محصول

1. پس منظر

ټایلوسینیو میکرولایډ انټي بیوټیک دی ، کوم چې په عمده ډول د انټي باکتریا او انټي مایکوپلازما په توګه کارول کیږي.سخت MRLs رامینځته شوي ځکه چې دا درمل ممکن په ځینو ډلو کې د جدي اړخیزو اغیزو لامل شي.

دا کټ د ELISA ټیکنالوژۍ پراساس یو نوی محصول دی، کوم چې د عام وسایلو تحلیلونو په پرتله ګړندی، اسانه، دقیق او حساس دی او یوازې په یوه عملیات کې 1.5 ساعتونو ته اړتیا لري، دا کولی شي د عملیاتو تېروتنه او د کار شدت د پام وړ کم کړي.

2. د ازموینې اصول

دا کټ د غیر مستقیم سیالي ELISA ټیکنالوژۍ پراساس دی.د مایکروټیټر څاګانې د کوپلینګ انټيجن سره پوښل شوي.په نمونه کې د Tylosin پاتې شنه د انټي باډي لپاره د مایکروټیټر پلیټ کې پوښل شوي انټيجن سره سیالي کوي.وروسته له دې چې د انټي باډي لیبل شوي انزایم اضافه شي، د TMB سبسټریټ د رنګ ښودلو لپاره کارول کیږي.د نمونې جذب په منفي ډول د ټایلوسین له استوګنې سره تړاو لري، د معیاري منحل سره پرتله کولو وروسته، د کمولو فکتور لخوا ضرب شوي، په نمونه کې د ټایلوسین د پاتې شونو مقدار محاسبه کیدی شي.

3. غوښتنلیکونه

دا کټ د څارویو نسجونو (چرګ، خنزیر، مرغۍ) او شیدو، شات، هګۍ او داسې نورو کې د ټایلوسین پاتې شونو کمیتي او کیفیتي تحلیل کې کارول کیدی شي.

4. متقابل غبرګونونه

ټایلوسین ……………………………………………….. ۱۰۰٪

تلمیکوسین ……………………………………… 2%

5. اړین توکي

5.1 تجهیزات:

---- مایکروټیټر پلیټ سپیکٹرو فوټومیټر (450nm/630nm)

---- روټري بخارات یا د نایتروجن وچولو وسیلې

---- همغږي کوونکي

----- شاکر

---- سینټرفیوج

---- تحلیلي توازن (انډکشن: 0.01g)

---- فارغ شوی پایپټ: 10ml

---- د ربړ پایپټ بلب

---- حجمی فلاسک: 10 ملی لیتر

----پولیسټرین سینټرفیوج ټیوب: 50 ملی لیتر

---- مایکروپیپیټس: 20-200ml، 100-1000ml

250 ملی لیتر - ملټي پیپټ

5.2 ریجنټ:

-----سوډیم هایدروکسایډ (NaOH, AR)

----سوډیم بای کاربونیټ (NaHCO_3,AR)

---- سوډیم کاربونیټ (NaCO₃, AR)

---- Trichloroacetic اسید (AR)

---- Acetonitrile (AR)

---- ایتیل اسټیټ (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

---- ډیونیز شوي اوبه

6. د کټ اجزا

l د مایکروټیټر پلیټ د 96 څاګانو سره د انټيجن سره پوښل شوی

l معیاري حلونه (5 بوتلونه، 1 ملی لیتر / بوتل)

0ppb، 0.5ppb، 1.5ppb، 4.5ppb، 13.5ppb

l د سپک کولو معیاري کنټرول: (1 ملی لیتر / بوتل)1ppm

l انزایم کنجوګیټ 1 ملی لیتر ……………………………….. سور کیپ

l د انټي باډي محلول 7 ملی لیتر……………………… شین خولۍ

l محلول A 7 ملی لیتر……………………………………… سپینه خولۍ

l حل ب 7 ملی لیتر …………………………….. سور کیپ

l د بند محلول 7 ملی لیتر ……………………….ژړ کیپ

l 20 × متمرکز د مینځلو محلول 40ml

……………………………………… شفاف خولۍ

l 4×متمرکز استخراج محلول 50ml

نیلي خولۍ

7. د ریجنټونو چمتو کول:

حل 1:0.1mol/L NaOH محلول

د 0.4g NaOH وزن له 100ml deionized اوبو او په بشپړه توګه مخلوط کړئ.

حل 2: 1mol/L NaOH محلول

له 4g NaOH څخه تر 100ml deionized اوبو وزن کړئ او په بشپړه توګه سره مخلوط کړئ.

حل 3: کاربونیټ بفر مالګه

د حل لاره1: 0.2M PB

په 51.6 ګرامه Na کې حل کړئ₂HPO₄۱۲ه₂O، 8.7g د NaH₂PO₄· 2H₂O د ډیونیز شوي اوبو سره او 1000 ملی لیتر ته ضعیف کړئ.

د حل لاره2: د استخراج حل

د 2 × متمرکز استخراج محلول د 1: 1 حجم په تناسب کې د ډیونیز شوي اوبو سره کم کړئد مثال په توګه 10 ملی لیتر 2 × استخراج محلول + 10 ملی لیتر ډیونیز شوي اوبه)، کوم چې به د نمونې استخراج لپاره وکارول شي،دا محلول د یوې میاشتې لپاره په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي.

د حل لاره3: د مینځلو محلول

د 1:19 حجم په تناسب کې د 20 × متمرکز واش محلول د ډیونیز شوي اوبو سره کم کړئد مثال په توګه 5 ملی لیتر 20 × د مینځلو محلول + 95 ملی لیتر ډیونیز شوي اوبه)، کوم چې به د پلیټونو مینځلو لپاره کارول کیږي.دا محلول د یوې میاشتې لپاره په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي.

8. نمونې چمتو کول

8.1 د عملیاتو دمخه خبرتیا او احتیاط:

(a) مهرباني وکړئ د تجربې په پروسه کې یو اړخیزه لارښوونې وکاروئ، او لارښوونې بدل کړئ کله چې مختلف ریجنټ جذب کړئ.

(b) ډاډ ترلاسه کړئ چې ټول وسایل پاک دي.

(c) د نسج نمونه په یخچال کې وساتئ.

(d) چمتو شوی نمونه باید په یو وخت کې د ارزونې لپاره وکارول شي.

8.2 د څارویو نسج (د چرګ، خنزیر او نور)

---- نمونه د هوموجنیزر سره همغږي کول؛

---- 2.0±0.05 ګرامه هوموجنیټ په 50 ملی لیتر پولی سټیرین سینټرفیوج ټیوب کې واخلئ؛2ml د 0.2M PB اضافه کړئ (حل1)، د منحل کولو لپاره وخورئ، او بیا 8 ملی لیتر ایتیل اسټیټ اضافه کړئ او د 3 دقیقو لپاره په کلکه وخورئ؛

---- د جلا کولو لپاره سینټرفیوج: 3000 ګرامه / محیط حرارت / 5 دقیقې.

---- د سپرناټینټ عضوي مرحله 4ml په 10ml شیشې ټیوب کې انتقال کړئ، د نایتروجن ګاز جریان لاندې د 50-60 ℃ د اوبو حمام سره وچ کړئ؛

---- وچه پاتې برخه د 1ml n-hexane سره منحل کړئ، د 30s لپاره vortex د تحلیل لپاره، او بیا د استخراج محلول 1ml اضافه کړئ (حل2)، د 1 دقیقو لپاره ورټیکس.د جلا کولو لپاره سینټرفیوج: 3000g / محیطي تودوخه / 5min

---- د سپرناټینټ n-هیکسین مرحله لرې کړئ؛د ارزونې لپاره 50μl د سبسټریټ آبی مرحله واخلئ.

د ککړتیا عامل: ۱

8.2 شیدې

---- د خام شیدو نمونه 100μl واخلئ، د استخراج محلول 900μl سره مخلوط کړئ (حل2)، او په بشپړه توګه مخلوط کړئ.

---- د ارزونې لپاره چمتو شوي محلول 50μl واخلئ.

د کمولو عنصر: 10

9. د ارزونې پروسه

9.1 د ارزونې دمخه خبرتیا

9.1.1ډاډ ترلاسه کړئ چې ټول ریجنټونه او مایکرو ویل ټول د خونې د حرارت درجه (20-25 ℃) کې دي.

9.1.2ټول پاتې ریجنټونه 2-8 ته بیرته راشئ℃د کارولو وروسته سمدستي.

9.1.3د مایکرو ویلونو مینځل په سمه توګه د ارزونې په پروسه کې یو مهم ګام دی؛دا د ELISA تحلیل د بیا تولید لپاره حیاتي فاکتور دی.

9.1.4 الفرڼا باطله کړئ او د انکیوبیشن پرمهال مایکرویل پوښ کړئ.

9.2 د ارزونې مرحلې

9.2.1 د خونې په حرارت (20-25 ℃) کې د 30 دقیقو څخه ډیر لپاره ټول ریجنټونه واخلئ، د کارولو دمخه په نرمۍ سره وخورئ.

9.2.2 د اړتیا وړ مایکرو ویلونه ترلاسه کړئ او پاتې نور سمدلاسه په 2-8 ℃ کې د زپ لاک کڅوړې ته راستانه کړئ.

9.2.3 د مینځلو محلول باید د کارولو دمخه د خونې په حرارت درجه کې بیا ګرم شي.

9.2.4شمېره:د هر مایکرویل پوستونو شمیرل شوي او ټول معیارونه او نمونې باید په نقل سره پرمخ وړل شي.د معیارونو او نمونو پوستونه ثبت کړئ.

9.2.5Add معیاري حل / نمونه او د انټي باډي حل: 50µl معیاري محلول اضافه کړئ((کټ ورکړل شوی)) یا د اړوندو څاګانو لپاره چمتو شوی نمونه.50µl د انټي باډي محلول اضافه کړئ (کټ ورکړل شوی).په لاسي ډول د پلیټ په وهلو سره په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 37 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ.

9.2.6وینځل: پوښ په نرمۍ سره لرې کړئ او د څاګانو څخه مایع پاک کړئ او مایکرو ویلونه د 250µl د مینځلو محلول سره مینځل کړئ (حل3) د 10s په وقفه کې د 4-5 ځله لپاره.پاتې اوبه د جاذب کاغذ سره جذب کړئ (باقي هوا بلبل د غیر استعمال شوي ټیپ سره له مینځه وړل کیدی شي).

9.2.7انزایم کنجوګټ اضافه کړئ: 100 ملی لیتر د انزایم کنجوګیټ محلول اضافه کړئ (کټ ورکړل شوی) هر څاه ته په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 30 دقیقو لپاره په 37 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ.د مینځلو مرحله بیا تکرار کړئ.

9.2.8رنګ ورکول: 50µl محلول A اضافه کړئکټ ورکړل شوی) او 50µl محلول B(کټ ورکړل شوی) هر څاه ته.په نرمۍ سره مخلوط کړئ او د 15 دقیقو لپاره په 37 ℃ کې د پوښ سره سینګار کړئ.

9.2.9اندازه کول: 50µl د سټاپ محلول اضافه کړئ (کټ ورکړل شوی) هر څاه ته.په نرمۍ سره مخلوط کړئ او جذب په 450nm اندازه کړئ (دا وړاندیز شوی اندازه د 450/630nm دوه اړخیز طول موج سره. د سټاپ محلول اضافه کولو وروسته په 5 دقیقو کې پایله ولولئ).

10. پایلې

10.1 سلنه جذب

د معیارونو او نمونو لپاره ترلاسه شوي د جذب ارزښتونو اوسط ارزښت د لومړي معیار (صفر معیار) د جذب ارزښت لخوا ویشل شوی او د 100٪ لخوا ضرب شوی.د صفر معیار په دې توګه د 100٪ سره برابر شوی او د جذب ارزښتونه په فیصدو کې حواله شوي.

B

جذب (٪) = —— × ۱۰۰٪

B0

B ——جذب معیار (یا نمونه)

B0 —— جذب صفر معیار

10.2 معیاري وکر

---- د معیاري منحني د رسم کولو لپاره: د معیارونو جاذب ارزښت د y-axis په توګه واخلئ، د x-axis په توګه د tylosin معیاري محلول (ppb) غلظت نیمه لوګاریتمیک.

---- د هرې نمونې (ppb) د ټایلوسین غلظت، چې د کیلیبریشن منحني څخه لوستل کیدی شي، د تعقیب شوي هرې نمونې د اړونده کمولو فکتور سره ضرب کیږي، او د نمونې اصلي غلظت ترلاسه کیږي.

مهرباني وکړئ پام وکړئ:

د معلوماتو تحلیل لپاره ځانګړي سافټویر رامینځته شوی ، کوم چې په غوښتنه چمتو کیدی شي.

11. حساسیت، دقت او دقیقیت

د ازموینې حساسیت:1.5ppb

د کشف حد:

د حیواناتو نسج ……………………………………………….1.5ppb شیدې ………………………………………………………………..۱۵ پی پی بی دقت:

د څارویو نسج ………………………………………… 80±15%

شیدې ……………………………………………………… 80 ± 10٪

دقیقیت:

د ELISA کټ د تغیر مجموعه له 10٪ څخه کمه ده.

12. خبرتیا

12.1 د معیارونو او نمونو لپاره ترلاسه شوي د جذب ارزښتونو اوسط ارزښتونه به راټیټ شي که چیرې ریجنټونه او نمونې د خونې د تودوخې (20-25 ℃) سره تنظیم شوي نه وي.

12.2 مایکرو ویلونو ته اجازه مه ورکوئ چې د ګامونو په مینځ کې وچ شي ترڅو د بیا تولید ناکامه کیدو مخه ونیسي او د مایکرو ویل هولډر له نل کولو وروسته سمدلاسه بل ګام پرمخ بوځي.

12.3 د کارولو دمخه هر یو ریجنټ په نرمۍ سره وویشئ.

12.4 خپل پوټکی د سټاپ محلول څخه لرې وساتئ ځکه چې دا 0.5MH دی₂SO₄حل

12.5 زاړه کټونه مه کاروئ.د مختلفو بستونو ریجنټونه مه تبادله کوئ، که نه نو دا به حساسیت راټیټ کړي.

12.6 د ELISA کټونه په 2-8 ℃ کې وساتئ، کنګل مه کوئ.د آرام مایکرویل پلیټونه مهر کړئ ، د ټولو انکیوبیشن پرمهال د مستقیم لمر وړانګو څخه مخنیوی وکړئ.د مایکروټیټر پلیټونو پوښل سپارښتنه کیږي.

12.7 د سبسټریټ محلول باید پریښودل شي که چیرې دا رنګ بدل کړي.ریجنټونه ممکن خراب شي که چیرې د صفر معیار د جذب ارزښت (450/630nm) له 0.5 (A450nm<0.5) څخه کم وي.

12.8 د محلول A او محلول B د اضافه کولو وروسته د رنګ کولو عکس العمل 15 دقیقو ته اړتیا لري. او تاسو کولی شئ د انکیوبیشن وخت 20 دقیقو یا ډیر اوږد کړئ که چیرې رنګ خورا روښانه وي د ټاکلو لپاره.هیڅکله د 30 دقیقو څخه ډیر مه کوئ، برعکس، د انکیوبیشن وخت په سمه توګه لنډ کړئ.

12.9 د عکس العمل غوره تودوخه 37 ℃ ده.لوړه یا ټیټه تودوخه به د حساسیت او جذب ارزښتونو بدلون لامل شي.

13. ذخیره کول

د ذخیره کولو حالت: 2-8℃

د ذخیره کولو موده: 12 میاشتې.