ఉత్పత్తి

1. నేపథ్యం

టైలోసిన్మాక్రోలైడ్ యాంటీబయాటిక్, ఇది ప్రధానంగా యాంటీ బాక్టీరియల్ మరియు యాంటీ-మైకోప్లాస్మాగా వర్తించబడుతుంది.ఈ ఔషధం కొన్ని సమూహాలలో తీవ్రమైన దుష్ప్రభావాలకు దారితీయవచ్చు కాబట్టి కఠినమైన MRLలు స్థాపించబడ్డాయి.

ఈ కిట్ ELISA సాంకేతికతపై ఆధారపడిన కొత్త ఉత్పత్తి, ఇది సాధారణ సాధన విశ్లేషణతో పోలిస్తే వేగవంతమైనది, సులభమైనది, ఖచ్చితమైనది మరియు సున్నితమైనది మరియు ఒక ఆపరేషన్‌లో 1.5 గంటలు మాత్రమే అవసరం, ఇది ఆపరేషన్ లోపం మరియు పని తీవ్రతను గణనీయంగా తగ్గిస్తుంది.

2. పరీక్ష సూత్రం

ఈ కిట్ పరోక్ష-పోటీ ELISA సాంకేతికతపై ఆధారపడి ఉంటుంది.మైక్రోటైటర్ బావులు కప్లింగ్ యాంటిజెన్‌తో పూత పూయబడి ఉంటాయి.నమూనాలోని టైలోసిన్ అవశేషాలు యాంటీబాడీ కోసం మైక్రోటైటర్ ప్లేట్‌పై పూసిన యాంటిజెన్‌తో పోటీపడతాయి.యాంటీ-యాంటీబాడీ అని లేబుల్ చేయబడిన ఎంజైమ్ జోడించిన తర్వాత, రంగును చూపించడానికి TMB సబ్‌స్ట్రేట్ ఉపయోగించబడుతుంది.నమూనా యొక్క శోషణం దానిలోని టైలోసిన్ నివాసానికి ప్రతికూలంగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది, స్టాండర్డ్ కర్వ్‌తో పోల్చిన తర్వాత, పలుచన కారకంతో గుణిస్తే, నమూనాలోని టైలోసిన్ అవశేషాల పరిమాణాన్ని లెక్కించవచ్చు.

3. అప్లికేషన్లు

జంతువుల కణజాలం (కోడి, పంది మాంసం, బాతు) మరియు పాలు, తేనె, గుడ్డు మొదలైన వాటిలో టైలోసిన్ అవశేషాల పరిమాణాత్మక మరియు గుణాత్మక విశ్లేషణలో ఈ కిట్‌ను ఉపయోగించవచ్చు.

4. క్రాస్ రియాక్షన్స్

టైలోసిన్………………………………………………..100%

టిల్మికోసిన్………………………………………… 2%

5. అవసరమైన పదార్థాలు

5.1 పరికరాలు:

----మైక్రోటైటర్ ప్లేట్ స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (450nm/630nm)

----రోటరీ ఆవిరిపోరేటర్ లేదా నైట్రోజన్ ఎండబెట్టే సాధనాలు

----హోమోజెనైజర్

----షేకర్

---- సెంట్రిఫ్యూజ్

----విశ్లేషణ సంతులనం (ఇండక్టెన్స్: 0.01గ్రా)

----గ్రాడ్యుయేట్ పైపెట్: 10ml

----రబ్బరు పైపెట్ బల్బ్

----వాల్యూమెట్రిక్ ఫ్లాస్క్: 10మి.లీ

----పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లు: 50మి.లీ

----మైక్రోపిపెట్‌లు: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-మల్టిపిపెట్

5.2 కారకాలు:

----సోడియం హైడ్రాక్సైడ్ (NaOH, AR)

----సోడియం బైకార్బోనేట్ (NaHCO_3,AR)

---- సోడియం కార్బోనేట్ (NaCO₃, AR)

----ట్రైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్ (AR)

---- ఎసిటోనిట్రైల్ (AR)

----ఇథైల్ అసిటేట్ (AR)

┅┅ఎన్-హెక్సేన్ (AR)

---- డీయోనైజ్డ్ నీరు

6. కిట్ భాగాలు

l యాంటిజెన్‌తో పూసిన 96 బావులతో మైక్రోటైటర్ ప్లేట్

l ప్రామాణిక పరిష్కారాలు (5 సీసాలు, 1ml/బాటిల్)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l స్పైకింగ్ ప్రామాణిక నియంత్రణ: (1ml/బాటిల్)1ppm

l ఎంజైమ్ కంజుగేట్ 1ml………………….. రెడ్ క్యాప్

l యాంటీబాడీ సొల్యూషన్ 7ml.......................... గ్రీన్ క్యాప్

l సొల్యూషన్ A 7ml……………………………….. వైట్ క్యాప్

l సొల్యూషన్ B 7ml.............................................. రెడ్ క్యాప్

l స్టాప్ సొల్యూషన్ 7ml............................................ పసుపు టోపీ

l 20× గాఢమైన వాష్ ద్రావణం 40ml

………………………………… పారదర్శక టోపీ

l 4× కేంద్రీకృత వెలికితీత పరిష్కారం 50ml

…………………………………………….నీలం టోపీ

7. కారకాల తయారీ:

పరిష్కారం 1:0.1mol/L NaOH పరిష్కారం

0.4g NaOH నుండి 100ml డీయోనైజ్డ్ నీరు మరియు పూర్తిగా కలపండి.

పరిష్కారం 2: 1mol/L NaOH పరిష్కారం

4g NaOH నుండి 100ml డీయోనైజ్డ్ వాటర్ బరువు మరియు పూర్తిగా కలపండి.

పరిష్కారం 3: కార్బోనేట్ బఫర్ ఉప్పు

పరిష్కారం1: 0.2M PB

Na యొక్క 51.6g కరిగించండి₂HPO₄·12H₂O, NaH యొక్క 8.7గ్రా₂PO₄·2H₂O డీయోనైజ్డ్ నీటితో మరియు 1000ml వరకు పలుచన చేయండి.

పరిష్కారం2: సంగ్రహణ పరిష్కారం

2×సాంద్రీకృత సంగ్రహణ ద్రావణాన్ని డీయోనైజ్డ్ నీటితో 1:1 వాల్యూమ్ నిష్పత్తిలో కరిగించండిఉదా 10ml 2× వెలికితీత ద్రావణం + 10ml డీయోనైజ్డ్ నీరు), ఇది నమూనా వెలికితీత కోసం ఉపయోగించబడుతుంది,ఈ ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద 1 నెల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.

పరిష్కారం3: వాష్ సొల్యూషన్

1:19 వాల్యూమ్ నిష్పత్తిలో డీయోనైజ్డ్ నీటితో 20× గాఢమైన వాష్ ద్రావణాన్ని కరిగించండి.ఉదా 5ml 20×వాష్ ద్రావణం + 95ml డీయోనైజ్డ్ వాటర్), ఇది ప్లేట్లు కడగడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.ఈ ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద 1 నెల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.

8. నమూనా సన్నాహాలు

8.1 ఆపరేషన్ ముందు నోటీసు మరియు జాగ్రత్తలు:

(ఎ) దయచేసి ప్రయోగ ప్రక్రియలో ఒక-ఆఫ్ చిట్కాలను ఉపయోగించండి మరియు విభిన్న రియాజెంట్‌ను గ్రహించినప్పుడు చిట్కాలను మార్చండి.

(బి) అన్ని సాధనాలు శుభ్రంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

(సి) కణజాల నమూనాను ఫ్రీజ్‌లో ఉంచండి.

(డి) సిద్ధం చేసిన నమూనాను ఒకేసారి పరీక్ష కోసం ఉపయోగించాలి.

8.2 జంతు కణజాలం (కోడి, పంది మాంసం మొదలైనవి)

----హోమోజెనైజర్‌తో నమూనాను సజాతీయపరచండి;

----50ml పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లో 2.0±0.05g హోమోజెనేట్ తీసుకోండి;0.2M PB యొక్క 2ml జోడించండి (పరిష్కారం1) , కరిగించడానికి షేక్ చేసి, ఆపై 8ml ఇథైల్ అసిటేట్ వేసి 3నిమిషాల పాటు తీవ్రంగా షేక్ చేయండి;

----విభజన కోసం సెంట్రిఫ్యూజ్: 3000g / పరిసర ఉష్ణోగ్రత / 5నిమి.

---- 4ml సూపర్‌నాటెంట్ ఆర్గానిక్ ఫేజ్‌ని 10ml గ్లాస్ ట్యూబ్‌లోకి బదిలీ చేయండి, నైట్రోజన్ గ్యాస్ స్ట్రీమ్ కింద 50-60℃ నీటి స్నానంతో ఆరబెట్టండి;

----పొడి మిగులును 1ml n-హెక్సేన్‌తో కరిగించండి, కరిగిపోయేలా 30s వరకు సుడిగుండం, ఆపై 1ml వెలికితీత ద్రావణాన్ని జోడించండి (పరిష్కారం2), 1నిమి సుడి.వేరు చేయడానికి సెంట్రిఫ్యూజ్: 3000g / పరిసర ఉష్ణోగ్రత / 5నిమి

---- సూపర్‌నాటెంట్ n-హెక్సేన్ దశను తొలగించండి;పరీక్ష కోసం సబ్‌స్ట్రేట్ సజల దశలో 50μl తీసుకోండి.

పలుచన కారకం: 1

8.2 పాలు

----100μl పచ్చి పాల నమూనా తీసుకోండి, 900μl వెలికితీత ద్రావణంతో కలపండి (పరిష్కారం2), మరియు పూర్తిగా కలపాలి.

---- పరీక్ష కోసం సిద్ధం చేసిన ద్రావణంలో 50μl తీసుకోండి.

పలుచన కారకం: 10

9. పరీక్ష ప్రక్రియ

9.1 పరీక్షకు ముందు గమనించండి

9.1.1అన్ని కారకాలు మరియు మైక్రోవెల్‌లు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

9.1.2మిగిలిన అన్ని రియాజెంట్లను 2-8కి తిరిగి ఇవ్వండి℃ఉపయోగించిన వెంటనే.

9.1.3మైక్రోవెల్‌లను సరిగ్గా కడగడం అనేది పరీక్ష ప్రక్రియలో ఒక ముఖ్యమైన దశ;ELISA విశ్లేషణ యొక్క పునరుత్పత్తికి ఇది కీలకమైన అంశం.

9.1.4 ఎకాంతిని రద్దు చేయండి మరియు పొదిగే సమయంలో మైక్రోవెల్‌లను కవర్ చేయండి.

9.2 పరీక్ష దశలు

9.2.1 గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) 30 నిమిషాల కంటే ఎక్కువ సేపు అన్ని రియాజెంట్‌లను బయటకు తీయండి, ఉపయోగించే ముందు శాంతముగా షేక్ చేయండి.

9.2.2 అవసరమైన మైక్రోవెల్‌లను పొందండి మరియు మిగిలిన వాటిని వెంటనే 2-8℃ వద్ద జిప్-లాక్ బ్యాగ్‌లోకి తిరిగి ఇవ్వండి.

9.2.3 పలచబరిచిన వాష్ ద్రావణాన్ని ఉపయోగించే ముందు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉండేలా తిరిగి వేడి చేయాలి.

9.2.4సంఖ్య:ప్రతి మైక్రోవెల్ స్థానాలను లెక్కించారు మరియు అన్ని ప్రమాణాలు మరియు నమూనాలు నకిలీలో అమలు చేయబడాలి.ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల స్థానాలను రికార్డ్ చేయండి.

9.2.5Add ప్రామాణిక పరిష్కారం/నమూనా మరియు యాంటీబాడీ పరిష్కారం: 50µl ప్రామాణిక ద్రావణాన్ని జోడించండి(((కిట్ అందించబడింది)) లేదా సంబంధిత బావులకు నమూనా సిద్ధం చేయండి.50µl యాంటీబాడీ ద్రావణాన్ని జోడించండి(కిట్ అందించబడింది)ప్లేట్‌ను మాన్యువల్‌గా షేక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 37℃ వద్ద 30నిమిషాల పాటు పొదిగేది.

9.2.6కడగండి: కవర్‌ను సున్నితంగా తీసివేసి, బావుల నుండి ద్రవాన్ని శుద్ధి చేసి, మైక్రోవెల్‌లను 250µl పలుచన చేసిన వాష్ ద్రావణంతో శుభ్రం చేయండి (పరిష్కారం3) 4-5 సార్లు 10 సెకన్ల వ్యవధిలో.శోషక కాగితంతో అవశేష నీటిని పీల్చుకోండి (మిగిలిన గాలి బుడగను ఉపయోగించని చిట్కాతో తొలగించవచ్చు).

9.2.7ఎంజైమ్ కంజుగేట్ జోడించండి: 100ml ఎంజైమ్ కంజుగేట్ ద్రావణాన్ని జోడించండి(కిట్ అందించబడింది) ప్రతి బావికి, మెత్తగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 37℃ వద్ద 30 నిమిషాలు పొదిగేది.మళ్ళీ వాష్ దశను పునరావృతం చేయండి.

9.2.8కలరింగ్: 50µl ద్రావణం A(కిట్ అందించబడింది) మరియు 50µl ద్రావణం B(కిట్ అందించబడింది) ప్రతి బావికి.మెత్తగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 37 ℃ వద్ద 15 నిమిషాలు పొదిగేది.

9.2.9కొలత: స్టాప్ సొల్యూషన్‌లో 50µl జోడించండి(కిట్ అందించబడింది) ప్రతి బావికి.సున్నితంగా కలపండి మరియు 450nm వద్ద శోషణను కొలవండి (ఇది 450/630nm ద్వంద్వ-తరంగదైర్ఘ్యంతో కొలవాలని సూచించబడింది. స్టాప్ సొల్యూషన్ జోడించిన తర్వాత 5 నిమిషాలలోపు ఫలితాన్ని చదవండి).

10. ఫలితాలు

10.1 శాతం శోషణ

ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు మొదటి ప్రమాణం (సున్నా ప్రమాణం) యొక్క శోషణ విలువతో విభజించబడ్డాయి మరియు 100% గుణించబడతాయి.ఈ విధంగా సున్నా ప్రమాణం 100%కి సమానంగా చేయబడుతుంది మరియు శోషణ విలువలు శాతాలలో కోట్ చేయబడతాయి.

B

శోషణం (%) = —— × 100%

B0

B ——శోషణ ప్రమాణం (లేదా నమూనా)

B0 ——శోషణ సున్నా ప్రమాణం

10.2 ప్రామాణిక వక్రత

----ప్రామాణిక వక్రరేఖను గీయడానికి: ప్రమాణాల శోషణ విలువను y-యాక్సిస్‌గా, టైలోసిన్ స్టాండర్డ్స్ సొల్యూషన్ (ppb) యొక్క గాఢత యొక్క సెమీ లాగరిథమిక్ x-యాక్సిస్‌గా తీసుకోండి.

----ప్రతి నమూనా యొక్క టైలోసిన్ సాంద్రత (ppb), ఇది అమరిక వక్రరేఖ నుండి చదవబడుతుంది, అనుసరించిన ప్రతి నమూనా యొక్క సంబంధిత పలుచన కారకం ద్వారా గుణించబడుతుంది మరియు నమూనా యొక్క వాస్తవ సాంద్రత పొందబడుతుంది.

దయచేసి గుర్తించు:

డేటా విశ్లేషణ కోసం ప్రత్యేక సాఫ్ట్‌వేర్ అభివృద్ధి చేయబడింది, ఇది అభ్యర్థనపై అందించబడుతుంది.

11. సున్నితత్వం, ఖచ్చితత్వం మరియు ఖచ్చితత్వం

పరీక్ష సున్నితత్వం:1.5ppb

గుర్తింపు పరిమితి:

జంతు కణజాలం …………………………………………………… 1.5ppb పాలు ………………………………………………………..15ppb ఖచ్చితత్వం:

జంతు కణజాలం ………………………………………… 80 ± 15%

పాలు ……………………………………………………… 80 ± 10%

ఖచ్చితత్వం:

ELISA కిట్ యొక్క వైవిధ్య గుణకం 10% కంటే తక్కువ.

12. గమనించండి

12.1 రియాజెంట్‌లు మరియు నమూనాలు గది ఉష్ణోగ్రత (20-25℃)కి నియంత్రించబడకపోతే ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు తగ్గించబడతాయి.

12.2 విజయవంతం కాని పునరుత్పత్తిని నివారించడానికి దశల మధ్య మైక్రోవెల్‌లను పొడిగా అనుమతించవద్దు మరియు మైక్రోవెల్స్ హోల్డర్‌ను నొక్కిన వెంటనే తదుపరి దశను ఆపరేట్ చేయండి.

12.3 ఉపయోగం ముందు ప్రతి రియాజెంట్‌ను సున్నితంగా షేక్ చేయండి.

12.4 మీ చర్మాన్ని 0.5MH స్టాప్ సొల్యూషన్ నుండి దూరంగా ఉంచండి₂SO₄పరిష్కారం.

12.5 కాలం చెల్లిన కిట్‌లను ఉపయోగించవద్దు.వేర్వేరు బ్యాచ్‌ల రియాజెంట్‌లను మార్పిడి చేయవద్దు, లేకుంటే అది సున్నితత్వాన్ని తగ్గిస్తుంది.

12.6 ELISA కిట్‌లను 2-8℃ వద్ద ఉంచండి, స్తంభింపజేయవద్దు.సీల్ రెస్ట్ మైక్రోవెల్ ప్లేట్లు, అన్ని పొదిగే సమయంలో నేరుగా సూర్యరశ్మిని నివారించండి.మైక్రోటైటర్ ప్లేట్‌లను కవర్ చేయడం సిఫార్సు చేయబడింది.

12.7 సబ్‌స్ట్రేట్ ద్రావణం రంగులు మారితే వదిలివేయాలి.సున్నా ప్రమాణం యొక్క శోషణ విలువ (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) కంటే తక్కువగా ఉంటే రియాజెంట్‌లు చెడ్డవి కావచ్చు.

12.8 సొల్యూషన్ A మరియు సొల్యూషన్ B కలిపిన తర్వాత కలరేషన్ రియాక్షన్‌కు 15 నిమిషాలు అవసరం. మరియు రంగు చాలా తేలికగా ఉంటే, మీరు పొదిగే సమయ పరిధులను 20నిమి లేదా అంతకంటే ఎక్కువ వరకు పొడిగించవచ్చు.30 నిమిషాలకు మించకూడదు, దీనికి విరుద్ధంగా, పొదిగే సమయాన్ని సరిగ్గా తగ్గించండి.

12.9 సరైన ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రత 37℃.ఎక్కువ లేదా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సున్నితత్వం మరియు శోషణ విలువల మార్పులకు దారి తీస్తుంది.

13. నిల్వ

నిల్వ పరిస్థితి: 2-8℃.

నిల్వ కాలం: 12 నెలలు.