produktas

Testo principas

Šis rinkinys yra pagrįstas netiesiogiai konkuruojančia ELISA technologija.Mikrotitro šulinėliai yra padengti jungiamuoju antigenu.Flumequinelikutis mėginyje konkuruoja su antigenu, padengtu ant mikrotitravimo plokštelės dėl antikūno.Pridėjus fermentu pažymėto anti-antikūno, spalvai parodyti naudojamas TMB substratas.Mėginio absorbcija yra neigiamai susijusi su jame esančia tetraciklino liekana, palyginus su standartine kreive, padauginus iš praskiedimo kartotinio, galima apskaičiuoti Flumequine likučių kiekį mėginyje.

Programos

Šis rinkinys gali būti naudojamas kiekybinei ir kokybinei flumequine likučių meduje analizei.

Kryžminės reakcijos

Flumequine …………………………………………… 100 proc.

Reikalingos medžiagos

Įranga

┅┅Mikrotitravimo plokštelės spektrofotometras (450 nm / 630 nm)

┅┅Homogenizatorius arba Stomacheris

┅┅ Purtyklė

┅┅Vortex maišytuvas

┅┅Centrifuga

┅┅Analitiniai svarstyklės (induktyvumas: 0,01g)

┅┅Smulkinta pipetė: 15ml

┅┅Guminė pipetės lemputė

┅┅Polistireno centrifugos mėgintuvėlis: 15ml, 50ml

┅┅Stiklinis mėgintuvėlis: 10ml

┅┅Mikropipetės: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 ml - multipipetė

Reagentai

┅┅n-heksanas (AR)

┅┅Metileno chloridas (AR)

┅┅ Acetonitrilas (AR)

┅┅Dejonizuotas vanduo

----- Koncentruota druskos rūgštis (AR)

Komplekto komponentai

● Mikrotitravimo plokštelė su 96 šulinėliais, padengta antigenu

● Standartiniai tirpalai (6 buteliai × 1 ml buteliuke)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Aukštos koncentracijos standartinė kontrolė: (1 ml / buteliukas)

………………………………………………………100 ppb

● Fermentų konjugatas 12ml…………………………... raudonas dangtelis

● Antikūnų tirpalas 7 ml …………..……..………..žalia dangtelis

● A tirpalas 7 ml…………………………..………..baltas dangtelis

● Tirpalas B 7 ml …………….…………..………… raudonas dangtelis

● Stop tirpalas 7ml …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

● 20XKoncentruotas plovimo tirpalas 40ml

………………………………………..…..permatomas dangtelis

●2X Ekstrahavimo tirpalas 50ml…………………… mėlynas dangtelis

Reagentų paruošimas

7.1 Medaus pavyzdys

1 tirpalas: 0,2 M druskos rūgšties tirpalas

Svoris 41,5 ml Koncentruota druskos rūgštis, praskiesti dejonizuotu vandeniu iki 500 ml.

2 sprendimas: nuplaukite tirpalą

Koncentruotą plovimo tirpalą praskieskite dejonizuotu vandeniu tūrio santykiu 1:19, kuris bus naudojamas plokštelėms plauti.praskiestą tirpalą galima laikyti 4 ℃ temperatūroje 1 mėnesį.

Sprendimas3: ekstrahavimo tirpalas

Atskieskite 2 × koncentruotą ekstrahavimo tirpalą dejonizuotu vandeniu tūrio santykiu 1:1 (arba priklausomai nuo poreikio), kuris bus naudojamas mėginio ekstrahavimui.Šį atskiestą tirpalą galima laikyti 1 mėnesį 4 ℃ temperatūroje.

Mėginių paruošimas

8.1 Pastaba ir atsargumo priemonės naudotojams prieš naudojant

a) Eksperimento metu naudokite vienkartinius antgalius ir pakeiskite antgalius, kai sugeria kitą reagentą.

b) Įsitikinkite, kad visi eksperimentiniai instrumentai yra švarūs, kitaip tai paveiks tyrimo rezultatą.

8.2Medaus pavyzdys

----- Pasverkite 2 g ± 0,05 g medaus mėginį į 50 ml polistireno centrifugos mėgintuvėlį,

-----Įpilkite 2 ml 0,2 M vandenilio chlorido rūgšties tirpalo (1 tirpalas), sumaišykite, kad visiškai susimaišytų, tada įpilkite 8 ml metileno chlorido, purtykite 5 min., kad visiškai ištirptų;

-----Centrifuguokite 10 min, ne mažiau 3000g kambario temperatūroje (20-25 ℃);

----- Pašalinkite supernatanto fazę, paimkite 2 ml substrato organinio tirpalo į 10 ml stiklinį mėgintuvėlį. Išdžiovinkite substanciją vandens vonioje azoto sraute (50-60 ℃)

-----Įpilkite 1 ml n-heksano, sumaišykite 30 sekundžių, tada įpilkite 1 ml ekstrahavimo tirpalo (3 tirpalas) ir vėl sumaišykite 1 min.Centrifuguoti 5 min, mažiausiai 3000g kambario temperatūroje (20-25 ℃);

-----Pašalinkite supernatanto fazę, paimkite 50 ml tyrimui;

9. Tyrimo procesas

9.1 Pastaba prieš tyrimą

9.1.1 Įsitikinkite, kad visi reagentai ir mikrošulinėliai yra kambario temperatūros (20–25 ℃).

9.1.2 Panaudoję visus likusius reagentus grąžinkite į 2–8 ℃ temperatūrą.

9.1.3 Tinkamas mikrošulinėlių išplovimas yra svarbus tyrimo proceso etapas;tai yra gyvybiškai svarbus ELISA analizės pasikartojimo veiksnys.

9.1.4 Venkite šviesos ir uždenkite mikrošulinėlius inkubacijos metu.

9.2 Tyrimo etapai

9.2.1 Išimkite visus reagentus kambario temperatūroje (20-25 ℃) ilgiau nei 30 min., prieš naudodami homogenizuokite.

9.2.2 Išimkite reikiamus šulinėlius, o likusius nedelsdami grąžinkite į užtrauktuku užsegamą maišelį 2–8 ℃ temperatūroje.

9.2.3 Prieš naudojimą praskiestas plovimo tirpalas turi būti pašildytas iki kambario temperatūros.

9.2.4Numeris:Sunumeruokite kiekvieną mikrošulinėlio padėtį ir visus standartus bei mėginius reikia paleisti dviem egzemplioriais.Užrašykite standartų ir pavyzdžių pozicijas.

9.2.5Įpilkite standartinio tirpalo/mėginio:Į atitinkamas duobutes įpilkite 50 µl etaloninio tirpalo arba paruošto mėginio.Įpilkite 50 µl antikūnų tirpalo.Švelniai sumaišykite, purtydami lėkštę rankiniu būdu, ir inkubuokite 30 minučių 25 ℃ temperatūroje uždengę.

9.2.6Skalbti:Švelniai nuimkite dangtelį ir išvalykite skystį iš šulinėlių, o mikrošulinėlius praskalaukite 250 µl praskiesto plovimo tirpalo (2 tirpalas) kas 10 s 4-5 kartus.Vandens likučius sugerkite sugeriančiu popieriumi (likusį oro burbuliuką galite pašalinti nenaudojamu antgaliu).

9.2.8.Fermentų konjugatas:Į kiekvieną šulinėlį įpilkite 100 ml fermento konjugato tirpalo, švelniai sumaišykite, rankiniu būdu kratydami plokštelę, ir inkubuokite 30 min. 25 ℃ temperatūroje uždengę.Dar kartą pakartokite plovimo veiksmą.

9.2.8Spalva:Į kiekvieną šulinėlį įpilkite 50 µl tirpalo A ir 50 µl tirpalo B.Švelniai sumaišykite lėkštę purtant rankiniu būdu ir inkubuokite 15 minučių 25 ℃ temperatūroje su dangteliu (žr. 12.8).

9.2.9Išmatuoti:Į kiekvieną šulinėlį įpilkite 50 µl stabdymo tirpalo.Švelniai sumaišykite, purtydami plokštelę rankiniu būdu, ir išmatuokite absorbciją esant 450 nm, lyginant su tuščiu oro mėginiu (siūloma matuoti naudojant dvigubą 450/630 nm bangos ilgį. Rezultatą perskaitykite per 5 minutes po stabdymo tirpalo pridėjimo.) (Galime matuoti ir matydami be sustabdymo tirpalas, trumpai nei ELIASA instrumentas)

Rezultatai

10.1 Procentinė absorbcija

Gautos etalonų ir mėginių absorbcijos verčių vidutinės vertės dalijamos iš pirmojo etalono (nulinio standarto) absorbcijos vertės ir padauginamos iš 100%.Taigi nulinis standartas yra lygus 100%, o absorbcijos vertės nurodomos procentais.

Absorbcija (%) = B/B0 × 100 %

B — absorbcijos standartas (arba mėginys)

B0 — — absorbcijos nulinis standartas

10.2 Standartinė kreivė

Norėdami nubrėžti standartinę kreivę: y ašį paimkite etalonų absorbcijos vertę, o x ašį - pusiau logaritminę flumequine etaloninio tirpalo koncentraciją (ppb).

---flumequinekiekvieno mėginio koncentracija (ppb), kurią galima nuskaityti iš kalibravimo kreivės, padauginama iš kiekvieno sekamo mėginio atitinkamo praskiedimo kartotinio ir gaunama tikroji mėginio koncentracija.

ELISA rinkinių duomenų mažinimui buvo sukurta speciali programinė įranga, kurią galima pateikti pagal pageidavimą.

11. Jautrumas, tikslumas ir preciziškumas

Testo jautrumas：0,3 ppb

Medaus mėginio praskiedimo koeficientas: 2

Aptikimo riba

Medaus pavyzdys ------------------------------------------------ -1ppb

Tikslumas

Medaus mėginys --------------------------------------------- 90±20 %

Tikslumas

ELISA rinkinio variacijos koeficientas yra mažesnis nei 10%.

12. Pastaba

12.1. Jei reagentai ir mėginiai nebuvo sureguliuoti iki kambario temperatūros (20-25 ℃), vidutinės absorbcijos verčių vertės, gautos standartams ir mėginiams, bus sumažintos.

12.2 Neleiskite mikrošulinėliams išdžiūti tarp etapų, kad išvengtumėte nesėkmingo pasikartojimo, o kitą veiksmą atlikite iš karto bakstelėję mikrošulinėlių laikiklį.

12.3.Prieš naudodami kiekvieną reagentą homogenizuokite.

12.4.Laikykite odą toliau nuo stabdymo tirpalo, nes tai yra 2M H₂SO₄sprendimas.

12.5 Nenaudokite pasenusių rinkinių.Nekeiskite skirtingų partijų reagentų, nes sumažės jautrumas.

12.6 Laikymo sąlygos:

ELISA rinkinius laikykite 2–8 ℃ temperatūroje, neužšaldykite.Užsandarinkite likusias mikrošulinėlių plokšteles Per visus inkubavimus venkite tiesioginių saulės spindulių.Mikrotitravimo plokšteles rekomenduojama uždengti.

12.7 Reagentų gedimo indikacijos:

Pagrindo tirpalo reikėtų atsisakyti, jei jis nusidažo.

Reagentai gali sugesti, jei nulinio standarto absorbcijos vertė (450/630nm) yra mažesnė nei 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Įpylus tirpalo A ir B tirpalo, dažymo reakcijai reikia 15 minučių. Jei spalva per šviesi, kad būtų galima nustatyti, inkubacijos laiką galite pailginti nuo 20 minučių iki daugiau.Niekada neviršykite 25 min., Priešingai, tinkamai sutrumpinkite inkubacijos laiką.

12.9 Optimali reakcijos temperatūra yra 25 ℃.Aukštesnė ar žemesnė temperatūra lems jautrumo ir absorbcijos verčių pokyčius.

13. Sandėliavimas

Laikymo sąlygos: 2-8 ℃.

Laikymo laikotarpis: 12 mėnesių.