hua

Tikanga Whakamatau

Ko tenei kete i ahu mai i te hangarau ELISA whakataetae autaki.Ko nga puna microtiter kua pania ki te antigen hono.FlumequineKo te toenga o te tauira ka whakataetae ki te antigen kua pania ki te pereti microtiter mo te antibody.Whai muri i te taapiri o te whaariki kua tapaina he anti-antibody, ka whakamahia te tïpako TMB hei whakaatu i te tae.Ko te whakaurunga o te tauira he hononga kino ki te tetracycline e noho ana i roto, i muri i te whakatairite ki te Anau Paerewa, ka whakareatia ki te maha waimeha, ka taea te tatau te rahinga toenga Flumequine i roto i te tauira.

Nga tono

Ka taea te whakamahi i tenei kete ki te tātari ine me te kounga o te toenga flumequine i roto i te honi.

Whakawhitiwhiti

Flumequine ……………………………………………………… 100%

Nga Rauemi e hiahiatia ana

Nga taputapu

┅┅Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer ranei puku

┅┅Karekau

┅┅Vortex whakaranu

┅┅Centrifuge

┅┅Paitika tātari (whakauru: 0.01g)

┅┅Pipeteti Paetahi: 15ml

┅┅Ripara pipette topuku

┅┅Polystyrene Centrifuge ngongo: 15ml, 50ml

┅┅Ngongo whakamātautau karaihe:10ml

┅┅Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -mahapipeteti

Reagents

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅Wai whakakorehia

-----Wakawa pūhaumāota (AR)

Nga Waahanga Kete

● Pereti Microtiter me nga puna 96 kua pania ki te antigen

● Nga otinga paerewa(6 pounamu×1ml/pounamu)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Mana paerewa kukū teitei:(1ml/pounamu)

…………………………………………………………………100ppb

● Whakakotahi Enzyme 12ml………………………………... potae whero

● otinga Antibody 7ml …………..……..……..potae matomato

● Otinga A 7ml……..…………………..………..potae ma

● Otinga B 7ml …………………………..………… potae whero

● Whakamutua te otinga 7ml ……………………..……….potae kowhai

● 20XConcentrated horoi otinga 40ml

……………………………………………...puata maramara

●2X Whakarewa Tangohanga 50ml…………………………… potae puru

Te Whakaritenga Reagents

7.1 Tauira honi

Otinga 1 : 0.2 M Wairewa waikawa Putawai

Taumaha 41.5ml waikawa pūmāota pūmāota , waimeha ki te wai deionized ki te 500 ml.

Otinga 2: Horoi wairewa

Waimeha i te otinga horoi kukū ki te wai deionized i roto i te ōwehenga rōrahi o 1:19, ka whakamahia mo te horoi i nga pereti.ka taea te rongoa i te wairewa kua waimeha ki te 4 ℃ mo te 1 marama.

Rongoā3: otinga tangohanga

Waimeha i te otinga tangohanga 2×kuiti ki te wai deionized i roto i te ration rōrahi o 1:1 (i runga i te whakaritenga ranei), ka whakamahia mo te tango tauira.Ka taea te pupuri i tenei wairewa waimeha mo te 1 marama i te 4 ℃.

Tauira Whakaritenga

8.1 Panui me nga whakatupato mo nga kaiwhakamahi i mua i te mahi

(a) Tena koa whakamahi i nga tohutohu kotahi i roto i te mahi whakamatautau, me te huri i nga tohutohu ina uru mai nga reagent rereke.

(b) Me mohio kei te ma katoa nga taputapu whakamatautau, ki te kore ka pa ki te hua whakamatautau.

8.2Tauira honi

----- Paunatia te 2g±0.05g tauira honi ki roto i te ngongo polystyrene centrifuge 50ml,

-----Taapirihia te 2ml 0.2 M Waikawa Waikawa (Waihanga 1), vortex kia uru katoa, katahi ka tapirihia te 8ml methylene chloride, ruia ki te wiri mo te 5min kia memeha katoa;

-----Centrifuge mo te 10 min, i te iti rawa 3000g i te pāmahana rūma (20-25 ℃);

-----Tangohia te wahanga supernatant, tangohia te 2 ml o te wairewa pararopi o te tïpako ki te ngongo karaihe 10 ml. whakamarokehia te wai i raro i te pati wai o te rere Nitrogen (50-60 ℃)

-----Taapirihia te 1 ml n-hexane,vortex mo te 30s, katahi ka tapirihia te 1ml wairewa tangohanga(tohanga 3), vortex ano mo te 1min.Centrifuge mo te 5min, i te iti rawa 3000g i te pāmahana rūma (20-25 ℃);

-----Tangohia te wahanga supernatant, tangohia te 50ml mo te whakamatautau;

9. Te tukanga whakamatautau

9.1 Panui i mua i te whakamatautau

9.1.1 Me mohio kei te noho katoa nga reagents me nga microwell i te pāmahana rūma (20-25 ℃).

9.1.2 Whakahokia nga toenga tauhohenga katoa ki te 2-8 ℃ i muri tonu i te whakamahinga.

9.1.3 Ko te horoi tika i nga microwells tetahi mahi nui i roto i te mahi whakamatautau;he mea tino nui ki te whakahoki ano i te tātaritanga ELISA.

9.1.4 Me karo i te marama, ka uhia nga microwells i te wa e whakangote ana.

9.2 Nga Mahi Whakatau

9.2.1 Tangohia nga reagents katoa ki waho i te pāmahana rūma (20-25 ℃) mo te neke atu i te 30 meneti, whakakotahi i mua i te whakamahi.

9.2.2 Kawea mai nga microwells e hiahiatia ana ka whakahoki i te toenga ki roto i te putea raka-kotu i te 2-8 ℃ tonu.

9.2.3 Me whakamahana ano te wairewa horoi waimeha kia noho ki te pāmahana rūma i mua i te whakamahi.

9.2.4Tau:Tauhia ia waahi microwell me nga paerewa me nga tauira katoa me whakahaere kia takirua.Tuhia nga paerewa me nga tuunga tauira.

9.2.5Tāpiri otinga/tauira paerewa:Taapirihia te 50 µl o te wairewa paerewa, te tauira kua rite ranei ki nga puna e rite ana.Tāpirihia te 50µl wairewa antibody.Whakaranu marietia ma te wiri a ringa i te pereti ka whakamakuku mo te 30 meneti i te 25℃ me te uhi.

9.2.6Horoi:Tango ata te taupoki ka purea te wai i roto i nga puna ka horoi i nga microwells ki te 250µl wairewa horoi horoi (te otinga 2) i te wa 10s mo te 4-5 wa.Horoihia te toenga wai me te pepa mimiti (ka taea te whakakore i te toenga o te mirumiru hau me te pito kaore i whakamahia).

9.2.8.Whakakotahitanga Enzyme:Tāpirihia he wairewa conjugate whākōkī 100ml ki ia puna, Whakaranu ata mā te wiriwiri ā-ringa i te pereti ka whakakororia mō te 30min i te 25℃ me te uhi.Whakahokia ano te taahiraa horoi.

9.2.8Tae:Tāpirihia te 50µl wairewa A me te 50µl wairewa B ki ia puna.Whakaranu marietia ma te wiri a ringa i te pereti ka whakakororia mo te 15 meneti i te 25 ℃ me te uhi (tirohia te 12.8).

9.2.9Ine:Tāpirihia te 50µl te otinga mutu ki ia puna.Whakaranu marietia ma te wiri a ringa i te pereti me te ine i te urunga ki te 450nm ki te hau patea (E whakaarotia ana me ine me te roangaru-rua o 450/630nm. Panuitia te hua i roto i te 5min i muri i te tapiritanga o te otinga mutu. ) (Ka taea hoki te ine ma te kite. te otinga kore mutu i te poto o te taputapu ELIASA)

Hua

10.1 Te ōrau o te urunga

Ko nga uara toharite o nga uara urunga kua whiwhi mo nga paerewa me nga tauira ka wehewehea e te uara whakauru o te paerewa tuatahi (kore paerewa) ka whakareatia ki te 100%.Ko te paerewa kore ka hangaia kia rite ki te 100% ka whakahuahia nga uara urunga i roto i nga ōrau.

Te horonga (%) = B/B0 ×100%

B ——paerewa horonga (tauira ranei)

B0 ——te horomanga kore paerewa

10.2 Anau Paerewa

Hei tuhi i te anau paerewa: Tangohia te uara ngongo o nga paerewa hei tuaka-y, hauruarua o te kukū o te otinga paerewa flumequine (ppb) hei tuaka-x.

--- Ko teflumequineKo te kukū o ia tauira (ppb), ka taea te panui mai i te ananga whakatikatika, ka whakareatia ki te maha waimehatanga e rite ana o ia tauira ka whai, ka whiwhi i te tino kukū o te tauira.

Mo te whakahekenga raraunga o nga kete ELISA, kua whakawhanakehia he rorohiko motuhake, ka taea te whakarato i runga i te tono.

11. Te tairongo, te tika me te tika

Whakamatau Tairongo：0.3ppb

Honi Tauira waimeha take: 2

Tepe rapunga

Tauira honi------------------------------------------------ -1ppb

Tika

Tauira honi ---------------------------------------------- 90±20 %

Tikanga

He iti iho i te 10% te whakarea rereke o te kete ELISA

12. Panui

12.1 Ko nga uara toharite o nga uara urunga ka riro mai mo nga paerewa me nga tauira ka whakaitihia mena kaore ano nga reagents me nga tauira i whakaritea ki te pāmahana rūma (20-25 ℃).

12.2 Kaua e tukua nga poka moroiti kia maroke i waenga i nga hikoinga kia kore ai e angitū te tukurua me te mahi i te mahi e whai ake nei i muri tonu i te paato i te kaipupuri microwells.

12.3.Whakatauritehia ia reagent i mua i te whakamahi.

12.4.Puritia to kiri mai i te otinga mutu na te mea ko te 2M H₂SO₄otinga.

12.5 Kaua e whakamahia nga kete kua tawhitotia.Kaua e whakawhitia nga reagents o nga roopu rereke, na te mea ka heke te aro.

12.6 Tikanga rokiroki:

Puritia nga kete ELISA ki te 2-8 ℃, kaua e whakatio.Me hiritia nga pereti moroiti moroiti Me karo i te ra tika i nga wa katoa o te hekitanga.E taunaki ana kia uhia nga pereti microtiter.

12.7 Nga tohu mo nga reagents e kino ana:

Me whakarere te wairewa papaa mehemea ka huri te tae.

Ka kino pea nga reagents ki te iti iho te uara urunga (450/630nm) o te paerewa kore i te 0.5 (A450nm＜0.5).

12.8 Me 15min te tauhohenga tae i muri i te taapiri i te Otinga A me te Otinga B. A ka taea e koe te whakaroa i te wa incubation mai i te 20min ki te nui ake mena he maamaa te tae ki te whakatau.Kaua rawa e neke ake i te 25min, Engari, whakapoto tika te wa incubation.

12.9 Ko te pāmahana tauhohenga tino pai ko te 25 ℃.Ko te teitei ake, te iti iho ranei o te pāmahana ka arahi ki nga huringa o te tairongo me nga uara whakauru.

13. Rokiroki

Te ahua rokiroki: 2-8 ℃.

Te wa rokiroki: 12 marama.