ផលិតផល

គោលការណ៍សាកល្បង

ឧបករណ៍នេះផ្អែកលើបច្ចេកវិទ្យា ELISA ប្រកួតប្រជែងដោយប្រយោល។អណ្តូង microtiter ត្រូវបានស្រោបដោយ coupling antigen ។Flumequineសំណល់នៅក្នុងគំរូប្រកួតប្រជែងជាមួយអង់ទីហ្សែនដែលស្រោបលើបន្ទះមីក្រូទីតឺរសម្រាប់អង្គបដិប្រាណ។បន្ទាប់ពីការបន្ថែមអង់ស៊ីមដែលមានស្លាកប្រឆាំងនឹងអង្គបដិប្រាណ ស្រទាប់ខាងក្រោម TMB ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្ហាញពណ៌។ការស្រូបយកសំណាកគឺទាក់ទងអវិជ្ជមានទៅនឹង tetracycline ដែលរស់នៅក្នុងវា បន្ទាប់ពីប្រៀបធៀបជាមួយ Standard Curve គុណនឹង dilution multiple បរិមាណសំណល់ Flumequine នៅក្នុងគំរូអាចត្រូវបានគណនា។

កម្មវិធី

ឧបករណ៍នេះអាចត្រូវបានប្រើក្នុងការវិភាគបរិមាណ និងគុណភាពនៃសំណល់ flumequine នៅក្នុងទឹកឃ្មុំ។

ប្រតិកម្មឆ្លង

Flumequine ………………………..………………………… 100%

សម្ភារៈដែលត្រូវការ

បរិក្ខារ

┅┅ឧបករណ៍វាស់កម្រិតមីក្រូទីតទ័រ (450nm/630nm)

┅┅ម៉ាស៊ីនលាយឬក្រពះ

┅┅ Shaker

┅┅ឧបករណ៍លាយ Vortex

┅┅ Centrifuge

┅┅សមតុល្យវិភាគ (inductance: 0.01g)

┅┅ ទុយោបញ្ចប់ការសិក្សា៖ 15ml

┅┅ អំពូលកៅស៊ូ

┅┅ Polystyrene centrifuge tube: 15ml, 50ml

┅┅ បំពង់សាកល្បងកញ្ចក់៖ 10ml

┅┅មីក្រូភីតតេសៈ 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 មីលីលីត្រ - ពហុភី

សារធាតុប្រតិកម្ម

┅┅n-hexane(AR)

┅┅មេទីលលីនក្លរ (AR)

┅┅អាសេតូនីទ្រីល(AR)

┅┅ទឹកដេអ៊ីយ៉ូដ

----- អាស៊ីត hydrochloric ប្រមូលផ្តុំ (AR)

សមាសធាតុកញ្ចប់

● ចាន Microtiter ដែលមានអណ្តូង 96 ស្រោបដោយអង់ទីហ្សែន

● ដំណោះស្រាយស្តង់ដារ (6 ដប×1ml/ដប)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● ការគ្រប់គ្រងស្តង់ដារកំហាប់ខ្ពស់៖ (1ml/ដប)

…………………………………………………………………100ppb

● Enzyme conjugate 12ml………………………... មួកក្រហម

● ដំណោះស្រាយអង្គបដិប្រាណ 7ml …………..……..…...….. មួកបៃតង

● ដំណោះស្រាយ A 7ml……..…………………..………..White cap

● សូលុយស្យុង B 7ml …………….…………..………… មួកក្រហម

● Stop solution 7ml ………………………..……… មួកពណ៌លឿង

● 20XConcentrated wash solution 40ml

………………………………………….. មួកថ្លា

● 2X ដំណោះស្រាយចម្រាញ់ 50ml………………..… មួកខៀវ

ការរៀបចំសារធាតុ

7.1 គំរូទឹកឃ្មុំ

ដំណោះស្រាយ 1: 0.2 M ដំណោះស្រាយអាស៊ីត Hydrochloric

ទម្ងន់ 41.5ml ទឹកអាស៊ីតអ៊ីដ្រូក្លរីកកំហាប់ ពនឺជាមួយទឹក deionized ដល់ 500ml។

ដំណោះស្រាយទី 2: ដំណោះស្រាយលាងសម្អាត

ពនលាយសូលុយស្យុងលាងសម្អាតដែលប្រមូលផ្តុំដោយទឹក deionized ក្នុងសមាមាត្របរិមាណ 1:19 ដែលនឹងត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការលាងចាន។ដំណោះស្រាយពនឺអាចរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4 អង្សាសេរយៈពេល 1 ខែ។

ដំណោះស្រាយ3: ដំណោះស្រាយការស្រង់ចេញ

ពនលាយសូលុយស្យុងចម្រាញ់ចម្រាញ់ 2× ជាមួយទឹក deionized ក្នុងបរិមាណ 1:1 (ឬអាស្រ័យលើតម្រូវការ) ដែលនឹងត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការស្រង់ចេញគំរូ។ដំណោះស្រាយពនឺនេះអាចរក្សាទុកបានរយៈពេល 1 ខែនៅសីតុណ្ហភាព 4 ℃។

ការរៀបចំគំរូ

8.1 ការជូនដំណឹង និងការប្រុងប្រយ័ត្នសម្រាប់អ្នកប្រើប្រាស់មុនពេលប្រតិបត្តិការ

(ក) សូមប្រើគន្លឹះមួយដងក្នុងដំណើរការពិសោធន៍ ហើយផ្លាស់ប្តូរគន្លឹះនៅពេលស្រូបយកសារធាតុផ្សេងៗ។

(ខ) ត្រូវប្រាកដថាឧបករណ៍ពិសោធន៍ទាំងអស់ស្អាត បើមិនដូច្នោះទេ វានឹងមានឥទ្ធិពលលើលទ្ធផលតេស្ត។

៨.២គំរូទឹកឃ្មុំ

----- ថ្លឹង 2g±0.05g គំរូទឹកឃ្មុំចូលទៅក្នុងបំពង់ centrifuge polystyrene 50ml,

----- បន្ថែម 2ml 0.2 M ដំណោះស្រាយទឹកអាស៊ីត Hydrochloric (ដំណោះស្រាយ 1) vortex ដើម្បីលាយវាទាំងស្រុងបន្ទាប់មកបន្ថែម 8ml methylene chloride, អ្រងួនជាមួយនឹងទឹកក្រឡុកសម្រាប់ 5 នាទីដើម្បីរំលាយទាំងស្រុង;

----- Centrifuge 10 នាទី យ៉ាងហោចណាស់ 3000g នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25℃);

----- យកដំណាក់កាល supernatant យក 2ml នៃដំណោះស្រាយសរីរាង្គស្រទាប់ខាងក្រោមដាក់ក្នុងបំពង់កែវ 10ml.សម្ងួតស្រទាប់ខាងក្រោមក្រោមទឹកនៃលំហូរអាសូត (50-60℃)

----- បន្ថែម 1 ml n-hexane, vortex សម្រាប់ 30s, បន្ទាប់មកបន្ថែម 1ml ដំណោះស្រាយស្រង់ចេញ (ដំណោះស្រាយ 3), vortex ម្តងទៀតសម្រាប់ 1 នាទី។Centrifuge សម្រាប់ 5 នាទី, យ៉ាងហោចណាស់ 3000 ក្រាមនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃);

----- បំបាត់ដំណាក់កាល supernatant យក 50ml សម្រាប់ធ្វើតេស្ត;

9. ដំណើរការវិភាគ

9.1 សេចក្តីជូនដំណឹងមុនពេលធ្វើតេស្ត

9.1.1 ត្រូវប្រាកដថាសារធាតុ reagents និង microwells ទាំងអស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។

9.1.2 ត្រឡប់សារធាតុដែលនៅសេសសល់ទាំងអស់ទៅ 2-8 ℃ ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើរួច។

9.1.3 ការលាងសម្អាតមីក្រូវ៉េវឱ្យបានត្រឹមត្រូវគឺជាជំហានសំខាន់មួយនៅក្នុងដំណើរការនៃការវិភាគ។វាជាកត្តាសំខាន់ចំពោះភាពដដែលៗនៃការវិភាគ ELISA ។

9.1.4 ជៀសវាងពន្លឺ និងគ្របដណ្តប់ microwells កំឡុងពេល incubation ។

9.2 ជំហាននៃការវិភាគ

9.2.1 យក reagents ទាំងអស់ចេញនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25℃) លើសពី 30min, ធ្វើដូចគ្នាមុនពេលប្រើ។

9.2.2 យក microwells ដែលត្រូវការចេញ ហើយប្រគល់អ្វីដែលនៅសល់ទៅក្នុងថង់ zip-lock នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ភ្លាមៗ។

9.2.3 ដំណោះស្រាយលាងសម្អាតដែលពនឺគួរតែត្រូវបានកំដៅឡើងវិញដើម្បីឱ្យនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់មុនពេលប្រើប្រាស់។

៩.២.៤ចំនួន:លេខរៀងរាល់ទីតាំងរបស់ microwell និងស្តង់ដារ និងគំរូទាំងអស់គួរតែត្រូវបានដំណើរការដោយស្ទួន។កត់ត្រាទីតាំងស្តង់ដារ និងគំរូ។

៩.២.៥បន្ថែមដំណោះស្រាយស្តង់ដារ / គំរូ៖បន្ថែម 50 μlនៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារឬគំរូដែលបានរៀបចំទៅអណ្តូងដែលត្រូវគ្នា។បន្ថែមដំណោះស្រាយ 50µl អង្គបដិប្រាណ។លាយ​ថ្នមៗ​ដោយ​អង្រួន​ចាន​ដោយ​ដៃ ហើយ​ញាត់​រយៈពេល 30 នាទី​នៅ​សីតុណ្ហភាព 25 ℃​ជាមួយ​គម្រប​។

៩.២.៦លាង៖ដោះគម្របចេញថ្នមៗ ហើយសម្អាតវត្ថុរាវចេញពីអណ្តូង ហើយលាងជម្រះមីក្រូវ៉េវជាមួយនឹងដំណោះស្រាយលាងសម្អាត 250µl (ដំណោះស្រាយទី 2) នៅចន្លោះពេល 10 វិនាទី 4-5 ដង។ស្រូបទឹកដែលនៅសេសសល់ជាមួយក្រដាសស្រូបយក (ពពុះខ្យល់ដែលនៅសល់អាចត្រូវបានលុបចោលដោយប្រើព័ត៌មានជំនួយដែលមិនប្រើ) ។

៩.២.៨.ការភ្ជាប់អង់ស៊ីម៖បន្ថែមអង់ស៊ីមសូលុយស្យុង 100ml ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ លាយថ្នមៗដោយអង្រួនចានដោយដៃ ហើយដាក់ដាំឱ្យពុះរយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 25 អង្សារសេដោយគម្រប។ធ្វើជំហានលាងសម្អាតម្តងទៀត។

៩.២.៨ពណ៌៖បន្ថែមដំណោះស្រាយ 50µl A និង 50µl ដំណោះស្រាយ B ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។លាយថ្នមៗដោយអ្រងួនចានដោយដៃហើយញាស់រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 25 ℃ជាមួយគម្រប (សូមមើល 12.8) ។

៩.២.៩រង្វាស់៖បន្ថែម 50µl ដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។លាយថ្នមៗដោយអង្រួនចានដោយដៃ ហើយវាស់កម្រិតស្រូបទាញនៅកម្រិត 450nm ទល់នឹងខ្យល់ទទេ (វាត្រូវបានគេណែនាំថាវាស់ជាមួយរលកពីរនៃ 450/630nm ។ អានលទ្ធផលក្នុងរយៈពេល 5 នាទីបន្ទាប់ពីការបន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់។ ) (យើងក៏អាចវាស់ដោយការមើលឃើញផងដែរ។ ដំណោះស្រាយដោយមិនឈប់ក្នុងរយៈពេលខ្លីនៃឧបករណ៍ ELIASA)

លទ្ធផល

10.1 ភាគរយស្រូបយក

តម្លៃមធ្យមនៃតម្លៃស្រូបទាញដែលទទួលបានសម្រាប់ស្តង់ដារ និងគំរូត្រូវបានបែងចែកដោយតម្លៃស្រូបនៃស្តង់ដារទីមួយ (ស្តង់ដារសូន្យ) និងគុណនឹង 100%។ដូច្នេះស្តង់ដារសូន្យត្រូវបានបង្កើតឡើងស្មើនឹង 100% ហើយតម្លៃស្រូបយកត្រូវបានដកស្រង់ជាភាគរយ។

ការស្រូបយក (%) = B/B0 × 100%

ខ - ស្តង់ដារស្រូបយក (ឬគំរូ)

B0 — ស្តង់ដារស្រូបយកសូន្យ

10.2 ខ្សែកោងស្តង់ដារ

ដើម្បីគូរខ្សែកោងស្តង់ដារ៖ យកតម្លៃស្រូបនៃស្តង់ដារជាអ័ក្ស y, លោការីតពាក់កណ្តាលនៃការប្រមូលផ្តុំនៃដំណោះស្រាយស្តង់ដារ flumequine (ppb) ជាអ័ក្ស x ។

--- នេះ។flumequineកំហាប់នៃសំណាកនីមួយៗ (ppb) ដែលអាចអានបានពីខ្សែកោងនៃការក្រិតតាមខ្នាត ត្រូវបានគុណដោយការបំភាន់ដែលត្រូវគ្នាច្រើននៃសំណាកនីមួយៗដែលធ្វើតាម ហើយការប្រមូលផ្តុំជាក់ស្តែងនៃគំរូត្រូវបានទទួល។

សម្រាប់ការកាត់បន្ថយទិន្នន័យនៃកញ្ចប់ ELISA កម្មវិធីពិសេសត្រូវបានបង្កើតឡើង ដែលអាចត្រូវបានផ្តល់ជូនតាមការស្នើសុំ។

11. ភាពរសើប ភាពត្រឹមត្រូវ និងភាពជាក់លាក់

តេស្តភាពរសើប:0.3ppb

កត្តា​រំលាយ​គំរូ​ទឹកឃ្មុំ៖ ២

ដែនកំណត់នៃការរកឃើញ

គំរូទឹកឃ្មុំ ------------------------------------------------ -1 ភី

ភាព​ត្រឹមត្រូវ

គំរូទឹកឃ្មុំ ------------------------------------------------ 90±20 %

ភាពជាក់លាក់

មេគុណបំរែបំរួលនៃកញ្ចប់ ELISA គឺតិចជាង 10% ។

12. សេចក្តីជូនដំណឹង

12.1 តម្លៃមធ្យមនៃតម្លៃស្រូបទាញដែលទទួលបានសម្រាប់ស្តង់ដារ និងសំណាកគំរូនឹងត្រូវបានកាត់បន្ថយ ប្រសិនបើសារធាតុប្រតិកម្ម និងសំណាកមិនត្រូវបានគ្រប់គ្រងទៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (20-25 ℃)។

12.2 កុំអនុញ្ញាតឱ្យ microwells ស្ងួតនៅចន្លោះជំហាន ដើម្បីជៀសវាងការកើតឡើងដដែលៗដែលមិនបានជោគជ័យ ហើយដំណើរការជំហានបន្ទាប់ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប៉ះរន្ធ microwells។

១២.៣.ធ្វើ​ឲ្យ​សារធាតុ​ប្រតិកម្ម​នីមួយៗ​ដូចគ្នា​មុន​នឹង​ប្រើ។

១២.៤.រក្សាស្បែករបស់អ្នកឱ្យឆ្ងាយពីដំណោះស្រាយបញ្ឈប់សម្រាប់វាគឺ 2M H₂SO₄ដំណោះស្រាយ។

12.5 កុំប្រើឧបករណ៍ហួសសម័យ។កុំផ្លាស់ប្តូរសារធាតុនៃបាច់ផ្សេងៗគ្នាព្រោះវានឹងបន្ថយភាពរសើប។

12.6 លក្ខខណ្ឌផ្ទុក៖

ទុកកញ្ចប់ ELISA នៅសីតុណ្ហភាព 2-8 ℃ កុំបង្កក។ផ្លាក microwell បិទជិត ជៀសវាងពន្លឺព្រះអាទិត្យត្រង់ក្នុងអំឡុងពេល incubation ទាំងអស់។ការគ្របដណ្តប់ចានមីក្រូទីតត្រូវបានណែនាំ។

12.7 សូចនាករសម្រាប់សារធាតុប្រតិកម្មមិនល្អ៖

ដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោមគួរតែត្រូវបានគេបោះបង់ចោលប្រសិនបើវាប្រែពណ៌។

សារធាតុប្រតិកម្មអាចប្រែជាមិនល្អ ប្រសិនបើតម្លៃស្រូបទាញ (450/630nm) នៃស្តង់ដារសូន្យគឺតិចជាង 0.5 (A450nm＜0.5)។

12.8 ប្រតិកម្ម​ពណ៌​ត្រូវការ​រយៈពេល 15 នាទី​បន្ទាប់​ពី​បន្ថែម​ដំណោះស្រាយ A និង​ដំណោះស្រាយ B។ ហើយ​អ្នក​អាច​ពន្យារ​រយៈពេល​ភ្ញាស់​ចាប់ពី 20 នាទី​ទៅ​ច្រើន​ទៀត ប្រសិនបើ​ពណ៌​ស្រាល​ពេក​មិន​អាច​កំណត់បាន។មិនត្រូវលើសពី 25 នាទីឡើយ ផ្ទុយទៅវិញ កាត់បន្ថយរយៈពេលភ្ញាស់ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។

12.9 សីតុណ្ហភាពប្រតិកម្មល្អបំផុតគឺ 25 ℃។សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ ឬទាបនឹងនាំទៅរកការផ្លាស់ប្តូរនៃភាពប្រែប្រួល និងតម្លៃស្រូបទាញ។

13. ការផ្ទុក

លក្ខខណ្ឌផ្ទុក: 2-8 ℃។

រយៈពេលផ្ទុក៖ ១២ ខែ។