արտադրանք

1. Նախապատմություն

Տիլոզինմակրոլիդային հակաբիոտիկ է, որը հիմնականում կիրառվում է որպես հակաբակտերիալ և հակամիկոպլազմա:Սահմանվել են խիստ MRL-ներ, քանի որ այս դեղամիջոցը կարող է հանգեցնել լուրջ կողմնակի ազդեցությունների որոշակի խմբերում:

Այս հավաքածուն ELISA տեխնոլոգիայի վրա հիմնված նոր արտադրանք է, որն արագ, հեշտ, ճշգրիտ և զգայուն է սովորական գործիքային վերլուծության համեմատ և մեկ գործողության ընթացքում պահանջում է ընդամենը 1,5 ժամ, այն կարող է զգալիորեն նվազագույնի հասցնել շահագործման սխալը և աշխատանքի ինտենսիվությունը:

2. Փորձարկման սկզբունք

Այս փաթեթը հիմնված է անուղղակի մրցակցային ELISA տեխնոլոգիայի վրա:Միկրոտիտրային հորերը պատված են միացնող անտիգենով:Նմուշում տիլոզինի մնացորդը մրցում է հակամարմինների համար միկրոտիտրային ափսեի վրա պատված հակագենի հետ:Ֆերմենտով պիտակավորված հակամարմինների ավելացումից հետո TMB սուբստրատն օգտագործվում է գույնը ցույց տալու համար:Նմուշի կլանումը բացասաբար է կապված դրա մեջ թիլոզինի հետ, ստանդարտ կորի հետ համեմատելուց հետո, բազմապատկած նոսրացման գործակցով, կարելի է հաշվարկել թիլոզինի մնացորդի քանակը նմուշում:

3. Դիմումներ

Այս հավաքածուն կարող է օգտագործվել կենդանական հյուսվածքի (հավ, խոզի միս, բադ) և կաթի, մեղրի, ձվի և այլնի թիլոզինի մնացորդի քանակական և որակական վերլուծության համար:

4. Խաչաձեւ ռեակցիաներ

Թիլոսին…………………………………………………..100%

Տիլմիկոզին……………………………………………<2%

5. Պահանջվող նյութեր

5.1 Սարքավորումներ.

----Միկրոտիտրային թիթեղային սպեկտրոֆոտոմետր (450նմ/630նմ)

---- Պտտվող գոլորշիացնող կամ ազոտի չորացման գործիքներ

----համասեռացնող

----Թափահարող

----Ցենտրիֆուգ

----Անալիտիկ հաշվեկշիռ (ինդուկտիվություն՝ 0,01գ)

----Գրաֆիկացված պիպետտ՝ 10մլ

----Ռետինե խողովակի լամպ

----Ծավալային կոլբա՝ 10մլ

----Պոլիստիրոլային ցենտրիֆուգային խողովակներ՝ 50մլ

----Միկրոպիպետներ՝ 20-200մլ, 100-1000մլ

250 մլ-մուլտիպիպետ

5.2 Ռեակտիվներ.

----Նատրիումի հիդրօքսիդ (NaOH, AR)

----Նատրիումի բիկարբոնատ (NaHCO_3,AR)

---- Նատրիումի կարբոնատ (NaCO₃, AR)

----Տրիքլորաքացախաթթու (AR)

---- ացետոնիտրիլ (AR)

----Էթիլացետատ (AR)

┅┅n-հեքսան (AR)

----Դիոնացված ջուր

6. Կոմպոնենտներ

լ Microtiter ափսե 96 հորերով պատված հակագենով

լ Ստանդարտ լուծույթներ (5 շիշ, 1 մլ/շիշ)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

լ Ստանդարտ հսկողություն (1 մլ/շիշ)1 ppm

l Ֆերմենտային կոնյուգատ 1մլ…………………………կարմիր գլխարկ

l Հակամարմինների լուծույթ 7 մլ…………………………կանաչ գլխարկ

l Լուծում A 7 մլ………………………………սպիտակ գլխարկ

l Լուծում B 7 մլ…………………………………..կարմիր գլխարկ

l Ստոպ լուծույթ 7 մլ………………………….դեղին գլխարկ

լ 20×խտացված լվացքի լուծույթ 40մլ

……………………………………………թափանցիկ գլխարկ

լ 4×խտացված արդյունահանման լուծույթ 50մլ

………………………………………………….կապույտ գլխարկ

7. Ռեակտիվների պատրաստում.

Լուծում 1:0,1 մոլ/լ NaOH լուծույթ

Կշռեք 0,4 գ NaOH 100 մլ դեիոնացված ջրին և ամբողջությամբ խառնեք:

Լուծում 21 մոլ/լ NaOH լուծույթ

Կշռեք 4 գ NaOH 100 մլ դեոնացված ջրին և ամբողջությամբ խառնեք:

Լուծում 3Կարբոնատային բուֆերային աղ

Լուծում1: 0.2 M PB

Լուծել 51,6 գ Na₂HPO₄· 12 ժ₂O, 8,7 գ NaH₂PO₄· 2Հ₂O deionized ջրով և նոսրացնել մինչև 1000ml:

Լուծում2. արդյունահանման լուծույթ

2×խտացված արդյունահանման լուծույթը նոսրացրեք դեիոնացված ջրով 1:1 ծավալային հարաբերակցությամբ (օր. 10մլ 2×արդյունահանման լուծույթ + 10մլ դեիոնացված ջուր), որը կօգտագործվի նմուշի արդյունահանման համար,Այս լուծույթը կարելի է պահել 4℃ ջերմաստիճանում 1 ամիս.

Լուծում3. Լվացքի լուծույթ

20×խտացված լվացքի լուծույթը նոսրացրեք դեիոնացված ջրով 1:19 ծավալային հարաբերակցությամբ (օրինակ՝ 5մլ 20×լվացքի լուծույթ + 95մլ դեիոնացված ջուր), որը կօգտագործվի ափսեները լվանալու համար։Այս լուծույթը կարելի է պահել 4℃ ջերմաստիճանում 1 ամիս.

8. Նմուշի պատրաստուկներ

8.1 Ծանուցում և նախազգուշական միջոցներ նախքան շահագործումը.

(ա) Խնդրում ենք օգտագործել միանվագ խորհուրդներ փորձի գործընթացում և փոխել ծայրերը, երբ կլանում են տարբեր ռեակտիվներ:

բ) Համոզվեք, որ բոլոր գործիքները մաքուր են:

գ) Հյուսվածքի նմուշը պահել սառեցված վիճակում:

դ) Պատրաստված նմուշը պետք է միանգամից օգտագործվի վերլուծության համար:

8.2 Կենդանական հյուսվածքներ (հավ, խոզի միս և այլն)

----Նմուշը համասեռացնել միատարրացուցիչով;

---- Վերցրեք 2,0±0,05 գ համասեռ նյութը 50 մլ պոլիստիրոլի ցենտրիֆուգային խողովակի մեջ;ավելացնել 2 մլ 0,2 մ PB (լուծում1) թափահարեք, որպեսզի լուծվի, այնուհետև ավելացրեք 8 մլ էթիլացետատ և ուժեղ թափահարեք 3 րոպե;

----Ցենտրիֆուգ՝ տարանջատման համար՝ 3000գ / շրջակա միջավայրի ջերմաստիճան / 5ր.

---- 4 մլ գերնույն օրգանական փուլը տեղափոխել 10 մլ ապակե խողովակի մեջ, չորացնել 50-60℃ ջրային բաղնիքով ազոտի գազի հոսքի տակ;

---- Չոր մնացորդը լուծիր 1մլ n-հեքսանով, պտտեցրո՛ւ 30 վրկ, որ լուծվի, իսկ հետո ավելացրո՛ւ 1մլ արդյունահանման լուծույթ (լուծում2), հորձանուտ 1 րոպե:ցենտրիֆուգ՝ տարանջատման համար՝ 3000գ / շրջակա միջավայրի ջերմաստիճան / 5ր

----Հեռացնել գերնույն n-հեքսան փուլը;Վերցրեք 50 մկլ ենթաշերտի ջրային փուլը վերլուծության համար:

Նոսրացման գործակիցը՝ 1

8.2 Կաթ

---- Վերցրեք 100 մկլ հում կաթի նմուշ, խառնեք 900 մկլ արդյունահանման լուծույթի հետ (լուծում2) և ամբողջությամբ խառնել։

---- Վերցրեք 50 մկլ պատրաստված լուծույթից փորձաքննության համար:

Նոսրացման գործակիցը` 10

9. Վերլուծության գործընթացը

9.1 Ծանուցում նախքան վերլուծությունը

9.1.1Համոզվեք, որ բոլոր ռեակտիվները և միկրոհորերը գտնվում են սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃):

9.1.2Մնացած բոլոր ռեակտիվները վերադարձրեք 2-8℃օգտագործելուց անմիջապես հետո:

9.1.3Միկրոհորների ճիշտ լվացումը կարևոր քայլ է վերլուծության գործընթացում.դա ELISA վերլուծության վերարտադրելիության կենսական գործոնն է:

9.1.4 Աանջատել լույսը և ծածկել միկրոհորերը ինկուբացիայի ընթացքում:

9.2 Վերլուծության քայլեր

9.2.1 Բոլոր ռեակտիվները դուրս հանեք սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃) 30 րոպեից ավելի, օգտագործելուց առաջ նրբորեն թափահարեք:

9.2.2 Դուրս հանեք անհրաժեշտ միկրոհորերը և անմիջապես վերադարձրեք մնացածը 2-8℃ ջերմաստիճանի տակ գտնվող կայծակաճարմանդ տոպրակի մեջ:

9.2.3 Լվացքի նոսրացված լուծույթը օգտագործելուց առաջ պետք է նորից տաքացվի, որպեսզի այն լինի սենյակային ջերմաստիճանում:

9.2.4Թիվ:Յուրաքանչյուր միկրոհորի համարակալված դիրքերը և բոլոր ստանդարտներն ու նմուշները պետք է գործարկվեն կրկնօրինակով:Գրանցեք ստանդարտների և նմուշների դիրքերը:

9.2.5Add ստանդարտ լուծույթ/նմուշ և հակամարմինների լուծույթԱվելացնել 50 մկլ ստանդարտ լուծույթ ((տրամադրված հավաքածու)) կամ պատրաստված նմուշը համապատասխան հորեր:Ավելացնել 50 մկլ հակամարմինների լուծույթ (տրամադրված հավաքածու)Մեղմորեն խառնել՝ ձեռքով թափահարելով ափսեը և 30 րոպե 37°C ջերմաստիճանում ինկուբացնել ծածկով:

9.2.6ԼվանալՀեռացրեք ծածկը նրբորեն և մաքրեք հեղուկը հորերից և ողողեք միկրոհորերը 250 մկլ նոսրացված լվացքի լուծույթով (լուծում3) 10 վրկ ընդմիջումով 4-5 անգամ:Կլանեք մնացորդային ջուրը ներծծող թղթով (մնացած օդի պղպջակը կարելի է հեռացնել չօգտագործված ծայրով):

9.2.7Ավելացնել ֆերմենտային կոնյուգատԱվելացնել 100 մլ ֆերմենտային կոնյուգատի լուծույթ (տրամադրված հավաքածու) յուրաքանչյուր հորի մեջ, նրբորեն խառնել և 30 րոպե 37 ℃ ինկուբացնել ծածկով:Կրկին կրկնեք լվացքի քայլը.

9.2.8ԳունավորումԱվելացնել 50 մկլ լուծույթ A (տրամադրված հավաքածու) և 50 մկլ լուծույթ B (տրամադրված հավաքածու) յուրաքանչյուր ջրհորի:Նրբորեն խառնել և 15 րոպե 37 աստիճան ջերմաստիճանում ինկուբացնել ծածկով:

9.2.9ՉափելԱվելացնել 50 մկլ կանգառի լուծույթ (տրամադրված հավաքածու) յուրաքանչյուր ջրհորի:Նրբորեն խառնեք և չափեք ներծծումը 450 նմ-ում (Առաջարկվում է չափել 450/630 նմ երկակի ալիքի երկարությամբ: Կարդացեք արդյունքը կանգառի լուծույթ ավելացնելուց հետո 5 րոպեի ընթացքում):

10. Արդյունքներ

10.1 Տոկոսային կլանումը

Ստանդարտների և նմուշների համար ստացված ներծծման արժեքների միջին արժեքները բաժանվում են առաջին ստանդարտի կլանման արժեքի վրա (զրոյական ստանդարտ ) և բազմապատկվում 100%-ով:Այսպիսով, զրոյական ստանդարտը հավասար է 100%-ի, իսկ կլանման արժեքները բերվում են տոկոսներով:

B

Կլանումը (%) = —— ×100%

B0

B —— կլանման ստանդարտ (կամ նմուշ)

B0 —— կլանման զրոյական ստանդարտ

10.2 Ստանդարտ կոր

----Ստանդարտ կորը գծելու համար. Ստանդարտների կլանման արժեքը վերցրեք որպես y առանցք, թիլոզինի ստանդարտ լուծույթի (ppb) կոնցենտրացիայի կիսալոգարիթմական որպես x առանցք:

----Յուրաքանչյուր նմուշի թիլոզինի կոնցենտրացիան (ppb), որը կարելի է կարդալ տրամաչափման կորից, բազմապատկվում է յուրաքանչյուր հաջորդ նմուշի համապատասխան նոսրացման գործակցով, և ստացվում է նմուշի իրական կոնցենտրացիան:

Խնդրում ենք նկատի ունենալ.

Տվյալների վերլուծության համար մշակվել է հատուկ ծրագրակազմ, որը կարող է տրամադրվել ըստ պահանջի:

11. Զգայունություն, ճշգրտություն և ճշգրտություն

Թեստի զգայունություն.1,5 ppb

Հայտնաբերման սահմանաչափ.

Կենդանական հյուսվածք…………………………………………1.5 ppb Կաթ……………………………………………………..15 ppb Ճշգրտություն:

Կենդանական հյուսվածք…………………………………………80±15%

Կաթ……………………………………………………80±10%

Ճշգրտություն:

ELISA հավաքածուի տատանումների գործակիցը 10%-ից պակաս է:

12. Ծանուցում

12.1 Ստանդարտների և նմուշների համար ստացված կլանման արժեքների միջին արժեքները կնվազեն, եթե ռեակտիվները և նմուշները չեն կարգավորվել սենյակային ջերմաստիճանում (20-25℃):

12.2 Թույլ մի տվեք, որ միկրոհորերը չորանան քայլերի միջև, որպեսզի խուսափեք անհաջող վերարտադրողականությունից և գործարկեք հաջորդ քայլը միկրոհորերի ամրացմանը հպելուց անմիջապես հետո:

12.3 Օգտագործելուց առաջ յուրաքանչյուր ռեագենտ նրբորեն թափահարեք:

12.4 Ձեր մաշկը հեռու պահեք կանգառի լուծույթից, քանի որ այն 0,5 ՄՀ է₂SO₄լուծում.

12.5 Մի օգտագործեք հնացած փաթեթները:Մի փոխեք տարբեր խմբաքանակների ռեագենտները, հակառակ դեպքում դա կնվազեցնի զգայունությունը:

12.6 Պահպանեք ELISA փաթեթները 2-8℃ ջերմաստիճանում, մի սառչեք:Կնքեք մնացած միկրոհորերի թիթեղները, Խուսափեք արևի ուղիղ ճառագայթներից բոլոր ինկուբացիաների ընթացքում:Խորհուրդ է տրվում ծածկել միկրոտիտրային թիթեղները:

12.7 Ենթաշերտի լուծույթը պետք է հրաժարվել, եթե այն գունավորվում է:Ռեակտիվները կարող են վատանալ, եթե զրոյական ստանդարտի կլանման արժեքը (450/630 նմ) ​​0,5-ից փոքր է (A450nm<0,5):

12.8 Գունավորման ռեակցիայի համար անհրաժեշտ է 15 րոպե A և B լուծույթի ավելացումից հետո: Եվ դուք կարող եք երկարացնել ինկուբացիոն ժամանակի միջակայքերը մինչև 20 րոպե կամ ավելի, եթե գույնը չափազանց բաց է որոշելու համար:Երբեք մի գերազանցեք 30 րոպեն, ընդհակառակը, պատշաճ կերպով կրճատեք ինկուբացիոն ժամանակը:

12.9 Ռեակցիայի օպտիմալ ջերմաստիճանը 37℃ է:Ավելի բարձր կամ ցածր ջերմաստիճանը կհանգեցնի զգայունության և կլանման արժեքների փոփոխության:

13. Պահպանում

Պահպանման վիճակ՝ 2-8℃։

Պահպանման ժամկետը՝ 12 ամիս.