उत्पाद

परीक्षण सिद्धांत

यह किट अप्रत्यक्ष-प्रतिस्पर्धी एलिसा तकनीक पर आधारित है।माइक्रोटिटर कुओं को कपलिंग एंटीजन के साथ लेपित किया जाता है।Flumequineनमूने में अवशेष एंटीबॉडी के लिए माइक्रोटिटर प्लेट पर लेपित एंटीजन के साथ प्रतिस्पर्धा करता है।एंटी-एंटीबॉडी लेबल वाले एंजाइम को जोड़ने के बाद, रंग दिखाने के लिए टीएमबी सब्सट्रेट का उपयोग किया जाता है।नमूने का अवशोषण ऋणात्मक रूप से इसमें रहने वाले टेट्रासाइक्लिन से संबंधित है, मानक वक्र के साथ तुलना करने के बाद, कमजोर पड़ने वाले गुणक से गुणा करके, नमूने में फ़्लुमेक्विन अवशेषों की मात्रा की गणना की जा सकती है।

अनुप्रयोग

इस किट का उपयोग शहद में फ्लुमेक्विन अवशेष के मात्रात्मक और गुणात्मक विश्लेषण में किया जा सकता है।

पार प्रतिक्रियाओं

Flumequine ………………………………………… 100%

सामग्री की आवश्यकता

उपकरणों

┅┅माइक्रोटिटर प्लेट स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (450nm/630nm)

┅┅होमोजेनाइज़र या स्टमक

┅┅ शेखर

┅┅ भंवर मिक्सर

┅┅ अपकेंद्रित्र

┅┅विश्लेषणात्मक संतुलन (अधिष्ठापन: 0.01g)

┅┅ग्रेजुएट पिपेट: 15ml

┅┅रबर पिपेट बल्ब

┅┅पॉलीस्टीरीन सेंट्रीफ्यूज ट्यूब: 15 मिली, 50 मिली

┅┅ग्लास टेस्ट ट्यूब: 10 मि.ली

┅┅माइक्रोपाइपेट्स: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250 मिली -मल्टीपिपेट

अभिकर्मकों

┅┅एन-हेक्सेन (एआर)

┅┅ मेथिलीन क्लोराइड (AR)

┅┅ एसीटोनिट्रिल (एआर)

┅┅विआयनीकृत पानी

----- केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एआर)

किट घटक

● प्रतिजन के साथ लेपित 96 कुओं के साथ माइक्रोटिटर प्लेट

● मानक समाधान (6 बोतलें × 1 मिली/बोतल)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● उच्च सांद्रता मानक नियंत्रण:(1ml/बोतल)

………………………………………………………100 पीपीबी

● एंजाइम संयुग्म 12ml……………………………… लाल टोपी

● एंटीबॉडी समाधान 7ml …………..……………..ग्रीन कैप

● घोल A 7ml ………………………………….. सफेद टोपी

● समाधान बी 7ml …………………………………………………… लाल टोपी

● स्टॉप सॉल्यूशन 7ml ………………………………पीला कैप

● 20Xकेंद्रित धुलाई समाधान 40 मि.ली

…………………………………………………… पारदर्शी टोपी

●2X निष्कर्षण समाधान 50 मिलीलीटर ……………… नीली टोपी

अभिकर्मकों की तैयारी

7.1 शहद का नमूना

समाधान 1: 0.2 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान

वजन 41.5 मिलीलीटर केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड, विआयनीकृत पानी के साथ 500 मिलीलीटर पतला करें।

समाधान 2: घोल को धो लें

1:19 के आयतन अनुपात में विआयनीकृत पानी के साथ केंद्रित धोने के घोल को पतला करें, जिसका उपयोग प्लेटों को धोने के लिए किया जाएगा।पतला समाधान 1 महीने के लिए 4 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।

समाधान3: निष्कर्षण समाधान

1:1 (या आवश्यकता पर निर्भर) के मात्रा अनुपात में विआयनीकृत पानी के साथ 2 × केंद्रित निष्कर्षण समाधान को पतला करें, जिसका उपयोग नमूना निष्कर्षण के लिए किया जाएगा।यह पतला घोल 1 महीने के लिए 4 ℃ पर संरक्षित किया जा सकता है।

नमूना तैयारी

8.1 ऑपरेशन से पहले उपयोगकर्ताओं के लिए सूचना और सावधानियां

(ए) कृपया प्रयोग की प्रक्रिया में एक-बंद युक्तियों का उपयोग करें, और विभिन्न अभिकर्मकों को अवशोषित करते समय युक्तियों को बदलें।

(बी) सुनिश्चित करें कि सभी प्रयोगात्मक उपकरण साफ हैं, अन्यथा यह परख परिणाम को प्रभावित करेगा।

8.2शहद का नमूना

----- 50 मिलीलीटर पॉलीस्टीरिन सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 2 जी ± 0.05 ग्राम शहद का नमूना वजन करें,

----- 2 मिलीलीटर 0.2 एम हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान (समाधान 1) जोड़ें, इसे पूरी तरह से मिश्रण करने के लिए भंवर, फिर 8 मिलीलीटर मेथिलीन क्लोराइड जोड़ें, पूरी तरह से भंग करने के लिए 5 मिनट के लिए शेकर के साथ हिलाएं;

----- 10 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र, कमरे के तापमान पर कम से कम 3000 ग्राम (20-25 ℃);

----- सतह पर तैरनेवाला चरण निकालें, सब्सट्रेट कार्बनिक समाधान के 2 मिलीलीटर को 10 मिलीलीटर ग्लास ट्यूब में लें। नाइट्रोजन प्रवाह के पानी के स्नान के तहत सब्सट्रेट को सुखाएं (50-60 ℃)

----- 30 के लिए 1 मिलीलीटर एन-हेक्सेन, भंवर जोड़ें, फिर 1 मिलीलीटर निष्कर्षण समाधान (समाधान 3) जोड़ें, फिर से 1 मिनट के लिए भंवर।5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र, कमरे के तापमान पर कम से कम 3000 ग्राम (20-25 ℃);

----- सतह पर तैरनेवाला चरण निकालें, परख के लिए 50 मिलीलीटर लें;

9. परख प्रक्रिया

9.1 परख से पहले नोटिस

9.1.1 सुनिश्चित करें कि सभी अभिकर्मक और माइक्रोवेल कमरे के तापमान (20-25 ℃) पर हैं।

9.1.2 उपयोग के तुरंत बाद बाकी सभी अभिकर्मकों को 2-8 ℃ पर लौटा दें।

9.1.3 microwells को सही ढंग से धोना परख की प्रक्रिया में एक महत्वपूर्ण कदम है;यह एलिसा विश्लेषण की पुनरावृत्ति के लिए महत्वपूर्ण कारक है।

9.1.4 प्रकाश से बचें और ऊष्मायन के दौरान माइक्रोवेल्स को कवर करें ।

9.2 परख कदम

9.2.1 30 मिनट से अधिक के लिए सभी अभिकर्मकों को कमरे के तापमान (20-25 ℃) पर बाहर निकालें, उपयोग से पहले समरूप करें।

9.2.2 आवश्यक माइक्रोवेल्स को बाहर निकालें और बाकी को जिप-लॉक बैग में 2-8 ℃ पर तुरंत वापस कर दें।

9.2.3 पतला धोने के घोल को उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान पर फिर से गर्म करना चाहिए।

9.2.4संख्या:नंबर हर microwell स्थिति और सभी मानकों और नमूने दो प्रतियों में चलाया जाना चाहिए।मानकों और नमूनों की स्थिति को रिकॉर्ड करें।

9.2.5मानक समाधान/नमूना जोड़ें:इसी कुओं में मानक समाधान या तैयार नमूने के 50 μl जोड़ें।50μl एंटीबॉडी समाधान जोड़ें।प्लेट को मैन्युअल रूप से हिलाकर धीरे से मिलाएं और कवर के साथ 25 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।

9.2.6धोना:कवर को धीरे से हटाएं और कुओं से तरल को शुद्ध करें और माइक्रोवेल्स को 250μl पतला धोने के घोल (समाधान 2) के साथ 10s के अंतराल पर 4-5 बार कुल्ला करें।शोषक कागज के साथ अवशिष्ट पानी को अवशोषित करें (बाकी हवा के बुलबुले को अप्रयुक्त टिप के साथ समाप्त किया जा सकता है)।

9.2.8।एंजाइम संयुग्म:प्रत्येक कुएं में एंजाइम संयुग्म घोल 100 मि.ली. मिलाएं, प्लेट को मैन्युअल रूप से हिलाकर धीरे से मिलाएं और कवर के साथ 25 ℃ पर 30 मिनट के लिए सेते रहें।वॉश स्टेप को फिर से दोहराएं।

9.2.8रंगाई:प्रत्येक कुएं में 50μl समाधान A और 50μl समाधान B जोड़ें।प्लेट को मैन्युअल रूप से हिलाकर धीरे से मिलाएं और कवर के साथ 25 ℃ पर 15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें (12.8 देखें)।

9.2.9मापना:प्रत्येक कुएं में 50μl स्टॉप सॉल्यूशन डालें।प्लेट को मैन्युअल रूप से हिलाकर धीरे से मिलाएं और एक एयर ब्लैंक के खिलाफ 450 एनएम पर अवशोषण को मापें (यह 450/630 एनएम की दोहरी-तरंग दैर्ध्य के साथ सुझाया गया उपाय है। स्टॉप सॉल्यूशन के अतिरिक्त 5 मिनट के भीतर परिणाम पढ़ें।) (हम दृष्टि से भी माप सकते हैं एलियासा उपकरण के बिना स्टॉप सॉल्यूशन के बिना)

परिणाम

10.1 प्रतिशत अवशोषण

मानकों और नमूनों के लिए प्राप्त अवशोषक मूल्यों के औसत मूल्यों को पहले मानक (शून्य मानक) के अवशोषण मूल्य से विभाजित किया जाता है और 100% से गुणा किया जाता है।शून्य मानक इस प्रकार 100% के बराबर बना दिया जाता है और अवशोषण मान प्रतिशत में उद्धृत किए जाते हैं।

अवशोषण (%) = बी/बी0 × 100%

बी --- अवशोषक मानक (या नमूना)

B0 ——अवशोषण शून्य मानक

10.2 मानक वक्र

एक मानक वक्र बनाने के लिए: मानकों के अवशोषण मान को y-अक्ष के रूप में लें, फ़्लूमेक्विन मानक समाधान (ppb) की सांद्रता के अर्ध लघुगणक को x-अक्ष के रूप में लें।

--- दFlumequinप्रत्येक नमूने की एकाग्रता (पीपीबी), जिसे अंशांकन वक्र से पढ़ा जा सकता है, प्रत्येक नमूने के संबंधित कमजोर पड़ने वाले गुणक से गुणा किया जाता है, और नमूने की वास्तविक एकाग्रता प्राप्त की जाती है।

एलिसा किट के डेटा में कमी के लिए विशेष सॉफ्टवेयर विकसित किया गया है, जो अनुरोध पर प्रदान किया जा सकता है।

11. संवेदनशीलता, सटीकता और सटीकता

परीक्षण संवेदनशीलता:0.3ppb

शहद नमूना कमजोर पड़ने का कारक: 2

पहचान सीमा

शहद का नमूना ------------------------------------------------ -1ppb

शुद्धता

शहद का नमूना ------------------------------------------------------------ 90±20 %

शुद्धता

एलिसा किट का भिन्नता गुणांक 10% से कम है।

12. सूचना

12.1 यदि अभिकर्मकों और नमूनों को कमरे के तापमान (20-25 ℃) तक विनियमित नहीं किया गया है, तो मानकों और नमूनों के लिए प्राप्त अवशोषण मूल्यों का माध्य मान कम हो जाएगा।

12.2 असफल दोहराव से बचने के लिए चरणों के बीच माइक्रोवेल्स को सूखने न दें और माइक्रोवेल्स होल्डर को टैप करने के तुरंत बाद अगले चरण को संचालित करें।

12.3।उपयोग करने से पहले प्रत्येक अभिकर्मक को समरूप करें।

12.4।अपनी त्वचा को स्टॉप सॉल्यूशन से दूर रखें क्योंकि यह 2M H है₂SO₄उपाय।

12.5 पुरानी किट का उपयोग न करें।विभिन्न बैचों के अभिकर्मकों का आदान-प्रदान न करें, क्योंकि इससे संवेदनशीलता कम हो जाएगी।

12.6 भंडारण की स्थिति:

एलिसा किट को 2-8 डिग्री सेल्सियस पर रखें, फ्रीज न करें।सील रेस्ट माइक्रोवेल प्लेट्स सभी इन्क्यूबेशन के दौरान सीधे धूप से बचें।माइक्रोटिटर प्लेट्स को कवर करने की सिफारिश की जाती है।

12.7 अभिकर्मकों के खराब होने के संकेत:

यदि सब्सट्रेट का रंग बदल जाता है तो सब्सट्रेट समाधान को छोड़ देना चाहिए।

यदि शून्य मानक का अवशोषण मान (450/630nm) 0.5 (A450nm <0.5) से कम है तो अभिकर्मक खराब हो सकते हैं।

12.8 समाधान ए और समाधान बी जोड़ने के बाद रंगाई प्रतिक्रिया को 15 मिनट की आवश्यकता होती है और यदि रंग निर्धारित करने के लिए बहुत हल्का है तो आप ऊष्मायन समय को 20 मिनट से अधिक तक बढ़ा सकते हैं।कभी भी 25 मिनट से अधिक न हो, इसके विपरीत, ऊष्मायन समय को ठीक से छोटा करें।

12.9 इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 25 ℃ है।उच्च या निम्न तापमान से संवेदनशीलता और अवशोषण मूल्यों में परिवर्तन होगा।

13. भंडारण

भंडारण की स्थिति: 2-8 ℃।

भंडारण अवधि: 12 महीने।