produk

Prinsip Ujian

Kit ini adalah berdasarkan teknologi ELISA persaingan tidak langsung.Telaga mikrotiter disalut dengan antigen gandingan.Flumequinesisa dalam sampel bersaing dengan antigen yang disalut pada plat mikrotiter untuk antibodi.Selepas penambahan enzim berlabel anti-antibodi, substrat TMB digunakan untuk menunjukkan warna.Penyerapan sampel berkait negatif dengan tetrasiklin yang berada di dalamnya, selepas membandingkan dengan Keluk Piawai, didarab dengan berganda pencairan, kuantiti sisa Flumequine dalam sampel boleh dikira.

Aplikasi

Kit ini boleh digunakan dalam analisis kuantitatif dan kualitatif sisa flumequine dalam madu.

Tindak balas silang

Flumequine …………………..……………………………… 100%

Bahan yang Diperlukan

peralatan

┅┅Spektrofotometer plat mikrotiter (450nm/630nm)

┅┅Penghomogen atau pengawet perut

┅┅Penggoncang

┅┅Pengadun vorteks

┅┅Empar

┅┅Imbangan analitikal (kearuhan: 0.01g)

┅┅Pipet lulus: 15ml

┅┅Mentol pipet getah

┅┅Polystyrene Centrifuge tiub: 15ml, 50ml

┅┅Tabung uji kaca：10ml

┅┅Mikropipet: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -berbilang kecil

Reagen

┅┅n-heksana(AR)

┅┅Metilena klorida(AR)

┅┅Asetonitril(AR)

┅┅Air ternyahiion

-----Asid hidroklorik pekat(AR)

Komponen Kit

● Plat mikrotiter dengan 96 telaga bersalut antigen

● Penyelesaian standard (6 botol×1ml/botol)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Kawalan standard kepekatan tinggi:(1ml/botol)

…………………………………………………………………100ppb

● Konjugat enzim 12ml………………………………... penutup merah

● Larutan antibodi 7ml ……………..……..………..penutup hijau

● Penyelesaian A 7ml……..…………………..………..penutup putih

● Penyelesaian B 7ml …………….…………..………… penutup merah

● Hentikan larutan 7ml ……………………..………………tutup kuning

● 20XPelarut basuhan pekat 40ml

……………………………………………....topi lutsinar

●2X Penyelesaian pengekstrakan 50ml…………………………… penutup biru

Penyediaan Reagen

7.1 Sampel madu

Penyelesaian 1 : 0.2 M Larutan asid hidroklorik

Berat 41.5ml Asid hidroklorik pekat , cairkan dengan air ternyahion hingga 500 ml.

Penyelesaian 2: Cuci larutan

Cairkan larutan pencuci pekat dengan air ternyahion dalam nisbah isipadu 1:19, yang akan digunakan untuk membasuh pinggan.larutan yang dicairkan boleh disimpan pada suhu 4 ℃ selama 1 bulan.

Penyelesaian3: penyelesaian pengekstrakan

Cairkan larutan perahan 2×pekat dengan air ternyahion dalam nisbah isipadu 1:1 (atau bergantung kepada keperluan), yang akan digunakan untuk pengekstrakan sampel.Larutan cair ini boleh dipelihara selama 1 bulan pada 4 ℃.

Persediaan Contoh

8.1 Notis dan langkah berjaga-jaga untuk pengguna sebelum operasi

(a) Sila gunakan petua sekali sahaja dalam proses eksperimen, dan tukar petua apabila menyerap reagen yang berbeza.

(b) Pastikan semua instrumen eksperimen adalah bersih, jika tidak, ia akan mempengaruhi keputusan ujian.

8.2Sampel madu

-----Timbang 2g±0.05g sampel madu ke dalam tiub empar polistirena 50ml,

-----Tambahkan 2ml 0.2 M larutan asid hidroklorik (Penyelesaian 1), vorteks untuk mencampurkannya sepenuhnya, kemudian tambah 8ml metilena klorida, goncang dengan shaker selama 5 minit untuk larut sepenuhnya;

----- Centrifuge selama 10 minit, sekurang-kurangnya 3000g pada suhu bilik (20-25 ℃);

-----Alihkan fasa supernatan, ambil 2 ml larutan organik substrat ke dalam tiub kaca 10 ml. keringkan substatus di bawah mandi air aliran Nitrogen ( 50-60 ℃)

-----Tambah 1 ml n-heksana,vorteks selama 30s, kemudian tambah 1ml larutan perahan(larutan 3), vorteks sekali lagi selama 1min.Empar selama 5min, sekurang-kurangnya 3000g pada suhu bilik (20-25℃);

-----Alihkan fasa supernatan, ambil 50ml untuk ujian;

9. Proses ujian

9.1 Notis sebelum ujian

9.1.1 Pastikan semua reagen dan perigi mikro semuanya pada suhu bilik (20-25℃).

9.1.2 Kembalikan semua reagen selebihnya kepada 2-8 ℃ serta-merta selepas digunakan.

9.1.3 Mencuci perigi mikro dengan betul merupakan langkah penting dalam proses ujian;ia adalah faktor penting kepada pengulangan analisis ELISA.

9.1.4 Elakkan cahaya dan tutup perigi mikro semasa pengeraman.

9.2 Langkah-langkah Pengujian

9.2.1 Keluarkan semua reagen pada suhu bilik (20-25 ℃) selama lebih daripada 30 minit, homogenkan sebelum digunakan.

9.2.2 Keluarkan perigi mikro yang diperlukan dan kembalikan selebihnya ke dalam beg kunci zip pada suhu 2-8 ℃ serta-merta.

9.2.3 Larutan pencuci yang telah dicairkan hendaklah dipanaskan semula pada suhu bilik sebelum digunakan.

9.2.4Nombor:Nomborkan setiap kedudukan microwell dan semua piawaian dan sampel hendaklah dijalankan dalam pendua.Catatkan kedudukan piawai dan sampel.

9.2.5Tambah penyelesaian/sampel standard:Tambah 50 µl larutan standard atau sampel yang disediakan ke telaga yang sepadan.Tambah 50µl larutan antibodi.Campurkan perlahan-lahan dengan menggoncang pinggan secara manual dan mengeram selama 30 minit pada 25 ℃ dengan penutup.

9.2.6Basuh:Tanggalkan penutup perlahan-lahan dan tulen cecair keluar dari telaga dan bilas telaga mikro dengan larutan pencuci cair 250µl (larutan 2) pada selang 10s selama 4-5 kali.Serap sisa air dengan kertas penyerap (selebihnya gelembung udara boleh disingkirkan dengan hujung yang tidak digunakan).

9.2.8.Konjugat enzim:Tambah larutan konjugat enzim 100ml ke dalam setiap perigi, Gaul perlahan-lahan dengan menggoncang pinggan secara manual dan mengeram selama 30 minit pada suhu 25 ℃ dengan penutup.Ulangi langkah mencuci sekali lagi.

9.2.8pewarnaan:Tambahkan 50µl larutan A dan 50µl larutan B pada setiap sumur.Campurkan perlahan-lahan dengan menggoncang pinggan secara manual dan mengeram selama 15 minit pada 25 ℃ dengan penutup (lihat 12.8).

9.2.9ukur:Tambahkan 50µl larutan henti pada setiap telaga.Campurkan perlahan-lahan dengan menggoncang plat secara manual dan ukur penyerapan pada 450nm terhadap kosong udara (Ia dicadangkan mengukur dengan dwi-panjang gelombang 450/630nm. Baca keputusan dalam masa 5 minit selepas penambahan larutan henti. ) (Kita juga boleh mengukur dengan penglihatan tanpa penyelesaian henti singkatan daripada instrumen ELIASA)

Keputusan

10.1 Peratusan penyerapan

Nilai min nilai penyerapan yang diperolehi untuk piawaian dan sampel dibahagikan dengan nilai penyerapan piawai pertama (standard sifar) dan didarab dengan 100%.Oleh itu, piawai sifar dibuat bersamaan dengan 100% dan nilai penyerapan disebut dalam peratusan.

Penyerapan (%) = B/B0 ×100%

B ——standard penyerapan (atau sampel)

B0 ——standard sifar penyerapan

10.2 Keluk Piawai

Untuk melukis lengkung piawai: Ambil nilai penyerapan piawai sebagai paksi-y, separa logaritma kepekatan larutan piawai flumequine (ppb) sebagai paksi-x.

--- Yangflumequinekepekatan setiap sampel (ppb), yang boleh dibaca daripada lengkung penentukuran, didarab dengan gandaan pencairan yang sepadan bagi setiap sampel yang diikuti, dan kepekatan sebenar sampel diperolehi.

Untuk pengurangan data kit ELISA, perisian khas telah dibangunkan, yang boleh disediakan atas permintaan.

11. Kepekaan, ketepatan dan ketepatan

Sensitiviti Ujian：0.3ppb

Faktor pencairan sampel madu: 2

Had pengesanan

Sampel madu------------------------------------------------ -1ppb

Ketepatan

Sampel madu ---------------------------------------------- 90±20 %

Ketepatan

Pekali variasi kit ELISA adalah kurang daripada 10%.

12. Makluman

12.1 Nilai min nilai penyerapan yang diperolehi untuk piawaian dan sampel akan dikurangkan jika reagen dan sampel tidak dikawal pada suhu bilik (20-25 ℃).

12.2 Jangan biarkan perigi mikro kering di antara langkah-langkah untuk mengelakkan pengulangan yang tidak berjaya dan kendalikan langkah seterusnya serta-merta selepas mengetuk pemegang perigi mikro.

12.3.Homogenkan setiap reagen sebelum digunakan.

12.4.Jauhkan kulit anda daripada larutan henti kerana ia adalah 2M H₂SO₄penyelesaian.

12.5 Jangan gunakan kit yang sudah lapuk.Jangan tukar reagen kumpulan yang berbeza, kerana ia akan menurunkan sensitiviti.

12.6 Keadaan penyimpanan:

Simpan kit ELISA pada suhu 2-8 ℃, jangan beku.Kedap plat microwell rehat Elakkan cahaya matahari lurus semasa semua pengeraman.Meliputi plat mikrotiter adalah disyorkan.

12.7 Petunjuk untuk reagen menjadi buruk:

Larutan substrat hendaklah ditinggalkan jika ia bertukar warna.

Reagen mungkin menjadi buruk jika nilai penyerapan (450/630nm) piawai sifar adalah kurang daripada 0.5 (A450nm＜0.5).

12.8 Tindak balas pewarnaan memerlukan 15 minit selepas menambah Larutan A dan Larutan B. Dan anda boleh memanjangkan julat masa pengeraman dari 20 minit kepada lebih jika warna terlalu terang untuk ditentukan.Jangan melebihi 25min, Sebaliknya, pendekkan masa pengeraman dengan betul.

12.9 Suhu tindak balas optimum ialah 25 ℃.Suhu yang lebih tinggi atau lebih rendah akan membawa kepada perubahan nilai sensitiviti dan penyerapan.

13. Penyimpanan

Keadaan penyimpanan: 2-8 ℃.

Tempoh penyimpanan: 12 bulan.