ఉత్పత్తి

పరీక్ష సూత్రం

ఈ కిట్ పరోక్ష-పోటీ ELISA సాంకేతికతపై ఆధారపడి ఉంటుంది.మైక్రోటైటర్ బావులు కప్లింగ్ యాంటిజెన్‌తో పూత పూయబడి ఉంటాయి.ఫ్లూమెక్విన్నమూనాలోని అవశేషాలు యాంటీబాడీ కోసం మైక్రోటైటర్ ప్లేట్‌పై పూసిన యాంటిజెన్‌తో పోటీపడతాయి.యాంటీ-యాంటీబాడీ అని లేబుల్ చేయబడిన ఎంజైమ్ జోడించిన తర్వాత, రంగును చూపించడానికి TMB సబ్‌స్ట్రేట్ ఉపయోగించబడుతుంది.నమూనా యొక్క శోషణం దానిలోని టెట్రాసైక్లిన్ నివాసానికి ప్రతికూలంగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది, స్టాండర్డ్ కర్వ్‌తో పోల్చిన తర్వాత, పలుచన మల్టిపుల్‌తో గుణిస్తే, నమూనాలోని ఫ్లూమెక్విన్ అవశేషాల పరిమాణాన్ని లెక్కించవచ్చు.

అప్లికేషన్లు

తేనెలోని ఫ్లూమెక్విన్ అవశేషాల పరిమాణాత్మక మరియు గుణాత్మక విశ్లేషణలో ఈ కిట్‌ను ఉపయోగించవచ్చు.

క్రాస్ రియాక్షన్స్

ఫ్లూమెక్విన్ …………………………………………… 100%

అవసరమైన పదార్థాలు

పరికరాలు

┅┅మైక్రోటైటర్ ప్లేట్ స్పెక్ట్రోఫోటోమీటర్ (450nm/630nm)

┅┅హోమోజెనైజర్ లేదా స్టొమకర్

┅┅షేకర్

┅┅వోర్టెక్స్ మిక్సర్

┅┅సెంట్రిఫ్యూజ్

┅┅విశ్లేషణాత్మక బ్యాలెన్స్ (ఇండక్టెన్స్: 0.01గ్రా)

┅┅గ్రాడ్యుయేట్ పైపెట్: 15ml

┅┅రబ్బరు పైపెట్ బల్బ్

┅┅పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్: 15ml, 50ml

┅┅గ్లాస్ టెస్ట్ ట్యూబ్: 10ml

┅┅మైక్రోపిపెట్‌లు: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - మల్టీపిపెట్

కారకాలు

┅┅ఎన్-హెక్సేన్(AR)

┅┅మిథిలిన్ క్లోరైడ్(AR)

┅┅అసిటోనిట్రైల్(AR)

┅┅డీయోనైజ్డ్ నీరు

-----సాంద్రీకృత హైడ్రోక్లోరిక్ ఆమ్లం(AR)

కిట్ భాగాలు

● యాంటిజెన్‌తో పూసిన 96 బావులతో మైక్రోటైటర్ ప్లేట్

● ప్రామాణిక పరిష్కారాలు(6 సీసాలు×1ml/బాటిల్)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● అధిక సాంద్రత కలిగిన ప్రామాణిక నియంత్రణ:(1ml/బాటిల్)

………………………………………………………………100ppb

● ఎంజైమ్ కంజుగేట్ 12ml ………………………... రెడ్ క్యాప్

● యాంటీబాడీ సొల్యూషన్ 7ml ………………………………….. గ్రీన్ క్యాప్

● సొల్యూషన్ A 7ml.......................................... వైట్ క్యాప్

● సొల్యూషన్ B 7ml ……………………………….. రెడ్ క్యాప్

● స్టాప్ సొల్యూషన్ 7ml ………………………………………… పసుపు టోపీ

● 20Xసాంద్రీకృత వాష్ సొల్యూషన్ 40ml

…………………………………………….. పారదర్శక టోపీ

●2X ఎక్స్‌ట్రాక్షన్ సొల్యూషన్ 50ml............. బ్లూ క్యాప్

కారకాల తయారీ

7.1 తేనె నమూనా

పరిష్కారం 1 : 0.2 M హైడ్రోక్లోరిక్ యాసిడ్ ద్రావణం

బరువు 41.5ml సాంద్రీకృత హైడ్రోక్లోరిక్ యాసిడ్, డీయోనైజ్డ్ నీటితో 500 ml వరకు కరిగించబడుతుంది.

పరిష్కారం 2: వాష్ సొల్యూషన్

సాంద్రీకృత వాష్ ద్రావణాన్ని 1:19 వాల్యూమ్ నిష్పత్తిలో డీయోనైజ్డ్ నీటితో కరిగించండి, ఇది ప్లేట్‌లను కడగడానికి ఉపయోగించబడుతుంది.పలుచన చేసిన ద్రావణాన్ని 4 ℃ వద్ద 1 నెల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.

పరిష్కారం3: వెలికితీత పరిష్కారం

2×సాంద్రీకృత సంగ్రహణ ద్రావణాన్ని డీయోనైజ్డ్ నీటితో 1:1 పరిమాణంలో (లేదా అవసరాన్ని బట్టి) కరిగించండి, ఇది నమూనా వెలికితీత కోసం ఉపయోగించబడుతుంది.ఈ పలచబరిచిన ద్రావణాన్ని 4℃ వద్ద 1 నెల వరకు భద్రపరచవచ్చు.

నమూనా సన్నాహాలు

8.1 ఆపరేషన్‌కు ముందు వినియోగదారులకు నోటీసు మరియు జాగ్రత్తలు

(ఎ) దయచేసి ప్రయోగ ప్రక్రియలో ఒక-ఆఫ్ చిట్కాలను ఉపయోగించండి మరియు విభిన్న రియాజెంట్‌ను గ్రహించినప్పుడు చిట్కాలను మార్చండి.

(బి) అన్ని ప్రయోగాత్మక సాధనాలు శుభ్రంగా ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి, లేకుంటే అది పరీక్ష ఫలితాన్ని ప్రభావితం చేస్తుంది.

8.2తేనె నమూనా

------- 2g±0.05g తేనె నమూనాను 50ml పాలీస్టైరిన్ సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్‌లో వేయండి,

-----2ml 0.2 M హైడ్రోక్లోరిక్ యాసిడ్ ద్రావణం (సొల్యూషన్ 1), పూర్తిగా కలపడానికి వోర్టెక్స్ జోడించండి, ఆపై 8ml మిథైలిన్ క్లోరైడ్ జోడించండి, పూర్తిగా కరిగిపోయేలా 5 నిమిషాలు షేకర్‌తో షేక్ చేయండి;

-----10 నిమిషాలు సెంట్రిఫ్యూజ్, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కనీసం 3000గ్రా (20-25℃);

-----అతీత దశను తొలగించండి, 2 ml సబ్‌స్ట్రేట్ సేంద్రీయ ద్రావణాన్ని 10 ml గాజు గొట్టంలోకి తీసుకోండి. నత్రజని ప్రవాహం (50-60℃) నీటి స్నానం కింద సబ్‌స్టేట్‌ను ఆరబెట్టండి.

-----1 ml n-హెక్సేన్ జోడించండి, 30s కోసం వోర్టెక్స్, ఆపై 1ml వెలికితీత ద్రావణం (పరిష్కారం 3) , 1నిమికి మళ్లీ వోర్టెక్స్ జోడించండి.5నిమి సెంట్రిఫ్యూజ్, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కనీసం 3000గ్రా (20-25℃);

-----సూపర్‌నాటెంట్ దశను తొలగించండి, పరీక్ష కోసం 50ml తీసుకోండి;

9. పరీక్ష ప్రక్రియ

9.1 పరీక్షకు ముందు గమనించండి

9.1.1 అన్ని కారకాలు మరియు మైక్రోవెల్‌లు అన్నీ గది ఉష్ణోగ్రత (20-25℃) వద్ద ఉన్నాయని నిర్ధారించుకోండి.

9.1.2 ఉపయోగించిన వెంటనే మిగిలిన అన్ని రియాజెంట్‌లను 2-8℃కి తిరిగి ఇవ్వండి.

9.1.3 మైక్రోవెల్‌లను సరిగ్గా కడగడం అనేది పరీక్ష ప్రక్రియలో ఒక ముఖ్యమైన దశ;ELISA విశ్లేషణ యొక్క పునరావృతతకు ఇది కీలకమైన అంశం.

9.1.4 పొదిగే సమయంలో కాంతిని నివారించండి మరియు మైక్రోవెల్‌లను కవర్ చేయండి.

9.2 పరీక్ష దశలు

9.2.1 గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద (20-25℃) 30 నిమిషాల కంటే ఎక్కువ సేపు అన్ని కారకాలను బయటకు తీయండి, ఉపయోగం ముందు సజాతీయంగా మార్చండి.

9.2.2 అవసరమైన మైక్రోవెల్‌లను పొందండి మరియు మిగిలిన వాటిని వెంటనే 2-8℃ వద్ద జిప్-లాక్ బ్యాగ్‌లోకి తిరిగి ఇవ్వండి.

9.2.3 పలచబరిచిన వాష్ ద్రావణాన్ని ఉపయోగించే ముందు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద ఉండేలా తిరిగి వేడి చేయాలి.

9.2.4సంఖ్య:ప్రతి మైక్రోవెల్ స్థానాన్ని సంఖ్య చేయండి మరియు అన్ని ప్రమాణాలు మరియు నమూనాలు నకిలీలో అమలు చేయబడాలి.ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల స్థానాలను రికార్డ్ చేయండి.

9.2.5ప్రామాణిక పరిష్కారం/నమూనా జోడించండి:సంబంధిత బావులకు 50 µl ప్రామాణిక ద్రావణం లేదా సిద్ధం చేసిన నమూనాను జోడించండి.50µl యాంటీబాడీ ద్రావణాన్ని జోడించండి.ప్లేట్‌ను మాన్యువల్‌గా షేక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 25℃ వద్ద 30 నిమిషాలు పొదిగేది.

9.2.6కడగడం:కవర్‌ను సున్నితంగా తీసివేసి, బావుల నుండి ద్రవాన్ని శుద్ధి చేయండి మరియు మైక్రోవెల్‌లను 250µl పలచబరిచిన వాష్ సొల్యూషన్ (సొల్యూషన్ 2)తో 10 సెకన్ల వ్యవధిలో 4-5 సార్లు శుభ్రం చేయండి.శోషక కాగితంతో అవశేష నీటిని పీల్చుకోండి (మిగిలిన గాలి బుడగను ఉపయోగించని చిట్కాతో తొలగించవచ్చు).

9.2.8ఎంజైమ్ కంజుగేట్:ప్రతి బావికి 100ml ఎంజైమ్ కంజుగేట్ ద్రావణాన్ని జోడించండి, ప్లేట్‌ను మాన్యువల్‌గా షేక్ చేయడం ద్వారా మెత్తగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 25℃ వద్ద 30 నిమిషాలు పొదిగేది.మళ్ళీ వాష్ దశను పునరావృతం చేయండి.

9.2.8రంగు:ప్రతి బావికి 50µl ద్రావణం A మరియు 50µl ద్రావణం B కలపండి.ప్లేట్‌ను మాన్యువల్‌గా షేక్ చేయడం ద్వారా సున్నితంగా కలపండి మరియు కవర్‌తో 25℃ వద్ద 15 నిమిషాలు పొదిగేది (12.8 చూడండి).

9.2.9కొలత:ప్రతి బావికి 50µl స్టాప్ సొల్యూషన్ జోడించండి.ప్లేట్‌ను మాన్యువల్‌గా షేక్ చేయడం ద్వారా మెల్లగా కలపండి మరియు గాలికి వ్యతిరేకంగా 450nm వద్ద శోషణను కొలవండి (ఇది 450/630nm ద్వంద్వ-తరంగదైర్ఘ్యంతో కొలవాలని సూచించబడింది. స్టాప్ సొల్యూషన్ జోడించిన తర్వాత 5 నిమిషాలలోపు ఫలితాన్ని చదవండి. ) (మేము దృష్టి ద్వారా కూడా కొలవవచ్చు. ELIASA పరికరంలో స్టాప్ సొల్యూషన్ లేకుండా)

ఫలితాలు

10.1 శాతం శోషణ

ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు మొదటి ప్రమాణం (సున్నా ప్రమాణం) యొక్క శోషణ విలువతో విభజించబడ్డాయి మరియు 100% గుణించబడతాయి.ఈ విధంగా సున్నా ప్రమాణం 100%కి సమానంగా చేయబడుతుంది మరియు శోషణ విలువలు శాతాలలో కోట్ చేయబడతాయి.

శోషణం (%) = B/B0 × 100%

B ——శోషణ ప్రమాణం (లేదా నమూనా)

B0 ——శోషణ సున్నా ప్రమాణం

10.2 ప్రామాణిక వక్రత

ప్రామాణిక వక్రరేఖను గీయడానికి: ప్రమాణాల శోషణ విలువను y-యాక్సిస్‌గా, సెమీ లాగరిథమిక్ ఫ్లూమెక్విన్ స్టాండర్డ్స్ సొల్యూషన్ (ppb) యొక్క గాఢత x-యాక్సిస్‌గా తీసుకోండి.

--- దిఫ్లూమెక్విన్అమరిక వక్రరేఖ నుండి చదవగలిగే ప్రతి నమూనా (ppb) యొక్క ఏకాగ్రత, అనుసరించిన ప్రతి నమూనా యొక్క సంబంధిత పలుచన గుణకారంతో గుణించబడుతుంది మరియు నమూనా యొక్క వాస్తవ సాంద్రత పొందబడుతుంది.

ELISA కిట్‌ల డేటా తగ్గింపు కోసం, ప్రత్యేక సాఫ్ట్‌వేర్ అభివృద్ధి చేయబడింది, ఇది అభ్యర్థనపై అందించబడుతుంది.

11. సున్నితత్వం, ఖచ్చితత్వం మరియు ఖచ్చితత్వం

పరీక్ష సున్నితత్వం:0.3ppb

తేనె నమూనా పలుచన కారకం: 2

గుర్తింపు పరిమితి

తేనె నమూనా------------------------------------------------ -1ppb

ఖచ్చితత్వం

తేనె నమూనా ------------------------------------------- 90±20 %

ఖచ్చితత్వం

ELISA కిట్ యొక్క వైవిధ్య గుణకం 10% కంటే తక్కువ.

12. గమనించండి

12.1 రియాజెంట్‌లు మరియు నమూనాలు గది ఉష్ణోగ్రత (20-25℃)కి నియంత్రించబడకపోతే ప్రమాణాలు మరియు నమూనాల కోసం పొందిన శోషణ విలువల సగటు విలువలు తగ్గించబడతాయి.

12.2 విజయవంతం కాని పునరావృతతను నివారించడానికి దశల మధ్య మైక్రోవెల్‌లను పొడిగా అనుమతించవద్దు మరియు మైక్రోవెల్స్ హోల్డర్‌ను నొక్కిన వెంటనే తదుపరి దశను ఆపరేట్ చేయండి.

12.3ఉపయోగించే ముందు ప్రతి కారకాన్ని సజాతీయంగా మార్చండి.

12.4మీ చర్మాన్ని స్టాప్ సొల్యూషన్ నుండి దూరంగా ఉంచండి ఎందుకంటే ఇది 2M H₂SO₄పరిష్కారం.

12.5 కాలం చెల్లిన కిట్‌లను ఉపయోగించవద్దు.వివిధ బ్యాచ్‌ల కారకాలను మార్పిడి చేయవద్దు, ఎందుకంటే ఇది సున్నితత్వాన్ని తగ్గిస్తుంది.

12.6 నిల్వ పరిస్థితి:

ELISA కిట్‌లను 2-8℃ వద్ద ఉంచండి, స్తంభింపజేయవద్దు.సీల్ రెస్ట్ మైక్రోవెల్ ప్లేట్లు అన్ని పొదిగే సమయంలో నేరుగా సూర్యరశ్మిని నివారించండి.మైక్రోటైటర్ ప్లేట్‌లను కవర్ చేయడం సిఫార్సు చేయబడింది.

12.7 కారకాలు చెడ్డవి కావడానికి సూచనలు:

సబ్‌స్ట్రేట్ ద్రావణం రంగులు మారితే వదిలివేయాలి.

సున్నా ప్రమాణం యొక్క శోషణ విలువ (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) కంటే తక్కువగా ఉంటే రియాజెంట్‌లు చెడ్డవి కావచ్చు.

12.8 సొల్యూషన్ A మరియు సొల్యూషన్ Bని జోడించిన తర్వాత కలరేషన్ రియాక్షన్‌కి 15నిమి అవసరం. మరియు రంగు చాలా తేలికగా ఉంటే, మీరు పొదిగే సమయాన్ని 20నిమి నుండి ఎక్కువ వరకు పొడిగించవచ్చు.25 నిమిషాలకు మించకూడదు, దీనికి విరుద్ధంగా, పొదిగే సమయాన్ని సరిగ్గా తగ్గించండి.

12.9 సరైన ప్రతిచర్య ఉష్ణోగ్రత 25℃.ఎక్కువ లేదా తక్కువ ఉష్ణోగ్రత సున్నితత్వం మరియు శోషణ విలువల మార్పులకు దారి తీస్తుంది.

13. నిల్వ

నిల్వ పరిస్థితి: 2-8℃.

నిల్వ కాలం: 12 నెలలు.