produkt

Parimi i Testit

Ky komplet bazohet në teknologjinë ELISA konkurruese indirekte.Puset e mikrotitrit janë të veshura me antigjen bashkues.Flumequinembetja në kampion konkurron me antigjenin e veshur në pllakën e mikrotitrit për antitrupin.Pas shtimit të antitrupave të etiketuara me enzimë, substrati TMB përdoret për të treguar ngjyrën.Absorbimi i kampionit lidhet negativisht me përmbajtjen e tetraciklinës në të, pasi të krahasohet me Kurbën Standarde, shumëzuar me shumëfishin e hollimit, mund të llogaritet sasia e mbetjes së Flumequine në kampion.

Aplikacionet

Ky komplet mund të përdoret në analizat sasiore dhe cilësore të mbetjeve të flumequine në mjaltë.

Reaksionet e kryqëzuara

Flumequine ……………………………………………… 100%

Materialet e nevojshme

Pajisjet

┅┅ Spektrofotometri i pllakës së mikrotitrit (450nm/630nm)

┅┅Homogenizues ose stomakues

┅┅Shaker

┅┅Përzierës vorbull

┅┅Centrifuga

┅┅Bilanci analitik (induktiviteti: 0.01g)

┅┅Pipetë e diplomuar: 15ml

┅┅ Llambë me pipetë gome

┅┅ Tub centrifuge polistiren: 15ml, 50ml

┅┅Provë xhami:10ml

┅┅Mikropipetat: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml -multipipete

Reagentët

┅┅n-heksan (AR)

┅┅ Klorur metilen (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Ujë i dejonizuar

-----Acidi klorhidrik i koncentruar (AR)

Komponentët e kompletit

● Pllakë mikrotitërore me 96 puse të veshura me antigjen

● Tretësira standarde (6 shishe×1 ml/shishe)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Kontroll standard i përqendrimit të lartë: (1ml/shishe)

……………………………………………………100 ppb

● Konjugat enzimë 12 ml…………………………… kapak i kuq

● Tretësirë ​​antitrupash 7ml …………..………..….…..kapak jeshil

● Tretësirë ​​A 7ml…………………………..…………..kapak i bardhë

● Tretësirë ​​B 7ml …………………………..…………… kapak i kuq

● Stop tretësirë ​​7ml …………………………..………kapak i verdhë

● 20X Tretësirë ​​larëse e koncentruar 40ml

…………………………………………..…..kapak transparent

●2X Tretësirë ​​ekstraktuese 50ml……………………… kapak blu

Përgatitja e reagentëve

7.1 Mostra e mjaltit

Tretësirë ​​1: 0.2 M Tretësirë ​​e acidit klorhidrik

Pesha 41.5ml Acid klorhidrik i koncentruar, holluar me ujë të dejonizuar deri në 500 ml.

Zgjidhja 2: Tretësira e larjes

Tretësira e koncentruar e larjes hollohet me ujë të dejonizuar në raport vëllimi 1:19, i cili do të përdoret për larjen e pllakave.tretësira e holluar mund të ruhet në 4℃ për 1 muaj.

Zgjidhje3: zgjidhje ekstraktuese

Holloni tretësirën ekstraktuese 2× të koncentruar me ujë të dejonizuar në raportin e vëllimit 1:1 (ose në varësi të kërkesës), i cili do të përdoret për nxjerrjen e mostrës.Kjo tretësirë ​​e holluar mund të konservohet për 1 muaj në 4℃.

Përgatitjet e mostrave

8.1 Njoftimi dhe masat paraprake për përdoruesit përpara përdorimit

(a) Ju lutemi përdorni këshilla një herë në procesin e eksperimentit dhe ndryshoni majat kur thithni reagentë të ndryshëm.

(b) Sigurohuni që të gjitha instrumentet eksperimentale të jenë të pastra, përndryshe kjo do të ndikojë në rezultatin e analizës.

8.2Mostra e mjaltit

----- Peshoni 2g±0,05g kampion mjalti në një tub centrifuge polistireni 50ml,

-----Shtoni 2 ml tretësirë ​​të acidit klorhidrik 0,2 M (Tretësira 1), vorbulloni për ta përzier plotësisht, më pas shtoni 8 ml klorur metilen, tundeni me shaker për 5 minuta që të tretet plotësisht;

-----Centrifugoni për 10 min, të paktën 3000g në temperaturën e dhomës (20-25℃);

-----Hiqni fazën supernatante, merrni 2 ml tretësirë ​​organike të substratit në një tub qelqi 10 ml. thajeni nënshtresën nën një banjë uji me rrjedhje azoti (50-60℃)

-----Shtoni 1 ml n-heksan, vorbull për 30 sekonda, më pas shtoni 1 ml tretësirë ​​ekstraktuese (tretësira 3), rrotulloni përsëri për 1 min.Centrifugoni për 5 minuta, të paktën 3000g në temperaturën e dhomës (20-25℃);

-----Hiqni fazën supernatante, merrni 50 ml për analizë;

9. Procesi i analizës

9.1 Njoftim përpara analizës

9.1.1 Sigurohuni që të gjithë reagentët dhe mikropuset të jenë të gjithë në temperaturën e dhomës (20-25℃).

9.1.2 Kthejini të gjithë reagentët e mbetur në 2-8℃ menjëherë pas përdorimit.

9.1.3 Larja e saktë e mikropuseve është një hap i rëndësishëm në procesin e analizës;është faktori jetik për përsëritjen e analizës ELISA.

9.1.4 Shmangni dritën dhe mbuloni mikropuset gjatë inkubacionit.

9.2 Hapat e analizës

9.2.1 Hiqini të gjithë reagentët në temperaturën e dhomës (20-25℃) për më shumë se 30 minuta, homogjenizoni përpara përdorimit.

9.2.2 Hiqni mikropusetat e nevojshme dhe kthejeni pjesën tjetër në çantën me zinxhir në 2-8℃ menjëherë.

9.2.3 Tretësira e holluar e larjes duhet të ngrohet sërish për të qenë në temperaturën e dhomës përpara përdorimit.

9.2.4Numri:Numëroni çdo pozicion të mikropusit dhe të gjitha standardet dhe mostrat duhet të ekzekutohen në dy kopje.Regjistroni standardet dhe pozicionet e mostrave.

9.2.5Shtoni zgjidhjen/kampionin standard:Shtoni 50 µl tretësirë ​​standarde ose mostër të përgatitur në puset përkatëse.Shtoni 50 µl zgjidhje antitrupash.Përzieni butësisht duke tundur pjatën me dorë dhe inkuboni për 30 minuta në 25℃ me kapak.

9.2.6Lani:Hiqeni kapakun butësisht dhe pastroni lëngun nga pusetat dhe shpëlajini mikropusetat me 250µl tretësirë ​​larës të holluar (tretësira 2) me një interval prej 10 sekondash për 4-5 herë.Përthithni ujin e mbetur me letër thithëse (flluska e mbetur e ajrit mund të eliminohet me majë të papërdorur).

9.2.8.Konjugati i enzimës:Shtoni tretësirë ​​të konjuguar enzimë 100 ml në secilën pus, përzieni butësisht duke e tundur pjatën me dorë dhe inkuboni për 30 minuta në 25℃ me kapak.Përsëriteni përsëri hapin e larjes.

9.2.8Ngjyrosja:Shtoni 50µl tretësirë ​​A dhe 50µl tretësirë ​​B në çdo pus.Përzieni butësisht duke tundur pjatën me dorë dhe inkuboni për 15 minuta në 25℃ me mbulesë (shih 12.8).

9.2.9Masa:Shtoni 50µl tretësirë ​​ndaluese në çdo pus.Përziejeni butësisht duke e tundur pllakën me dorë dhe matni thithjen në 450 nm kundrejt një boshe ajri (Është e sugjeruar të matni me gjatësinë e valës së dyfishtë prej 450/630 nm. Lexoni rezultatin brenda 5 minutash pas shtimit të tretësirës ndaluese. ) (Mund të matim edhe me shikim pa zgjidhje ndalese me shkurt te instrumentit ELIASA)

Rezultatet

10.1 Përqindja e absorbimit

Vlerat mesatare të vlerave të absorbimit të marra për standardet dhe mostrat pjesëtohen me vlerën e absorbimit të standardit të parë (standardi zero) dhe shumëzohen me 100%.Kështu, standardi zero bëhet i barabartë me 100% dhe vlerat e absorbimit kuotohen në përqindje.

Absorbimi (%) = B/B0 ×100%

B ——standard (ose mostër) absorbimi

B0 —— standardi i përthithjes zero

10.2 Kurba standarde

Për të vizatuar një kurbë standarde: Merrni vlerën e absorbimit të standardeve si bosht y, gjysmë logaritmik i përqendrimit të tretësirës standarde të flumequine (ppb) si bosht x.

---flumequinepërqendrimi i çdo kampioni (ppb), i cili mund të lexohet nga kurba e kalibrimit, shumëzohet me shumëfishin përkatës të hollimit të çdo kampioni të ndjekur dhe fitohet përqendrimi aktual i kampionit.

Për reduktimin e të dhënave të kompleteve ELISA, është zhvilluar softuer special, i cili mund të sigurohet sipas kërkesës.

11. Ndjeshmëri, saktësi dhe saktësi

Ndjeshmëria e testit：0.3ppb

Faktori i hollimit të mostrës së mjaltit: 2

Kufiri i zbulimit

Mostra e mjaltit ------------------------------------------------ -1ppb

Saktësia

Mostra e mjaltit --------------------------------------------- 90±20 %

Preciziteti

Koeficienti i variacionit të kompletit ELISA është më pak se 10%.

12. Njoftim

12.1 Vlerat mesatare të vlerave të absorbimit të marra për standardet dhe mostrat do të reduktohen nëse reagentët dhe mostrat nuk janë rregulluar në temperaturën e dhomës (20-25℃).

12.2 Mos lejoni që mikropuset të thahen ndërmjet hapave për të shmangur përsëritjen e pasuksesshme dhe veproni hapin tjetër menjëherë pasi trokitni lehtë mbi mbajtësin e mikropuseve.

12.3.Homogjenizoni çdo reagent përpara përdorimit.

12.4.Mbajeni lëkurën tuaj larg solucionit ndalues ​​sepse është 2M H₂SO₄zgjidhje.

12.5 Mos i përdorni kompletet e vjetruara.Mos i ndërroni reagentët e grupeve të ndryshme, sepse do të ulë ndjeshmërinë.

12.6 Gjendja e ruajtjes:

Mbani kompletet ELISA në 2-8℃, mos ngrini.Mbyllni pllakat e mikropuseve të mbajtësit Shmangni rrezet e diellit direkte gjatë të gjitha inkubacioneve.Rekomandohet mbulimi i pllakave të mikrotitrit.

12.7 Indikacionet për keqbërjen e reagentëve:

Zgjidhja e nënshtresës duhet të braktiset nëse merr ngjyra.

Reagentët mund të prishen nëse vlera e absorbimit (450/630nm) e standardit zero është më e vogël se 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Reaksioni i ngjyrosjes ka nevojë për 15 minuta pas shtimit të tretësirës A dhe tretësirës B. Dhe mund të zgjasni intervalet e kohës së inkubacionit nga 20 minuta në më shumë nëse ngjyra është shumë e lehtë për t'u përcaktuar.Asnjëherë mos i kaloni 25 minuta, përkundrazi, shkurtoni kohën e inkubacionit siç duhet.

12,9 Temperatura optimale e reagimit është 25℃.Temperatura më e lartë ose më e ulët do të çojë në ndryshime të vlerave të ndjeshmërisë dhe absorbimit.

13. Magazinimi

Gjendja e ruajtjes: 2-8℃.

Periudha e ruajtjes: 12 muaj.