маҳсулот

Принсипи санҷиш

Ин маҷмӯа ба технологияи бавосита-рақобати ELISA асос ёфтааст.Чоҳҳои микротитрҳо бо антигени пайвасткунанда пӯшонида шудаанд.Флюмекинбоқимонда дар намуна бо антигене, ки дар лавҳаи микротитр барои антитело пӯшида шудааст, рақобат мекунад.Пас аз илова кардани фермент бо нишони зидди антитело, субстрати TMB барои нишон додани ранг истифода мешавад.Азхудкунии намуна ба тетрациклин дар он манфӣ алоқаманд аст, пас аз муқоиса бо каҷи стандартӣ, ки бо чандкаратаи маҳлул зарб карда мешавад, миқдори боқимондаи флюмекинро дар намуна ҳисоб кардан мумкин аст.

Барномаҳо

Ин маҷмӯаро дар таҳлили миқдорӣ ва сифатии пасмондаҳои флумекин дар асал истифода бурдан мумкин аст.

Реаксияҳои байниҳамдигарӣ

Flumequine ……………………………………………… 100%

Маводҳои зарурӣ

Таҷҳизот

┅┅спектрофотометри плитаи микротитрӣ (450нм/630нм)

┅┅Гомогенизатор ё меъда

┅┅Шакер

┅┅ Миксери гирдоби

┅┅центрифуга

┅┅Тавозуни таҳлилӣ (индуктивӣ: 0,01г)

┅┅ Пипеткаи градиентӣ: 15мл

┅┅ Лампаи пипеткаи резинӣ

┅┅Туби центрифугаи полистирол: 15мл, 50мл

┅┅ найчаи озмоишии шиша: 10 мл

┅┅Микропипетҳо: 20мл-200мл, 100мл -10000мл,

250 мл - мултипипетка

Реактивхо

┅┅n-гексан (AR)

┅┅Хлориди метилен (AR)

┅┅Ацетонитрил (AR)

┅┅Оби деионизатсияшуда

----- Кислотаи гидрохлории консентратӣ (AR)

Компонентҳои маҷмӯа

● Пластинкаи микротитрӣ бо 96 чоҳ, ки бо антиген фаро гирифта шудааст

● Маҳлулҳои стандартӣ (6 шиша × 1 мл/шиша)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Назорати стандартии консентратсияи баланд:(1 мл/шиша)

……………………………………………………100ppb

● Конъюгати фермент 12мл…………………………………………………………………………………………………………………………………

● Маҳлули антитело 7мл …………..……….….…..сарпӯши сабз

● Маҳлули A 7мл………………………………………….

● Маҳлули В 7мл …………….…………..………… сарпӯши сурх

● Маҳлули қатъи 7 мл ………………………………………………………………………………………………

● 20X Маҳлули шустани консентратӣ 40 мл

………………………………………………..шаффоф cap

●2X Маҳлули экстраксионӣ 50мл………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ● ●2X сарпӯши кабуд

Тайёр кардани реактивҳо

7.1 Намунаи асал

Маҳлули 1: 0,2 М маҳлули кислотаи гидрохлорид

Вазнаш 41,5 мл кислотаи консентратсионии гидрохлорид, бо оби деионизатсияшуда то 500 мл маҳлул кунед.

Ҳалли 2: Маҳлули шустан

Маҳлули консентратсионии шустушӯйро бо оби деионизатсияшуда дар таносуби ҳаҷми 1:19, ки барои шустани плитаҳо истифода мешавад, ҳал кунед.маҳлули маҳлулро дар ҳарорати 4℃ барои 1 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст.

Ҳалли3: маҳлули истихроҷ

Маҳлули 2× консентратсияи экстраксияро бо оби деионизатсияшуда дар ҳаҷми 1:1 (ё вобаста ба талабот), ки барои истихроҷи намуна истифода мешавад, ҳал кунед.Ин маҳлули маҳлулшударо дар ҳарорати 4℃ барои 1 моҳ нигоҳ доштан мумкин аст.

Омодасозии намуна

8.1 Огоҳӣ ва чораҳои эҳтиётӣ барои истифодабарандагон пеш аз амалиёт

(a) Лутфан, дар раванди озмоиш маслиҳатҳои якдафъаинаро истифода баред ва ҳангоми азхудкунии реагентҳои гуногун маслиҳатҳоро иваз кунед.

(б) Боварӣ ҳосил кунед, ки ҳама асбобҳои таҷрибавӣ тозаанд, вагарна он ба натиҷаи санҷиш таъсир мерасонад.

8.2Намунаи асал

----- Намунаи 2 г ± 0,05 г асалро дар найчаи центрифугаи полистироли 50 мл тарозу кунед,

-----Махлули 2мл 0,2М кислотаи гидрохлоридро (Махлули 1) илова кунед, гирдоб карда, онро пурра омехта кунед, баъд 8мл хлориди метиленро илова кунед, бо шейкер 5 дакика мечунбонед, то пурра хал шавад;

----- Центрифуга барои 10 дақиқа, ҳадди аққал 3000 г дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃);

----- Фазаи супернатантро хориҷ кунед, 2 мл маҳлули органикии субстратро ба найчаи шишагии 10 мл гиред. Зерзаминро дар ваннаи оби ҷараёни нитроген (50-60 ℃) хушк кунед.

----- 1 мл н-гексан илова кунед, гирдоби 30 сония кунед, сипас 1 мл маҳлули экстракциониро (ҳалли 3) илова кунед, боз 1 дақиқа гирдоб кунед.Центрифуга барои 5 дақиқа, ҳадди аққал 3000 г дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃);

----- Фазаи супернатантро хориҷ кунед, барои таҳлил 50 мл гиред;

9. Раванди таҳлил

9.1 Огоҳӣ пеш аз ташхис

9.1.1 Боварӣ ҳосил кунед, ки ҳама реактивҳо ва қуттиҳои хурд дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃) мебошанд.

9.1.2 Ҳама реактивҳои боқимондаро фавран пас аз истифода ба ҳарорати 2-8 ℃ баргардонед.

9.1.3 Дуруст шустани қубурҳои хурд қадами муҳим дар раванди таҳлил аст;он омили муҳими такрории таҳлили ELISA мебошад.

9.1.4 Ҳангоми инкубатсия аз рӯшноӣ худдорӣ кунед ва чоҳҳои хурдро пӯшонед.

9.2 Қадамҳои санҷиш

9.2.1 Ҳама реактивҳоро дар ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃) барои зиёда аз 30 дақиқа берун кунед, пеш аз истифода гомогенизатсия кунед.

9.2.2 Хуруҷҳои лозимиро берун кунед ва боқимондаро дар ҳарорати 2-8 ℃ фавран ба халтаи қуфл баргардонед.

9.2.3 Маҳлули шустани маҳлулшуда бояд пеш аз истифода гарм карда шавад, то дар ҳарорати хонагӣ бошад.

9.2.4Рақам:Ҳар як мавқеъи микрочоҳиро рақамгузорӣ кунед ва ҳама стандартҳо ва намунаҳо бояд ду маротиба иҷро карда шаванд.Мавқеъҳои стандартҳо ва намунаҳоро сабт кунед.

9.2.5Иловаи ҳалли стандартӣ/намуна:Ба чоҳҳои мувофиқ 50 мкл маҳлули стандартӣ ё намунаи омодашударо илова кунед.50мл маҳлули антитело илова кунед.Табақро ба таври дастӣ ҷунбонда, мулоим омехта кунед ва дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 25 ℃ бо сарпӯш инкубатсия кунед.

9.2.6Шустан:Сарпӯшро бодиққат бардоред ва моеъро аз чоҳҳо тоза кунед ва микрочайкаҳоро бо маҳлули шустани 250 мкл (маҳлули 2) бо фосилаи 10 сония 4-5 маротиба бишӯед.Оби боқимондаро бо коғази абсорбент ҷаббида кунед (ҳубобчаи ҳавои боқимондаро бо нӯги истифоданашуда нест кардан мумкин аст).

9.2.8.Конъюгати фермент:Ба ҳар як чоҳ маҳлули конъюгатии ферментро 100 мл илова кунед, бо ларзиши табақи дастӣ мулоим омехта кунед ва дар давоми 30 дақиқа дар ҳарорати 25 ℃ бо сарпӯш инкубатсия кунед.Қадами шустанро боз такрор кунед.

9.2.8Ранги:Ба ҳар як чоҳ 50 мл маҳлули А ва 50 мл маҳлули В илова кунед.Табақро ба таври дастӣ ҷунбонда, мулоим омехта кунед ва дар давоми 15 дақиқа дар ҳарорати 25℃ бо сарпӯш инкубатсия кунед (ниг. 12.8).

9.2.9Андоза:Ба ҳар як чоҳ 50 мкл маҳлули қатъкунанда илова кунед.Тавассути дастӣ ҷунбонидани табақро бо нарм омехта кунед ва абсорбенсро дар 450 нм нисбат ба бланкаи ҳаво чен кунед (Ин ченак бо дарозии мавҷи дугонаи 450/630 нм тавсия дода мешавад. Натиҷаро дар давоми 5 дақиқа пас аз илова кардани маҳлули таваққуф хонед. ) (Мо инчунин метавонем аз рӯи чашм чен кунем. бе ҳалли қатъ дар кӯтоҳи асбоби ELIASA)

Натиҷаҳо

10.1 Фоизи ҷаббида

Қиматҳои миёнаи қимматҳои ҷаббида барои стандартҳо ва намунаҳо ба арзиши абсорбенти стандарти якум (стандарти сифр) тақсим карда, ба 100% зарб карда мешаванд.Ҳамин тариқ, стандарти сифр ба 100% баробар карда мешавад ва арзишҳои ҷаббида бо фоизҳо оварда шудаанд.

Абсорбент (%) = B/B0 ×100%

B ——стандарти азхудкунӣ (ё намуна)

В0 ——стандарти сифри азхудкунй

10.2 Каҷи стандартӣ

Барои кашидани каҷи стандартӣ: Қимати азхудкунии стандартҳоро ҳамчун меҳвари Y, ним логарифмикии консентратсияи маҳлули стандартҳои флумекин (ppb) ҳамчун меҳвари x гиред.

--- Дарфлумекинконсентратсияи ҳар як намуна (ppb), ки онро аз каҷи калибрченкунӣ хондан мумкин аст, ба миқдори мувофиқи маҳлули ҳар як намунаи пайгирӣ зарб карда мешавад ва консентратсияи воқеии намуна ба даст оварда мешавад.

Барои кам кардани маълумоти маҷмӯаҳои ELISA, нармафзори махсус таҳия шудааст, ки онро мувофиқи дархост пешниҳод кардан мумкин аст.

11. Ҳассосият, дақиқ ва дақиқ

Ҳассосияти санҷиш:0.3ppb

Омили ҳалкунии намунаи асал: 2

Маҳдудияти ошкор

Намунаи асал ---------------------------------------------- -1ppb

Дақиқӣ

Намунаи асал --------------------------------------------- 90±20 %

Дақиқӣ

Коэффисиенти тағирёбии маҷмӯаи ELISA камтар аз 10% аст.

12. Огоҳӣ

12.1 Агар реагентҳо ва намунаҳо то ҳарорати хонагӣ (20-25 ℃) танзим нашуда бошанд, қиматҳои миёнаи қимматҳои ҷаббида барои стандартҳо ва намунаҳо кам карда мешаванд.

12.2 Нагузоред, ки чоҳҳои хурд дар байни қадамҳо хушк шаванд, то такрори бемуваффақиятро пешгирӣ кунед ва қадами ояндаро фавран пас аз ламс кардани дорандаи чоҳҳо иҷро кунед.

12.3.Пеш аз истифода ҳар як реагентро яксон кунед.

12.4.Пӯсти худро аз маҳлули таваққуф дур нигоҳ доред, зеро он 2M H аст₂SO₄ҳалли.

12.5 Маҷмӯаҳои кӯҳнаро истифода набаред.Реактивҳои партияҳои гуногунро иваз накунед, зеро он ҳассосиятро паст мекунад.

12.6 Ҳолати нигоҳдорӣ:

Маҷмӯаҳои ELISA -ро дар ҳарорати 2-8 ℃ нигоҳ доред, ях накунед.Лавҳаҳои хурди чуқурро мӯҳр кунед, дар давоми ҳама инкубатсияҳо аз нурҳои рости офтоб худдорӣ намоед.Пӯшидани лавҳаҳои микротитр тавсия дода мешавад.

12.7 Нишондодҳо барои бад шудани реактивҳо:

Маҳлули субстрат бояд тарк карда шавад, агар он рангҳоро табдил диҳад.

Агар арзиши абсорбент (450/630нм) аз стандарти сифр камтар аз 0,5 (A450nm＜0,5) бошад, реагентҳо метавонанд бад шаванд.

12.8 Реаксияи рангкунӣ пас аз илова кардани Маҳлули А ва Маҳлули В 15 дақиқа лозим аст. Ва шумо метавонед вақти инкубатсияро аз 20 дақиқа то бештар дароз кунед, агар ранг барои муайян кардан хеле сабук бошад.Ҳеҷ гоҳ аз 25 дақиқа зиёд нашавед, баръакс, вақти инкубатсияро дуруст кӯтоҳ кунед.

12.9 Ҳарорати оптималии реаксия 25℃ аст.Ҳарорати баланд ё паст боиси тағирёбии арзишҳои ҳассосият ва ҷаббида мегардад.

13. Нигоҳдорӣ

Ҳолати нигоҳдорӣ: 2-8 ℃.

Муҳлати нигоҳдорӣ: 12 моҳ.