.1 เปอร์เซ็นต์การดูดกลืนแสง

ค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงที่ได้จากมาตรฐานและตัวอย่างจะหารด้วยค่าการดูดกลืนแสงของมาตรฐานแรก (มาตรฐานศูนย์) และคูณด้วย 100%ดังนั้น ค่ามาตรฐานศูนย์จึงเท่ากับ 100% และค่าการดูดกลืนแสงจะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

การดูดซับ (%) = B/B0 ×100%

B —— มาตรฐานการดูดซับ (หรือตัวอย่าง)

B0 —— ค่าการดูดซับเป็นศูนย์มาตรฐาน

10.2 เส้นโค้งมาตรฐาน

ในการวาดเส้นโค้งมาตรฐาน: นำค่าการดูดกลืนแสงของมาตรฐานเป็นแกน y ซึ่งเป็นค่ากึ่งลอการิทึมของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานฟลูมิควิน (ppb) เป็นแกน x

---ที่ฟลูมควินความเข้มข้นของแต่ละตัวอย่าง (ppb) ซึ่งสามารถอ่านได้จากเส้นโค้งการสอบเทียบ จะถูกคูณด้วยผลคูณของการเจือจางที่สอดคล้องกันของแต่ละตัวอย่างที่ตามมา และจะได้ความเข้มข้นที่แท้จริงของตัวอย่าง

สำหรับการลดข้อมูลของชุด ELISA ซอฟต์แวร์พิเศษได้รับการพัฒนาซึ่งสามารถจัดเตรียมให้ตามคำขอ

11. ความไว ความแม่นยำ และความแม่นยำ

ทดสอบความไว：0.3ppb

ปัจจัยการเจือจางตัวอย่างน้ำผึ้ง: 2

ขีดจำกัดการตรวจจับ

ตัวอย่างน้ำผึ้ง------------------------------------------------ -1ppb

ความแม่นยำ

ตัวอย่างน้ำผึ้ง --------------------------------------------- 90±20 %

ความแม่นยำ

ค่าสัมประสิทธิ์การแปรผันของชุด ELISA น้อยกว่า 10%

12. ประกาศ

12.1 ค่าเฉลี่ยของค่าการดูดกลืนแสงที่ได้สำหรับมาตรฐานและตัวอย่างจะลดลงถ้ารีเอเจนต์และตัวอย่างไม่ได้รับการควบคุมที่อุณหภูมิห้อง (20-25 ℃)

12.2 ห้ามปล่อยให้หลุมไมโครเวลล์แห้งระหว่างขั้นตอนเพื่อหลีกเลี่ยงไม่สำเร็จซ้ำ และดำเนินการขั้นตอนต่อไปทันทีหลังจากแตะที่ยึดหลุมไมโคร

12.3.ทำให้น้ำยาแต่ละตัวเป็นเนื้อเดียวกันก่อนใช้

12.4.ปกป้องผิวของคุณให้ห่างจากจุดหยุดยา เพราะมันคือ 2M H₂SO₄สารละลาย.

12.5 อย่าใช้ชุดอุปกรณ์ที่ล้าสมัยอย่าแลกเปลี่ยนรีเอเจนต์ของชุดต่างๆ เพราะจะทำให้ความไวลดลง

12.6 สภาพการเก็บรักษา:

เก็บชุด ELISA ไว้ที่ 2-8 ℃ ห้ามแช่แข็งปิดผนึกแผ่น microwell ที่เหลือ หลีกเลี่ยงแสงแดดโดยตรงระหว่างการบ่มทั้งหมดแนะนำให้ปิดแผ่นไมโครไทเทอร์

12.7 ข้อบ่งชี้สำหรับรีเอเจนต์ที่ไม่ดี:

ควรทิ้งสารละลายพื้นผิวหากเปลี่ยนสี

รีเอเจนต์อาจเสียได้หากค่าการดูดกลืนแสง (450/630 นาโนเมตร) ของมาตรฐานศูนย์น้อยกว่า 0.5 (A450nm <0.5)

12.8 ปฏิกิริยาการเกิดสีต้องใช้เวลา 15 นาทีหลังจากเติมสารละลาย A และสารละลาย B และคุณสามารถยืดเวลาการบ่มตั้งแต่ 20 นาทีขึ้นไปหากสีอ่อนเกินไปที่จะกำหนดได้ไม่เกิน 25 นาที ตรงกันข้าม ลดเวลาการบ่มให้เหมาะสม

12.9 อุณหภูมิในการทำปฏิกิริยาที่เหมาะสมคือ 25℃อุณหภูมิที่สูงขึ้นหรือต่ำลงจะทำให้ค่าความไวแสงและค่าการดูดกลืนแสงเปลี่ยนไป

13. ที่เก็บของ

สภาพการเก็บรักษา: 2-8 ℃

ระยะเวลาการเก็บรักษา: 12 เดือน