vöru

Prófregla

Þetta sett er byggt á óbeinni samkeppnishæfri ELISA tækni.Örtítraholurnar eru húðaðar með tengingarmótefnavaka.Flumequineleifar í sýninu keppir við mótefnavakann sem er húðaður á örtítraplötunni um mótefnið.Eftir að ensímmerkt mótefni hefur verið bætt við er TMB hvarfefni notað til að sýna litinn.Frásog sýnisins er neikvætt tengt því tetracýklíni sem er í því, eftir að hafa borið saman við staðlaða ferilinn, margfaldað með þynningarmargfeldinu, er hægt að reikna út magn Flumequine leifa í sýninu.

Umsóknir

Þetta sett er hægt að nota við megindlega og eigindlega greiningu á flumequine leifum í hunangi.

Krossviðbrögð

Flumequine ………………………………………………… 100%

Efni sem þarf

Búnaður

┅┅Microtiter plötu litrófsmælir (450nm/630nm)

┅┅Hemunarefni eða magaefni

┅┅Histari

┅┅Vortex hrærivél

┅┅ Miðflótta

┅┅Greiningarjafnvægi (inductance: 0,01g)

┅┅Kráðpípetta: 15ml

┅┅Gúmmípípettupera

┅┅Pólýstýren miðflótta rör: 15ml, 50ml

┅┅Gler tilraunaglas：10ml

┅┅ Örpípettur: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -fjölpípetta

Hvarfefni

┅┅n-hexan(AR)

┅┅Metýlenklóríð (AR)

┅┅Asetónítríl (AR)

┅┅Afjónað vatn

----- Óblandaðri saltsýra (AR)

Kit íhlutir

● Örtítraplata með 96 brunnum húðuð með mótefnavaka

● Staðlaðar lausnir (6 flöskur × 1 ml/flaska)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Staðalstýring með háum styrk: (1ml/flaska)

…………………………………………………………………100ppb

● Ensímsamtenging 12ml……………………………… rauð lok

● Mótefnalausn 7ml …………..……..….…..græn loki

● Lausn A 7ml……..………………………………………..hvítt lok

● Lausn B 7ml ………………….…………..………… rauð lok

● Stöðva lausn 7ml …………………………..………gult lok

● 20XSafnlaus þvottalausn 40ml

…………………………………………..…..gegnsætt lok

●2X útdráttarlausn 50ml………………………… blár loki

Undirbúningur hvarfefna

7.1 Hunangssýni

Lausn 1 : 0,2 M saltsýrulausn

Þyngd 41,5 ml Óblandaðri saltsýra, þynnt með afjónuðu vatni í 500 ml.

Lausn 2: Þvottalausn

Þynntu óblandaða þvottalausnina með afjónuðu vatni í rúmmálshlutfallinu 1:19, sem verður notað til að þvo plöturnar.þynntu lausnina má geyma við 4 ℃ í 1 mánuð.

Lausn3: útdráttarlausn

Þynntu 2× óblandaða útdráttarlausnina með afjónuðu vatni í rúmmálshlutfallinu 1:1 (eða fer eftir þörfum), sem verður notað við sýnisútdrátt.Þessa þynntu lausn er hægt að varðveita í 1 mánuð við 4 ℃.

Dæmi um undirbúning

8.1 Tilkynning og varúðarráðstafanir fyrir notendur fyrir notkun

(a) Vinsamlegast notaðu stakar ábendingar í tilraunaferlinu og breyttu oddunum þegar þú gleypir mismunandi hvarfefni.

(b) Gakktu úr skugga um að öll tilraunatæki séu hrein, annars hefur það áhrif á niðurstöður greiningar.

8.2Hunangssýni

-----Vigið 2g±0,05g hunangssýni í 50ml pólýstýren skilvindurör,

-----Bætið 2ml 0,2 M saltsýrulausn (lausn 1), hringið í til að blanda því alveg, bætið síðan við 8ml metýlenklóríði, hristið með hristara í 5 mínútur til að leysast upp alveg;

----- Miðflótta í 10 mínútur, að minnsta kosti 3000 g við stofuhita (20-25 ℃);

-----Fjarlægið ofanvatnsfasann, takið 2 ml af lífrænu hvarfefnislausninni í 10 ml glerrör. Þurrkið undirlagið undir vatnsbaði af köfnunarefnisflæði (50-60 ℃)

-----Bætið við 1 ml af n-hexani, hringið í 30 sekúndur, bætið síðan við 1ml útdráttarlausn (lausn 3), hringið aftur í 1 mín.Miðflótta í 5 mínútur, að minnsta kosti 3000 g við stofuhita (20-25 ℃);

-----Fjarlægðu yfirborðsfasann, taktu 50 ml til greiningar;

9. Prófunarferli

9.1 Tilkynning fyrir prófun

9.1.1 Gakktu úr skugga um að öll hvarfefni og örholur séu allir við stofuhita (20-25 ℃).

9.1.2 Settu öll rest hvarfefnin aftur í 2-8 ℃ strax eftir notkun.

9.1.3 Að þvo örholurnar rétt er mikilvægt skref í prófunarferlinu;það er mikilvægur þáttur fyrir endurtekningu ELISA greiningarinnar.

9.1.4 Forðist ljósið og hyljið örholurnar meðan á ræktun stendur.

9.2 Greiningarskref

9.2.1 Taktu öll hvarfefni út við stofuhita (20-25 ℃) í meira en 30 mínútur, gerðu einsleitan fyrir notkun.

9.2.2 Fáðu örholurnar sem þarf út og skilaðu afganginum strax í renniláspokann við 2-8 ℃.

9.2.3 Þynntu þvottalausnina á að hita aftur þannig að hún sé við stofuhita fyrir notkun.

9.2.4Númer:Númerið hverja örholustöðu og alla staðla og sýni skulu keyrð í tvíriti.Skráðu staðla og sýnishorn.

9.2.5Bæta við staðlaðri lausn/sýni:Bætið 50 µl af staðallausn eða tilbúnu sýni í samsvarandi brunna.Bætið við 50µl mótefnalausn.Blandið varlega með því að hrista plötuna handvirkt og ræktið í 30 mínútur við 25 ℃ með loki.

9.2.6Þvo:Fjarlægðu hlífina varlega og hreinsaðu vökvann úr brunnunum og skolaðu örholurnar með 250 µl þynntri þvottalausn (lausn 2) með 10 sekúndum millibili í 4-5 sinnum.Gleypið afgangsvatnið með ísogandi pappír (hægt er að fjarlægja loftbóluna sem eftir er með ónotuðum odd).

9.2.8.Ensím samtenging:Bætið 100 ml ensímsamtengingarlausn í hvern brunn, blandið varlega saman með því að hrista plötuna handvirkt og ræktið í 30 mínútur við 25 ℃ með loki.Endurtaktu þvottaskrefið aftur.

9.2.8Litun:Bætið 50 µl lausn A og 50 µl lausn B í hvern brunn.Blandið varlega með því að hrista plötuna handvirkt og ræktið í 15 mínútur við 25 ℃ með loki (sjá 12.8).

9.2.9Mál:Bætið 50 µl af stöðvunarlausninni í hvern brunn.Blandið varlega með því að hrista plötuna handvirkt og mæla gleypni við 450 nm á móti loftbláu (mælt er með tvíbylgjulengd 450/630 nm. Lesið niðurstöðuna innan 5 mínútna eftir að stöðvunarlausn hefur verið bætt við. ) (Við getum líka mælt með sjón. án stöðvunarlausnar nema ELIASA tækið)

Niðurstöður

10.1 Hlutfallsgleypni

Meðalgildum gleypnigilda sem fæst fyrir staðla og sýni er deilt með gleypnigildi fyrsta staðalsins (núllstaðall) og margfaldað með 100%.Núllstaðallinn er þannig gerður jafn 100% og gleypnigildin eru gefin upp í prósentum.

Frásog (%) = B/B0 ×100%

B ——gleypnistaðall (eða sýni)

B0 ——gleypni núll staðall

10.2 Standard Curve

Til að teikna staðlaðan feril: Taktu gleypnigildi staðla sem y-ás, hálflogaritmískt af styrk flumequine staðlalausnarinnar (ppb) sem x-ás.

--- Theflumequinestyrkur hvers sýnis (ppb), sem hægt er að lesa úr kvörðunarferlinu, er margfaldaður með samsvarandi þynningarmargfeldi hvers sýnis sem fylgt er eftir og raunverulegur styrkur sýnis er fenginn.

Til að draga úr gögnum á ELISA pökkunum hefur verið þróaður sérstakur hugbúnaður sem hægt er að útvega sé þess óskað.

11. Næmi, nákvæmni og nákvæmni

Próf næmi：0,3ppb

Hunangssýnisþynningarstuðull: 2

Greiningarmörk

Hunangssýni -------------------------------------------------- -1ppb

Nákvæmni

Hunangssýni ---------------------------------------------------- 90±20 %

Nákvæmni

Breytileikastuðull ELISA settsins er minni en 10%.

12. Tilkynning

12.1 Meðalgildi gleypnigildanna sem fást fyrir staðla og sýni munu lækka ef hvarfefnin og sýnin hafa ekki verið stillt í stofuhita (20-25 ℃).

12.2 Ekki leyfa örholum að þorna á milli þrepa til að forðast misheppnaðar endurtekningar og notaðu næsta skref strax eftir að hafa bankað á örholuhaldarann.

12.3.Einsleitið hvert hvarfefni fyrir notkun.

12.4.Haltu húðinni frá stöðvunarlausninni því hún er 2M H₂SO₄lausn.

12.5 Ekki nota pökkin úrelt.Ekki skipta um hvarfefni mismunandi lotum, því það mun minnka næmni.

12.6 Geymsluástand:

Haltu ELISA settunum við 2-8 ℃, má ekki frjósa.Innsigla hvíldar örbrunnsplötur Forðist beint sólarljós meðan á ræktun stendur.Mælt er með því að hylja míkrótíterplöturnar.

12.7 Ábendingar um að hvarfefnin fari illa:

Yfirgefa ætti undirlagslausn ef hún fær lit.

Hvarfefnin geta orðið slæm ef gleypnigildi (450/630nm) núllstaðalsins er minna en 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Litunarhvarfið þarf 15 mínútur eftir að lausn A og lausn B hefur verið bætt við. Og þú getur lengt ræktunartímann frá 20 mínútum upp í meira ef liturinn er of ljós til að hægt sé að ákvarða.Aldrei fara yfir 25 mín, Þvert á móti, stytta ræktunartímann rétt.

12.9 Ákjósanlegur hvarfhiti er 25 ℃.Hærra eða lægra hitastig mun leiða til breytinga á næmi og gleypnigildum.

13. Geymsla

Geymsluástand: 2-8 ℃.

Geymslutími: 12 mánuðir.