ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

ຫຼັກການການທົດສອບ

ຊຸດນີ້ແມ່ນອີງໃສ່ເຕັກໂນໂລຢີ ELISA ທີ່ແຂ່ງຂັນທາງອ້ອມ.ນໍ້າສ້າງ microtiter ໄດ້ຖືກເຄືອບດ້ວຍ antigen coupling.Flumequineresidue ໃນຕົວຢ່າງຈະແຂ່ງຂັນກັບ antigen ທີ່ເຄືອບຢູ່ໃນແຜ່ນ microtiter ສໍາລັບ antibody.ຫຼັງຈາກການເພີ່ມຂອງ enzyme ທີ່ຕິດສະຫຼາກຕ້ານ antibody, TMB substrate ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສະແດງໃຫ້ເຫັນສີ.ການດູດຊຶມຂອງຕົວຢ່າງແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບທາງລົບກັບ tetracycline ທີ່ອາໄສຢູ່ໃນມັນ, ຫຼັງຈາກປຽບທຽບກັບ Standard Curve, ຄູນດ້ວຍ dilution multiple, Flumequine residue quantity ໃນຕົວຢ່າງສາມາດຖືກຄິດໄລ່.

ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ

ຊຸດນີ້ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການວິເຄາະປະລິມານແລະຄຸນນະພາບຂອງສານຕົກຄ້າງ flumequine ໃນນໍ້າເຜິ້ງ.

ປະຕິກິລິຍາຂ້າມ

Flumequine …………………..………………………… 100%

ວັດສະດຸທີ່ຕ້ອງການ

ອຸປະກອນ

┅┅ເຄື່ອງວັດແທກແຜ່ນ Microtiter (450nm/630nm)

┅┅Homogenizer ຫຼື ກະເພາະອາຫານ

┅┅ Shaker

┅┅ເຄື່ອງປະສົມ Vortex

┅┅ຈຸດສູນກາງ

┅┅ຍອດການວິເຄາະ (inductance: 0.01g)

┅┅ ທໍ່ເກສອນຈົບຊັ້ນ: 15ml

┅┅ ທໍ່ທໍ່ຢາງ

┅┅Polystyrene Centrifuge tube: 15ml, 50ml

┅┅ ທໍ່ກວດແກ້ວ: 10ml

┅┅ຈຸນລະສານ: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multipipette

ທາດປະສົມ

┅┅n-hexane(AR)

┅┅Methylene chloride(AR)

┅┅Acetonitrile(AR)

┅┅ ນ້ຳ Deionized

-----ອາ​ຊິດ hydrochloric ເຂັ້ມ​ຂົ້ນ (AR​)

ອົງປະກອບຊຸດ

● ແຜ່ນ Microtiter ມີ 96 ຮູທີ່ເຄືອບດ້ວຍ antigen

● ການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ (6 ຂວດ× 1ml/ຂວດ)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● ການຄວບຄຸມມາດຕະຖານຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ: (1ml/ຂວດ)

…………………………………………………………….100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………... ຝາສີແດງ

● ນໍ້າຢາຕ້ານເຊື້ອ 7ml …………..……..….….. ຝາສີຂຽວ

● ການແກ້ໄຂ A 7ml……..…………………..………..ສີຂາວຝາ

● ວິທີແກ້ B 7ml …………….…………..………… ຝາແດງ

● Stop solution 7ml ………………………..……… ຝາສີເຫລືອງ

● 20XConcentrated wash solution 40ml

…………………………………………..….. ຝາປິດໂປ່ງໃສ

●2X ສານສະກັດຈາກ 50ml………………..… ຝາສີຟ້າ

ການກະກຽມ Reagents

7.1 ຕົວຢ່າງນໍ້າເຜິ້ງ

ການແກ້ໄຂ 1 : 0.2 M ການແກ້ໄຂອາຊິດ Hydrochloric

ນ້ຳໜັກ 41.5ml ອາຊິດ hydrochloric ເຂັ້ມຂຸ້ນ, ເຈືອຈາງດ້ວຍນ້ຳ deionized ເຖິງ 500 ml.

ການແກ້ໄຂ 2: ລ້າງການແກ້ໄຂ

ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂການລ້າງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນດ້ວຍນ້ໍາ deionized ໃນອັດຕາສ່ວນຂອງ 1: 19, ເຊິ່ງຈະຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການລ້າງແຜ່ນ.ການແກ້ໄຂເຈືອຈາງສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ℃ສໍາລັບ 1 ເດືອນ.

ການແກ້ໄຂ3: ການແກ້ໄຂການສະກັດ

ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂການສະກັດເອົາຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ 2 × ດ້ວຍນ້ໍາ deionized ໃນປະລິມານຂອງ 1: 1 (ຫຼືຂຶ້ນກັບຄວາມຕ້ອງການ), ເຊິ່ງຈະຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການສະກັດເອົາຕົວຢ່າງ.ການແກ້ໄຂເຈືອຈາງນີ້ສາມາດຮັກສາໄວ້ໄດ້ 1 ເດືອນຢູ່ທີ່ 4 ℃.

ການກະກຽມຕົວຢ່າງ

8.1 ແຈ້ງການ ແລະ ຂໍ້ຄວນລະວັງສຳລັບຜູ້ໃຊ້ກ່ອນການດຳເນີນການ

(a) ກະລຸນາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາແບບດຽວໃນຂະບວນການທົດລອງ, ແລະປ່ຽນຄໍາແນະນໍາໃນເວລາທີ່ດູດຊຶມ reagent ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.

(b) ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງມືທົດລອງທັງຫມົດແມ່ນສະອາດ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການວິເຄາະ.

8.2ຕົວຢ່າງນໍ້າເຜິ້ງ

----- ນໍ້າໜັກຕົວຢ່າງນໍ້າເຜິ້ງ 2g±0.05g ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge polystyrene 50ml,

-----ຕື່ມ 2ml 0.2 M hydrochloric acid solution (ວິທີແກ້ໄຂບັນຫາ 1), vortex ປະສົມໃຫ້ຫມົດແລ້ວຕື່ມ methylene chloride 8ml, ສັ່ນດ້ວຍ shaker ປະມານ 5 ນາທີເພື່ອໃຫ້ລະລາຍຫມົດ;

----- Centrifuge ສໍາລັບ 10 min, ຢ່າງຫນ້ອຍ 3000g ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25℃);

----- ເອົາ​ໄລຍະ supernatant ອອກ, ເອົາ 2 ml ຂອງ​ການ​ແກ້​ໄຂ​ອົງ​ການ​ຈັດ​ຕັ້ງ substrate ກັບ​ທໍ່​ແກ້ວ 10 ml.dry substate ພາຍ​ໃຕ້​ການ​ອາບ​ນ​້​ໍ​ຂອງ​ການ​ໄຫຼ​ໄນ​ໂຕຣ​ເຈນ (50-60℃​)

-----ຕື່ມ 1 ml n-hexane, vortex ສໍາລັບ 30s, ຫຼັງຈາກນັ້ນຕື່ມ 1ml ການສະກັດເອົາ (ການແກ້ໄຂ 3), vortex ອີກເທື່ອຫນຶ່ງສໍາລັບ 1 ນາທີ.Centrifuge ສໍາລັບ 5min, ຢ່າງຫນ້ອຍ 3000g ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25℃);

----- ເອົາໄລຍະ supernatant, ເອົາ 50ml ສໍາລັບການກວດສອບ;

9. ຂະບວນການວິເຄາະ

9.1 ແຈ້ງກ່ອນການສອບເສັງ

9.1.1 ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າ reagents ແລະ microwells ທັງຫມົດຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25 ℃).

9.1.2 ກັບຄືນ reagents ທັງຫມົດສ່ວນທີ່ເຫຼືອເປັນ 2-8 ℃ທັນທີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້.

9.1.3 ການລ້າງໄມໂຄເວວຢ່າງຖືກຕ້ອງເປັນຂັ້ນຕອນສໍາຄັນໃນຂະບວນການກວດສອບ;ມັນເປັນປັດໃຈສໍາຄັນຕໍ່ກັບການຊໍ້າຄືນຂອງການວິເຄາະ ELISA.

9.1.4 ຫຼີກລ່ຽງແສງສະຫວ່າງແລະປົກຫຸ້ມ microwells ໃນລະຫວ່າງການ incubation.

9.2 ຂັ້ນຕອນການວິເຄາະ

9.2.1 ເອົາ reagents ທັງ​ຫມົດ​ອອກ​ທີ່​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ (20-25℃​) ສໍາ​ລັບ​ການ​ຫຼາຍ​ກ​່​ວາ 30min​, ເຮັດ​ໃຫ້​ເປັນ​ homogeneous ກ່ອນ​ທີ່​ຈະ​ນໍາ​ໃຊ້​.

9.2.2 ເອົາ microwells ທີ່ຈໍາເປັນອອກແລະກັບຄືນສ່ວນທີ່ເຫຼືອເຂົ້າໄປໃນຖົງ zip-lock ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃ທັນທີ.

9.2.3 ການແກ້ໄຂການລ້າງທີ່ເຈືອຈາງຄວນໄດ້ຮັບການອົບອຸ່ນຄືນໃຫມ່ເພື່ອໃຫ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້.

9.2.4ຈໍານວນ:ຕົວເລກທຸກໆຕໍາແຫນ່ງ microwell ແລະມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງທັງຫມົດຄວນຈະຖືກດໍາເນີນການຊ້ໍາກັນ.ບັນທຶກມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງຕໍາແຫນ່ງ.

9.2.5ເພີ່ມການແກ້ໄຂ/ຕົວຢ່າງມາດຕະຖານ:ເພີ່ມ 50 µl ຂອງການແກ້ໄຂມາດຕະຖານຫຼືຕົວຢ່າງທີ່ກຽມໄວ້ໃສ່ກັບນ້ໍາດີ.ຕື່ມການແກ້ໄຂພູມຕ້ານທານ 50µl.ປະ​ສົມ​ຄ່ອຍໆ​ໂດຍ​ການ​ສັ່ນ​ແຜ່ນ​ດ້ວຍ​ຕົນ​ເອງ​ແລະ incubate ສໍາ​ລັບ​ການ 30 ນາ​ທີ​ທີ່ 25 ℃​ໂດຍ​ການ​ປົກ​ຫຸ້ມ​ຂອງ​.

9.2.6ລ້າງ:ຖອດຝາປິດອອກຄ່ອຍໆ ແລະ ລ້າງນໍ້າອອກຈາກນໍ້າສ້າງ ແລະລ້າງໄມໂຄເວວດ້ວຍນໍ້າຢາລ້າງນໍ້າທີ່ເຈືອຈາງ 250µl (ທາງອອກ 2) ໃນຊ່ວງເວລາ 10 ວິນາທີ ປະມານ 4-5 ເທື່ອ.ດູດນ້ໍາທີ່ຕົກຄ້າງດ້ວຍກະດາດດູດຊຶມ (ຟອງອາກາດສ່ວນທີ່ເຫຼືອສາມາດຖືກກໍາຈັດດ້ວຍປາຍທີ່ບໍ່ໄດ້ໃຊ້).

9.2.8.Enzyme conjugate:ເພີ່ມ enzyme conjugate solution 100ml ໃສ່ແຕ່ລະດີ, ປະສົມຄ່ອຍໆໂດຍການສັ່ນແຜ່ນດ້ວຍຕົນເອງແລະ incubate ສໍາລັບ 30 ນາທີທີ່ 25 ℃ດ້ວຍຝາປິດ.ເຮັດຊ້ໍາຂັ້ນຕອນການລ້າງອີກເທື່ອຫນຶ່ງ.

9.2.8ສີ:ເພີ່ມ 50µl ການແກ້ໄຂ A ແລະ 50µl ການແກ້ໄຂ B ໃສ່ແຕ່ລະນ້ໍາ.ປະ​ສົມ​ຄ່ອຍໆ​ໂດຍ​ການ​ສັ່ນ​ແຜ່ນ​ດ້ວຍ​ຕົນ​ເອງ​ແລະ incubate ສໍາ​ລັບ 15 ນາ​ທີ​ທີ່ 25 ℃​ໂດຍ​ການ​ປົກ​ຫຸ້ມ​ຂອງ (ເບິ່ງ 12.8​)​.

9.2.9ມາດຕະການ:ຕື່ມ 50µl ການແກ້ໄຂຢຸດໃສ່ແຕ່ລະນ້ໍາ.ປະສົມຄ່ອຍໆໂດຍການສັ່ນແຜ່ນດ້ວຍຕົນເອງແລະວັດແທກການດູດຊຶມຢູ່ທີ່ 450nm ຕໍ່ກັບອາກາດເປົ່າ (ມັນແນະນໍາການວັດແທກທີ່ມີຄວາມຍາວສອງຄື້ນຂອງ 450/630nm. ອ່ານຜົນໄດ້ຮັບພາຍໃນ 5 ນາທີຫຼັງຈາກເພີ່ມການແກ້ໄຂຢຸດ. ) (ພວກເຮົາຍັງສາມາດວັດແທກດ້ວຍສາຍຕາ. ການ​ແກ້​ໄຂ​ໂດຍ​ບໍ່​ມີ​ການ​ຢຸດ​ເຊົາ​ໃນ​ສັ້ນ​ຂອງ​ເຄື່ອງ​ມື ELIASA​)

ຜົນໄດ້ຮັບ

10.1 ອັດຕາສ່ວນການດູດຊຶມ

ຄ່າສະເລ່ຍຂອງຄ່າການດູດຊຶມທີ່ໄດ້ຮັບສໍາລັບມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງຖືກແບ່ງອອກດ້ວຍຄ່າການດູດຊຶມຂອງມາດຕະຖານທໍາອິດ (ມາດຕະຖານສູນ) ແລະຄູນ 100%.ດັ່ງນັ້ນມາດຕະຖານສູນແມ່ນເຮັດໃຫ້ເທົ່າກັບ 100% ແລະຄ່າການດູດຊຶມໄດ້ຖືກອ້າງອີງເປັນເປີເຊັນ.

ການດູດຊຶມ (%) = B/B0 × 100%

B — ມາດ​ຕະ​ຖານ​ການ​ດູດ​ຊຶມ (ຫຼື​ຕົວ​ຢ່າງ​)

B0 — ມາດຕະຖານການດູດຊຶມສູນ

10.2 ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ

ເພື່ອແຕ້ມເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ: ເອົາຄ່າການດູດຊຶມຂອງມາດຕະຖານເປັນແກນ y, ເຄິ່ງ logarithmic ຂອງຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ flumequine (ppb) ເປັນແກນ x.

--- ທflumequineຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງ (ppb), ເຊິ່ງສາມາດອ່ານໄດ້ຈາກເສັ້ນໂຄ້ງການປັບຕົວ, ຖືກຄູນດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງທີ່ປະຕິບັດຕາມ, ແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕົວຈິງຂອງຕົວຢ່າງແມ່ນໄດ້ຮັບ.

ສໍາລັບການຫຼຸດຜ່ອນຂໍ້ມູນຂອງຊຸດ ELISA, ຊອບແວພິເສດໄດ້ຖືກພັດທະນາ, ເຊິ່ງສາມາດສະຫນອງໃຫ້ຕາມຄໍາຮ້ອງຂໍ.

11. ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ຄວາມຖືກຕ້ອງແລະຄວາມແມ່ນຍໍາ

ການທົດສອບຄວາມອ່ອນໄຫວ:0.3ppb

ປັດໄຈການເຈືອຈາງຂອງນໍ້າເຜິ້ງ: 2

ຂີດຈຳກັດໃນການກວດຫາ

ຕົວຢ່າງນ້ຳເຜີ້ງ------------------------------------------------ -1ppb

ຄວາມຖືກຕ້ອງ

ຕົວຢ່າງນໍ້າເຜິ້ງ ------------------------------------------------ 90±20 %

ຄວາມຊັດເຈນ

ຄ່າສໍາປະສິດການປ່ຽນແປງຂອງຊຸດ ELISA ແມ່ນຫນ້ອຍກວ່າ 10%.

12. ແຈ້ງການ

12.1 ຄ່າສະເລ່ຍຂອງຄ່າການດູດຊຶມທີ່ໄດ້ຮັບມາດຕະຖານແລະຕົວຢ່າງຈະຫຼຸດລົງຖ້າຫາກວ່າ reagents ແລະຕົວຢ່າງບໍ່ໄດ້ຖືກຄວບຄຸມກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ (20-25 ℃).

12.2 ຢ່າປ່ອຍໃຫ້ microwells ແຫ້ງລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນຕ່າງໆເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຊໍ້າຊ້ອນທີ່ບໍ່ສໍາເລັດຜົນແລະດໍາເນີນການຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປທັນທີຫຼັງຈາກແຕະທີ່ຖື microwells.

12.3.ປະສົມທາດປະສົມແຕ່ລະຊະນິດກ່ອນນຳໃຊ້.

12.4.ຮັກສາຜິວຫນັງຂອງທ່ານຢູ່ຫ່າງຈາກການແກ້ໄຂຢຸດສໍາລັບມັນແມ່ນ 2M H₂SO₄ການແກ້ໄຂ.

12.5 ຢ່າໃຊ້ຊຸດທີ່ລ້າສະໄຫມ.ຢ່າແລກປ່ຽນ reagents ຂອງ batches ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ເພາະວ່າມັນຈະຫຼຸດລົງຄວາມອ່ອນໄຫວ.

12.6 ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ:

ຮັກສາຊຸດ ELISA ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃, ຢ່າແຊ່ແຂງ.ແຜ່ນ microwell ປິດປະທັບຕາ ຫຼີກລ້ຽງການແສງແດດຊື່ໃນລະຫວ່າງການ incubation ທັງຫມົດ.ແນະນໍາໃຫ້ກວມເອົາແຜ່ນ microtiter.

12.7 ຕົວຊີ້ວັດສໍາລັບ reagents ບໍ່ດີ:

ການແກ້ໄຂ substrate ຄວນຖືກປະຖິ້ມຖ້າມັນປ່ຽນສີ.

reagents ອາດຈະເຮັດໃຫ້ບໍ່ດີຖ້າຫາກວ່າຄ່າການດູດຊຶມ (450/630nm) ຂອງມາດຕະຖານສູນແມ່ນຫນ້ອຍກ່ວາ 0.5 (A450nm＜0.5).

12.8 ປະຕິກິລິຍາການໃສ່ສີຕ້ອງໃຊ້ເວລາ 15 ນາທີຫຼັງຈາກເພີ່ມການແກ້ໄຂ A ແລະການແກ້ໄຂ B. ແລະທ່ານສາມາດຍືດເວລາການອົບຈາກ 20 ນາທີໄປຕື່ມອີກຖ້າສີອ່ອນເກີນໄປທີ່ຈະຖືກກໍານົດ.ບໍ່ໃຫ້ເກີນ 25 ນາທີ, ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ຫຍໍ້ເວລາ incubation ຢ່າງຖືກຕ້ອງ.

12.9 ອຸນຫະພູມຕິກິຣິຍາທີ່ດີທີ່ສຸດແມ່ນ 25 ℃.ອຸນຫະພູມທີ່ສູງຂຶ້ນຫຼືຕ່ໍາຈະນໍາໄປສູ່ການປ່ຽນແປງຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວແລະຄ່າການດູດຊຶມ.

13. ການເກັບຮັກສາ

ສະພາບເກັບຮັກສາ: 2-8 ℃.

ໄລຍະເວລາເກັບຮັກສາ: 12 ເດືອນ.