Fa'atauva Enzyme Immunoassay Kit mo Su'esu'ega Fa'atatau ole Flumequine
Mataupu Faavae o le Su'ega
O lenei pusa e fa'avae i luga ole tekonolosi ELISA fa'atauva.O vaieli microtiter o loʻo ufiufi i le faʻapipiʻiina o antigen.Flumequineo totoe i le fa'ata'ita'iga e tauva ma le antigen ua ufiufi i luga o le microtiter plate mo le antibody.A maeʻa le faʻaopoopoina o le enzyme faʻailoga anti-antibody, faʻaogaina le TMB substrate e faʻaalia ai le lanu.O le faʻaogaina o le faʻataʻitaʻiga e le lelei le fesoʻotaʻi ma le tetracycline o loʻo nofo i totonu, pe a uma ona faʻatusatusa i le Standard Curve, faʻateleina i le dilution tele, Flumequine toega aofaʻi i le faʻataʻitaʻiga e mafai ona fuafua.
Talosaga
O lenei pusa e mafai ona faʻaaogaina i le quantitative ma qualitative suʻesuʻega o totoe flumequine i le meli.
Fa'asagaga fa'asagatau
Flumequine ……………………………………………………… 100%
Mea e Manaomia
Meafaigaluega
┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)
┅┅Homogenizer poʻo le manava
┅┅Se lulu
┅┅Vortex fa'afefiloi
┅┅Centrifuge
┅┅Paleni au'ili'ili (inductance: 0.01g)
┅┅Papa fa'au'u: 15ml
┅┅Papa paipa pulu
┅┅Polystyrene Centrifuge paipa: 15ml, 50ml
┅┅Papa su'e tioata:10ml
┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,
250ml -telepine
Reagents
┅┅n-hexane(AR)
┅┅Methylene chloride(AR)
┅┅Acetonitrile(AR)
┅┅Suava fa'aonaona
-----Su'i sukalati fa'atosina(AR)
Vaega Vaega
● Microtiter ipu ma vaieli 96 ufiufi i antigen
● fofo masani (6 fagu × 1ml / fagu)
0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb
● Fa'atonu maualuga fa'atonuga:(1ml/fagu)
…………………………………………………………………100ppb
● Enzyme conjugate 12ml……………………………… pulou mumu
● Antibody solution 7ml ……………………………………………..pulou lanu meamata
● Fofo A 7ml………………………………………………..pulou paepae
● Fofo B 7ml …………………………………………………… pulou mumu
● Taofi le vaifofo 7ml …………………………………………………… pulou samasama
● 20XConcentrated fufulu vaifofo 40ml
………………………………………………………..pulou manino
●2X Su'ega vaifofo 50ml…………………………… pulou lanumoana
Sauniuniga Reagents
7.1 Fa'ata'ita'iga o le meli
Fofo 1 : 0.2 M Fofo vai o le suka
Mamafa 41.5ml Concentrated hydrochloric acid, faʻafefe i le vai faʻafefete i le 500 ml.
Fofo 2: Fufulu vaifofo
Fa'asusu le vaifofo fufulu fa'amamafa i vai fa'a-deionized i le fua fa'atatau o le 1:19, lea o le a fa'aaogaina mo le fufuluina o papatusi.e mafai ona teuina le vaifofo fa'afefete ile 4℃ mo le 1 masina.
Fofo3: fofo aveese
Fa'asusu le vaifofo fa'ameaalofa 2 × fa'atasi ma le vai fa'a-deionized i le fua fa'atatau o le 1: 1 (pe fa'alagolago i mana'oga), lea o le a fa'aaogaina mo le fa'ata'ita'iga.E mafai ona fa'asaoina lenei fofo fa'afefete mo le 1 masina ile 4℃.
Sauniuniga Faataitai
8.1 Faʻaaliga ma puipuiga mo tagata faʻaoga aʻo leʻi faʻaogaina
(a) Fa'amolemole fa'aaoga fautuaga e tasi i le fa'agasologa o le fa'ata'ita'iga, ma sui fa'amatalaga pe a fa'asusu ese'esega.
(e) Ia mautinoa o meafaigāluega fa'ata'ita'i uma e mama, a leai o le a fa'ataunu'uina le i'uga o su'ega.
8.2Fa'ata'ita'iga o le meli
----- Fua 2g ± 0.05g faʻataʻitaʻiga meli i totonu o le 50ml polystyrene centrifuge tube,
----- Faʻaopoopo le 2ml 0.2 M Hydrochloric acid solution (Foto 1), vortex e faʻafefiloi atoa, ona faʻaopopo lea o le 8ml methylene chloride, lulu i le lulu mo le 5min e faʻamavae atoa;
----- Centrifuge mo 10 min, a itiiti mai 3000g i le vevela potu (20-25 ℃);
----- Aveese le vaega supernatant, ave le 2 ml o le substrate organic solution i se 10 ml ipu tioata. faʻamago le substate i lalo o le vai taele o le Nitrogen tafe (50-60 ℃)
----- Faʻaopoopo le 1 ml n-hexane, vortex mo le 30s, ona faʻaopopo lea o le 1ml faʻafefeteina fofo (fofo 3), toe vortex mo le 1min.Centrifuge mo 5min, a itiiti ifo 3000g i le vevela potu (20-25 ℃);
----- Aveese le vaega supernatant, ave 50ml mo suʻega;
9. Fa'agasologa o su'ega
9.1 Fa'aaliga a'o le'i faia le su'ega
9.1.1 Ia mautinoa o lo'o tu'u uma i le vevela o le potu (20-25℃).
9.1.2 Toe fa'afo'i uma mea toe fa'afo'i i le 2-8 ℃ i le taimi lava e uma ai ona fa'aoga.
9.1.3 O le fufuluina sa'o o microwells ose laasaga taua ile fa'agasologa ole su'ega;o le mea taua tele i le toe fai o suʻesuʻega ELISA.
9.1.4 Aloese mai le malamalama ma ufiufi le microwells i le taimi e fa'ago ai.
9.2 Laasaga Su'esu'e
9.2.1 Ave uma mea fa'afoliga i fafo i le vevela o le potu (20-25 ℃) mo le sili atu i le 30min, fa'atasi a'o le'i fa'aoga.
9.2.2 Aumai i fafo microwells o lo'o mana'omia ma toe fa'afo'i le vaega o totoe i totonu o le taga sipi-loka ile 2-8℃ vave.
9.2.3 O le vaifofo fufulu vai e tatau ona toe fa'amafanafana i le vevela o le potu a'o le'i fa'aogaina.
9.2.4Numera:Faanumera uma tulaga microwell ma tulaga uma ma faʻataʻitaʻiga e tatau ona faʻataʻitaʻi faʻalua.Faamaumau tulaga ma tulaga faataitai.
9.2.5Fa'aopoopo fofo masani/fa'ata'ita'iga:Fa'aopoopo le 50 µl o vaifofo masani po'o le fa'ata'ita'iga ua saunia i vaieli talafeagai.Faaopopo le 50µl vaifofo antibody.Faafefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma faʻagogo mo le 30 minute i le 25 ℃ ma le ufiufi.
9.2.6Fufulu:Aveese lemu le ufiufi ma fa'amama le vai mai vaieli ma fufulu microwells ile 250µl vaifofo fufulu (fofo 2) ile va ole 10s mo le 4-5 taimi.Fa'asusu le vai o lo'o totoe i se pepa fa'afefe (o le vaega o totoe o le ea e mafai ona fa'aumatia i le pito e le'o fa'aaogaina).
9.2.8.Enzyme conjugate:Fa'aopoopo le enzyme conjugate solution 100ml i vaieli ta'itasi, Fa'afefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma fa'asusu mo le 30min i le 25 ℃ ma le ufiufi.Toe fai le la'asaga fufulu.
9.2.8Lanu:Faaopopo le 50μl solution A ma le 50μl solution B i vaieli taitasi.Faafefiloi malie e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma faʻafefe mo le 15 min i le 25 ℃ ma le ufiufi (vaʻai 12.8).
9.2.9Fua:Faaopopo le 50µl le vaifofo taofi i vaieli taitasi.Faafefiloi lemu e ala i le luluina o le ipu ma le lima ma fua le absorbance i le 450nm e faasaga i se ea avanoa (E fautuaina fua ma le lua-galu umi o le 450 / 630nm. Faitau le taunuuga i totonu o le 5min pe a uma le faaopoopoga o le fofo taofi. ) (E mafai foi ona tatou fuaina i le vaai. e aunoa ma se taofi fofo i le puupuu o le meafaigaluega ELIASA)
I'uga
10.1 pasene o le mitiia
O tau faʻatatau o le faʻaogaina o mea e maua mo tulaga faʻataʻitaʻiga ma faʻataʻitaʻiga e vaevaeina i le tau o le absorbance o le tulaga muamua (zero standard) ma faʻateleina i le 100%.Ole tulaga ole zero ua fa'apea ua tutusa ile 100% ma o tau o le absorbance o lo'o ta'ua i pasene.
Fa'asa'o (%) = B/B0 ×100%
B ——absorbance standard (poʻo faʻataʻitaʻiga)
B0 ——absorbance zero standard
10.2 Pi'o masani
Ia tusi se pi'o masani: Ave le tau o le mitiia o tulaga e pei o le y-axis, semi logarithmic o le fa'aogaina o le flumequine solutions standards solution (ppb) e pei o le x-axis.
--- O leflumequinefa'atonuga o fa'ata'ita'iga ta'itasi (ppb), lea e mafai ona faitau mai le fa'avasegaga fa'asolo, e fa'atele i le fa'atusatusaga fa'atele o fa'ata'ita'iga ta'itasi e mulimulita'ia, ma maua ai le fa'atonuga moni o fa'ata'ita'iga.
Mo le faʻaitiitiga o faʻamaumauga o pusa ELISA, ua atiaʻe polokalama faʻapitoa, lea e mafai ona tuʻuina atu i luga ole talosaga.
11. Ma'ale'ale, sa'o ma sa'o
Su'ega Ma'ale'ale:0.3ppb
Meli Fa'ata'ita'iga fa'ameamea fa'aloloto: 2
Fa'atapula'a su'esu'ega
Fa'ata'ita'iga o le meli------------------------------------------------ -1ppb
Sa'o
Fa'ata'ita'iga meli ------------------------------------------ 90±20 %
Sa'o
Ole fa'asologa ole suiga ole pusa ELISA e itiiti ifo ile 10%.
12. Matauina
12.1 Ole a fa'aitiitia le fa'atatauga ole su'esu'ega e maua mo fa'ata'ita'iga ma fa'ata'ita'iga pe afai e le'i fa'atulafonoina mea fa'afofo ma fa'ata'ita'iga ile vevela potu (20-25℃).
12.2 Aua le faatagaina microwells e mago i le va o laasaga e aloese ai mai le le manuia o le toe fai ma faagaioia le isi laasaga i le taimi lava e uma ai le paʻu o le microwells holder.
12.3.Fa'atasi fa'atasi mea fa'afefiloi a'o le'i fa'aogaina.
12.4.Taofi lou pa'u mai le vaifofo taofi aua o le 2M H2SO4fofo.
12.5 Aua le fa'aogaina pusa ua tuai.Aua le fesuia'i le reagents o vaega eseese, aua o le a pa'u ai le maaleale.
12.6 Tulaga teuina:
Taofi pusa ELISA ile 2-8℃, aua le fa'aisa.Fa'amaufa'ailoga pusa microwell Aloese sa'o le susulu o le la a'o fa'a'oto uma.E fautuaina le ufiufi o ipu microtiter.
12.7 Fa'ailoga mo mea fa'afoliga ua leaga:
E tatau ona lafoa'i le vaifofo o le eleele pe afai e liu lanu.
E ono fa'aletonu mea fa'afoliga pe afai e itiiti ifo i le 0.5 (A450nm<0.5) le aofa'i (450/630nm).
12.8 O le tali lanu e manaʻomia le 15min pe a uma ona faʻaopoopo le Fofo A ma le Fofo B. Ma e mafai ona e faʻaumiumi le taimi o le incubation mai le 20min i le sili atu pe afai o le lanu e mama tele e fuafua.Aua le sili atu i le 25min, I se isi itu, faʻapuʻupuʻu le taimi faʻamaʻi lelei.
12.9 O le vevela tali sili ona lelei e 25 ℃.O le maualuga pe maualalo le vevela o le a taʻitaʻia ai suiga o le maaleale ma le faʻaogaina o tau.
13. Teuina
Tulaga teuina: 2-8℃.
Taimi e teu ai: 12 masina.