ਟਾਈਲੋਸਿਨ ਦੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਯੋਗੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਮਯੂਨੋਆਸੇ ਕਿੱਟ
ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਯੋਗੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਮਯੂਨੋਏਸੇ ਕਿੱਟ
ਦਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਟਾਇਲੋਸਿਨ
1. ਪਿਛੋਕੜ
ਟਾਇਲੋਸਿਨਇੱਕ ਮੈਕਰੋਲਾਈਡ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ ਹੈ, ਜੋ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਅਤੇ ਐਂਟੀ-ਮਾਈਕੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਜੋਂ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਸਖਤ MRLs ਸਥਾਪਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ ਦਵਾਈ ਕੁਝ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਗੰਭੀਰ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਇਹ ਕਿੱਟ ELISA ਤਕਨਾਲੋਜੀ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਉਤਪਾਦ ਹੈ, ਜੋ ਆਮ ਯੰਤਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਤੇਜ਼, ਆਸਾਨ, ਸਹੀ ਅਤੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ 1.5 ਘੰਟੇ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਹ ਓਪਰੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਲਤੀ ਅਤੇ ਕੰਮ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।
2. ਟੈਸਟ ਦਾ ਸਿਧਾਂਤ
ਇਹ ਕਿੱਟ ਅਸਿੱਧੇ-ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਾਲੀ ELISA ਤਕਨਾਲੋਜੀ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹੈ।ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਾਈਟਰ ਖੂਹ ਕਪਲਿੰਗ ਐਂਟੀਜੇਨ ਨਾਲ ਲੇਪ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਟਾਇਲੋਸਿਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਾਈਟਰ ਪਲੇਟ 'ਤੇ ਕੋਟ ਕੀਤੇ ਐਂਟੀਜੇਨ ਨਾਲ ਮੁਕਾਬਲਾ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਐਂਟੀ-ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੇ ਜੋੜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਰੰਗ ਦਿਖਾਉਣ ਲਈ ਟੀਐਮਬੀ ਸਬਸਟਰੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਸਮਾਈ ਇਸ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਟਾਇਲੋਸਿਨ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ, ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪਤਲੇਪਣ ਕਾਰਕ ਦੁਆਰਾ ਗੁਣਾ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਟਾਇਲੋਸਿਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
3. ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ
ਇਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ (ਚਿਕਨ, ਸੂਰ, ਬਤਖ) ਅਤੇ ਦੁੱਧ, ਸ਼ਹਿਦ, ਅੰਡੇ ਆਦਿ ਵਿੱਚ ਟਾਇਲੋਸਿਨ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਅਤੇ ਗੁਣਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
4. ਕਰਾਸ-ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ
ਟਾਇਲੋਸਿਨ ………………………………………………..100%
ਟਿਲਮੀਕੋਸਿਨ ……………………………………………… 2%
5. ਲੋੜੀਂਦੀ ਸਮੱਗਰੀ
5.1 ਉਪਕਰਨ:
----ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਾਈਟਰ ਪਲੇਟ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (450nm/630nm)
----ਰੋਟਰੀ ਵਾਸ਼ਪੀਕਰਨ ਜਾਂ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਸੁਕਾਉਣ ਵਾਲੇ ਯੰਤਰ
----ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ
----ਸ਼ੇਕਰ
----ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ
---- ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਸੰਤੁਲਨ (ਇੰਡਕਟੈਂਸ: 0.01 ਗ੍ਰਾਮ)
---- ਗ੍ਰੈਜੂਏਟਿਡ ਪਾਈਪੇਟ: 10 ਮਿ.ਲੀ
----ਰਬੜ ਪਾਈਪੇਟ ਬਲਬ
---- ਵੌਲਯੂਮੈਟ੍ਰਿਕ ਫਲਾਸਕ: 10 ਮਿ.ਲੀ
----ਪੌਲੀਸਟੀਰੀਨ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ: 50 ਮਿ.ਲੀ
----ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਿਪੇਟਸ: 20-200 ਮਿ.ਲੀ., 100-1000 ਮਿ.ਲੀ.
250 ਮਿ.ਲੀ.-ਮਲਟੀਪਿਪੇਟ
5.2 ਰੀਐਜੈਂਟਸ:
----ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ (NaOH, AR)
----ਸੋਡੀਅਮ ਬਾਈਕਾਰਬੋਨੇਟ (NaHCO3,AR)
---- ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ (NaCO3, AR)
----ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਸੈਟਿਕ ਐਸਿਡ (ਏਆਰ)
---- ਐਸੀਟੋਨਿਟ੍ਰਾਇਲ (ਏਆਰ)
----ਈਥਾਈਲ ਐਸੀਟੇਟ (AR)
┅┅n-ਹੈਕਸੇਨ (AR)
---- ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ
6. ਕਿੱਟ ਦੇ ਹਿੱਸੇ
l ਐਂਟੀਜੇਨ ਦੇ ਨਾਲ ਕੋਟੇਡ 96 ਖੂਹਾਂ ਵਾਲੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਾਈਟਰ ਪਲੇਟ
l ਮਿਆਰੀ ਹੱਲ (5 ਬੋਤਲਾਂ, 1 ਮਿ.ਲੀ./ਬੋਤਲ)
0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb
l ਸਪਾਈਕਿੰਗ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕੰਟਰੋਲ: (1ml/ਬੋਤਲ)1ppm
l ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ 1 ਮਿ.ਲੀ.……………………………… ਲਾਲ ਕੈਪ
l ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਘੋਲ 7 ਮਿ.ਲੀ.……………………… ਹਰਾ ਕੈਪ
l ਘੋਲ A 7 ਮਿ.ਲੀ.……………………………….. ਸਫੈਦ ਕੈਪ
l ਘੋਲ B 7 ਮਿ.ਲੀ.......………………………..ਲਾਲ ਕੈਪ
l ਸਟਾਪ ਘੋਲ 7 ਮਿ.ਲੀ.……………………….ਪੀਲੀ ਕੈਪ
l 20×ਕੇਂਦਰਿਤ ਧੋਣ ਦਾ ਹੱਲ 40 ਮਿ.ਲੀ
………………………………….. ਪਾਰਦਰਸ਼ੀ ਕੈਪ
l 4×ਕੇਂਦਰਿਤ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਹੱਲ 50 ਮਿ.ਲੀ
………………………………………….ਨੀਲੀ ਟੋਪੀ
7. ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦੀ ਤਿਆਰੀ:
ਹੱਲ 1:0.1mol/L NaOH ਹੱਲ
0.4g NaOH ਤੋਂ 100ml ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦਾ ਵਜ਼ਨ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
ਹੱਲ 2: 1mol/L NaOH ਹੱਲ
4g NaOH ਤੋਂ 100ml ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦਾ ਵਜ਼ਨ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।
ਹੱਲ 3: ਕਾਰਬੋਨੇਟ ਬਫਰ ਲੂਣ
ਦਾ ਹੱਲ1: 0.2M ਪੀ.ਬੀ
51.6 ਗ੍ਰਾਮ Na ਨੂੰ ਭੰਗ ਕਰੋ2HPO4· 12 ਐੱਚ2O, NaH ਦਾ 8.7 ਗ੍ਰਾਮ2PO4· 2 ਐੱਚ2ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਓ ਅਤੇ 1000 ਮਿ.ਲੀ. ਤੱਕ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।
ਦਾ ਹੱਲ2: ਕੱਢਣ ਦਾ ਹੱਲ
ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ 1:1( ਦੇ ਆਇਤਨ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ 2×ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੱਢਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ 2×ਐਕਸਟ੍ਰਕਸ਼ਨ ਘੋਲ ਦਾ 10ml + ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦਾ 10ml), ਜੋ ਨਮੂਨਾ ਕੱਢਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਵੇਗਾ,ਇਸ ਘੋਲ ਨੂੰ 1 ਮਹੀਨੇ ਲਈ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਦਾ ਹੱਲ3: ਹੱਲ ਧੋਵੋ
ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ 20×ਕੇਂਦਰਿਤ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨੂੰ 1:19( ਦੇ ਵਾਲੀਅਮ ਅਨੁਪਾਤ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰੋ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ 20×ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਦਾ 5ml + ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦਾ 95ml), ਜੋ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਧੋਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਵੇਗਾ।ਇਸ ਘੋਲ ਨੂੰ 1 ਮਹੀਨੇ ਲਈ 4℃ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.
8. ਨਮੂਨਾ ਤਿਆਰੀਆਂ
8.1 ਕਾਰਵਾਈ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਨੋਟਿਸ ਅਤੇ ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ:
(a) ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ-ਬੰਦ ਸੁਝਾਅ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨੂੰ ਜਜ਼ਬ ਕਰਨ ਵੇਲੇ ਸੁਝਾਅ ਬਦਲੋ।
(ਬੀ) ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਸਾਰੇ ਯੰਤਰ ਸਾਫ਼ ਹਨ।
(c) ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਵਿੱਚ ਰੱਖੋ।
(d) ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਵਾਰ ਜਾਂਚ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
8.2 ਪਸ਼ੂ ਟਿਸ਼ੂ (ਚਿਕਨ, ਸੂਰ, ਆਦਿ)
----ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ ਨਾਲ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਸਮਰੂਪ ਕਰੋ;
----ਇੱਕ 50ml ਪੋਲੀਸਟੀਰੀਨ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 2.0±0.05g ਹੋਮੋਜਨੇਟ ਲਓ;0.2M PB ਦਾ 2ml ਜੋੜੋ (ਦਾ ਹੱਲ1) , ਘੁਲਣ ਲਈ ਹਿਲਾਓ, ਅਤੇ ਫਿਰ 8ml ਐਥਾਈਲ ਐਸੀਟੇਟ ਪਾਓ ਅਤੇ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ ਜ਼ੋਰ ਨਾਲ ਹਿਲਾਓ;
---- ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ: 3000 ਗ੍ਰਾਮ / ਅੰਬੀਨਟ ਤਾਪਮਾਨ / 5 ਮਿੰਟ।
----ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਆਰਗੈਨਿਕ ਪੜਾਅ ਦੇ 4ml ਨੂੰ 10ml ਕੱਚ ਦੀ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ, ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਗੈਸ ਸਟ੍ਰੀਮ ਦੇ ਹੇਠਾਂ 50-60℃ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਨਾਲ ਸੁੱਕੋ;
----ਸੁੱਕੇ ਬਚੇ ਹੋਏ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ 1ml n-hexane ਨਾਲ ਘੋਲ ਦਿਓ, ਘੁਲਣ ਲਈ 30s ਲਈ ਵੌਰਟੈਕਸ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਘੋਲ ਦਾ 1ml ਸ਼ਾਮਿਲ ਕਰੋ (ਦਾ ਹੱਲ2), 1 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਵਰਟੇਕਸ।ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ: 3000 ਗ੍ਰਾਮ / ਅੰਬੀਨਟ ਤਾਪਮਾਨ / 5 ਮਿੰਟ
----ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਐਨ-ਹੈਕਸੇਨ ਪੜਾਅ ਨੂੰ ਹਟਾਓ;ਪਰਖ ਲਈ ਸਬਸਟਰੇਟ ਜਲਮਈ ਪੜਾਅ ਦਾ 50μl ਲਓ।
ਪਤਲਾ ਕਾਰਕ: 1
8.2 ਦੁੱਧ
----100μl ਕੱਚੇ ਦੁੱਧ ਦਾ ਨਮੂਨਾ ਲਓ, 900μl ਕੱਢਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨਾਲ ਮਿਲਾਓ (ਦਾ ਹੱਲ2), ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ.
---- ਪਰਖ ਲਈ ਤਿਆਰ ਘੋਲ ਦਾ 50μl ਲਓ।
ਪਤਲਾ ਕਾਰਕ: 10
9. ਪਰਖ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ
9.1 ਜਾਂਚ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਨੋਟਿਸ
੯.੧.੧ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਓ ਕਿ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25℃) 'ਤੇ ਹਨ।
9.1.2ਬਾਕੀ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ 2-8 'ਤੇ ਵਾਪਸ ਕਰੋ℃ਤੁਰੰਤ ਵਰਤਣ ਦੇ ਬਾਅਦ.
9.1.3ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੇਲ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਧੋਣਾ ਪਰਖ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਦਮ ਹੈ;ਇਹ ELISA ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਾਰਕ ਹੈ।
9.1.4 ਏਰੋਸ਼ਨੀ ਨੂੰ ਖਾਲੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੌਰਾਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੇਲ ਨੂੰ ਢੱਕ ਦਿਓ।
9.2 ਜਾਂਚ ਦੇ ਪੜਾਅ
9.2.1 ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25℃) 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲਈ ਬਾਹਰ ਕੱਢੋ, ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾਓ।
9.2.2 ਲੋੜੀਂਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢੋ ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ 2-8℃ 'ਤੇ ਜ਼ਿਪ-ਲਾਕ ਬੈਗ ਵਿੱਚ ਵਾਪਸ ਕਰੋ।
9.2.3 ਪਤਲੇ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਮੁੜ ਗਰਮ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
9.2.4ਗਿਣਤੀ:ਹਰੇਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲ ਪੋਜੀਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਮਿਆਰ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਡੁਪਲੀਕੇਟ ਵਿੱਚ ਚਲਾਏ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ।ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕਰੋ।
9.2.5Add ਸਟੈਂਡਰਡ ਹੱਲ/ਨਮੂਨਾ ਅਤੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਹੱਲ: ਮਿਆਰੀ ਹੱਲ ਦਾ 50µl ਜੋੜੋ((ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ)) ਜਾਂ ਅਨੁਸਾਰੀ ਖੂਹਾਂ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਨਮੂਨਾ।50µl ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ(ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ).ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਹੱਥੀਂ ਹਿਲਾ ਕੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ ਕਵਰ ਦੇ ਨਾਲ 37℃ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
9.2.6ਧੋਵੋ: ਢੱਕਣ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਟਾਓ ਅਤੇ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਤਰਲ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 250µl ਪਤਲੇ ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨਾਲ ਕੁਰਲੀ ਕਰੋ (ਦਾ ਹੱਲ3) 4-5 ਵਾਰ ਲਈ 10 ਸਕਿੰਟ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ 'ਤੇ।ਬਚੇ ਹੋਏ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਸੋਖਣ ਵਾਲੇ ਕਾਗਜ਼ ਨਾਲ ਜਜ਼ਬ ਕਰੋ (ਬਾਕੀ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨੂੰ ਅਣਵਰਤੀ ਟਿਪ ਨਾਲ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ)।
9.2.7ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਕੰਜੂਗੇਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ: ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਕਨਜੁਗੇਟ ਘੋਲ ਦਾ 100 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ(ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ) ਹਰੇਕ ਖੂਹ 'ਤੇ, ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37℃ 'ਤੇ ਢੱਕਣ ਨਾਲ ਪਕਾਓ।ਧੋਣ ਦੇ ਕਦਮ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਦੁਹਰਾਓ.
9.2.8ਰੰਗ: ਘੋਲ A ਦਾ 50µl ਜੋੜੋ(ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ) ਅਤੇ 50µl ਘੋਲ B(ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ) ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਨੂੰ.ਨਰਮੀ ਨਾਲ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ ਕਵਰ ਦੇ ਨਾਲ 37℃ 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।
9.2.9ਮਾਪ: ਸਟਾਪ ਹੱਲ ਦਾ 50µl ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ(ਕਿੱਟ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਗਈ) ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਨੂੰ.ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਮਿਕਸ ਕਰੋ ਅਤੇ 450nm 'ਤੇ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਨੂੰ ਮਾਪੋ (ਇਹ 450/630nm ਦੀ ਦੋਹਰੀ-ਤਰੰਗ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਨਾਲ ਸੁਝਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 5 ਮਿੰਟ ਦੇ ਅੰਦਰ ਨਤੀਜਾ ਪੜ੍ਹੋ)।
10. ਨਤੀਜੇ
10.1 ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਸਮਾਈ
ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪਹਿਲੇ ਸਟੈਂਡਰਡ (ਜ਼ੀਰੋ ਸਟੈਂਡਰਡ) ਦੇ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲ ਨਾਲ ਵੰਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 100% ਨਾਲ ਗੁਣਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜ਼ੀਰੋ ਸਟੈਂਡਰਡ ਨੂੰ 100% ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਮਾਈ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਿੱਚ ਹਵਾਲਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
B
ਸਮਾਈ (%) = —— × 100%
B0
ਬੀ ——ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਮਿਆਰ (ਜਾਂ ਨਮੂਨਾ)
B0 ——ਸ਼ੋਸ਼ਣ ਜ਼ੀਰੋ ਸਟੈਂਡਰਡ
10.2 ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ
----ਇੱਕ ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਖਿੱਚਣ ਲਈ: y-ਧੁਰੇ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਨਕਾਂ ਦੇ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਲਓ, ਟਾਈਲੋਸਿਨ ਸਟੈਂਡਰਡਜ਼ ਘੋਲ (ppb) ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਅਰਧ ਲਘੂਗਣਕ x-ਧੁਰੇ ਵਜੋਂ ਲਓ।
---- ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ (ppb) ਦੀ ਟਾਈਲੋਸਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ ਤੋਂ ਪੜ੍ਹਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਨੂੰ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਡਾਇਲਿਊਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ਨਾਲ ਗੁਣਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਅਸਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਧਿਆਨ ਦਿਓ:
ਡਾਟਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਬੇਨਤੀ ਕਰਨ 'ਤੇ ਮੁਹੱਈਆ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
11. ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧਤਾ
ਟੈਸਟ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ:1.5ppb
ਖੋਜ ਸੀਮਾ:
ਪਸ਼ੂ ਟਿਸ਼ੂ………………………………………………1.5ppb ਦੁੱਧ…………………………………………………………..15 ਪੀਪੀਬੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ:
ਪਸ਼ੂ ਟਿਸ਼ੂ……………………………………………… 80±15%
ਦੁੱਧ……………………………………………………… 80±10%
ਸ਼ੁੱਧਤਾ:
ELISA ਕਿੱਟ ਦਾ ਪਰਿਵਰਤਨ ਗੁਣਾਂਕ 10% ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ।
12. ਨੋਟਿਸ
12.1 ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲਾਂ ਦੇ ਔਸਤ ਮੁੱਲ ਘਟਾਏ ਜਾਣਗੇ ਜੇਕਰ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (20-25℃) ਤੱਕ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।
12.2 ਅਸਫ਼ਲ ਪੁਨਰ-ਉਤਪਾਦਨ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਕਦਮਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸੁੱਕਣ ਨਾ ਦਿਓ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੈੱਲ ਹੋਲਡਰ ਨੂੰ ਟੈਪ ਕਰਨ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ ਅਗਲਾ ਕਦਮ ਚਲਾਓ।
12.3 ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਹਰੇਕ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾਓ।
12.4 ਆਪਣੀ ਚਮੜੀ ਨੂੰ ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਤੋਂ ਦੂਰ ਰੱਖੋ ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ 0.5MH ਹੈ2SO4ਦਾ ਹੱਲ.
12.5 ਪੁਰਾਣੀਆਂ ਕਿੱਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਾ ਕਰੋ।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬੈਚਾਂ ਦੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਦਾ ਆਦਾਨ-ਪ੍ਰਦਾਨ ਨਾ ਕਰੋ, ਨਹੀਂ ਤਾਂ ਇਹ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦੇਵੇਗਾ।
12.6 ELISA ਕਿੱਟਾਂ ਨੂੰ 2-8℃ 'ਤੇ ਰੱਖੋ, ਫ੍ਰੀਜ਼ ਨਾ ਕਰੋ।ਬਾਕੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੇਲ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰੋ, ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੌਰਾਨ ਸਿੱਧੀ ਧੁੱਪ ਤੋਂ ਬਚੋ।ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਾਈਟਰ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਢੱਕਣ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
12.7 ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਨੂੰ ਛੱਡ ਦੇਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜੇਕਰ ਇਹ ਰੰਗ ਬਦਲਦਾ ਹੈ।ਰੀਐਜੈਂਟ ਖਰਾਬ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੇਕਰ ਜ਼ੀਰੋ ਸਟੈਂਡਰਡ ਦਾ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲ (450/630nm) 0.5 (A450nm<0.5) ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੈ।
12.8 ਘੋਲ A ਅਤੇ ਘੋਲ B ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਰੰਗੀਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ 15 ਮਿੰਟ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਰੰਗ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਬਹੁਤ ਹਲਕਾ ਹੈ ਤਾਂ ਤੁਸੀਂ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਸਮੇਂ ਦੀ ਰੇਂਜ ਨੂੰ 20 ਮਿੰਟ ਜਾਂ ਵੱਧ ਤੱਕ ਵਧਾ ਸਕਦੇ ਹੋ।ਕਦੇ ਵੀ 30 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਾ ਕਰੋ, ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਛੋਟਾ ਕਰੋ।
12.9 ਅਨੁਕੂਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ 37℃ ਹੈ।ਵੱਧ ਜਾਂ ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਸੋਖਣ ਮੁੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਵੇਗਾ।
13. ਸਟੋਰੇਜ
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਸਥਿਤੀ: 2-8℃.
ਸਟੋਰੇਜ਼ ਦੀ ਮਿਆਦ: 12 ਮਹੀਨੇ.
