huahana

1. Kahua

Tylosinhe antibiotic macrolide, i hoʻohana nui ʻia e like me antibacterial a me anti-mycoplasma.Ua hoʻokumu ʻia nā MRL koʻikoʻi mai kēia lāʻau lapaʻau e alakaʻi i ka hopena koʻikoʻi i kekahi mau hui.

He huahana hou kēia kit e pili ana i ka ʻenehana ELISA, ʻo ia ka wikiwiki, maʻalahi, pololei a maʻalahi hoʻi i ka hoʻohālikelike ʻia me ka loiloi instrumental maʻamau a pono wale nā ​​hola 1.5 i hoʻokahi hana, hiki iā ia ke hōʻemi nui i ka hewa o ka hana a me ka ikaika o ka hana.

2. Kumu Hoao

Hoʻokumu ʻia kēia pahu i ka ʻenehana ELISA hoʻokūkū kūʻokoʻa.Hoʻopili ʻia nā pūnāwai microtiter me nā antigen hoʻohui.ʻO ke koena Tylosin i loko o ka hāpana hoʻokūkū me ka antigen i uhi ʻia ma ka pā microtiter no ka antibody.Ma hope o ka hoʻohui ʻana o ka enzyme i kapa ʻia he anti-antibody, hoʻohana ʻia ka substrate TMB e hōʻike i ke kala.Absorbance o ka hāpana pili maikaʻi i ka tylosin noho i loko, ma hope o ka hoohalike ana me ka Standard Curve, hoonuiia e ka dilution mea, tylosin koena nui i loko o ka hāpana hiki ke helu.

3. Nā noi

Hiki ke hoʻohana ʻia kēia kit i ka quantitative a qualitative analysis o ke koena tylosin i loko o ka ʻiʻo holoholona (ka moa, ka puaʻa, ka ʻiʻo) a me ka waiū, meli, hua manu, etc.

4. Nā hana keʻa

Tylosin……………………………………………………..100%

Tilmicosin………………………………………………<2%

5. Pono nā lako

5.1 Mea lako:

----Microtiter plate spectrophotometer (450nm/630nm)

---- Rotary evaporator a i ʻole nā ​​mea hana hoʻomaloʻo nitrogen

----homogenizer

----Hololu

----Centrifuge

----Ke kaulike analytical (inductance: 0.01g)

----Pikipika puka puka: 10ml

----Upu paipu Rubber

----Paniani nui: 10ml

----Polystyrene centrifuge paipu: 50ml

----Micropipettes: 20-200ml, 100-1000ml

250ml-multipipette

5.2 Nā mea hoʻopili:

----Sodium hydroxide (NaOH, AR)

----Sodium bicarbonate (NaHCO_3,AR)

---- ʻO ka sodium carbonate (NaCO₃, AR)

----Trichloroacetic acid (AR)

---- Acetonitrile (AR)

----Ethyl acetate (AR)

┅┅n-Hexane (AR)

----Wai deionized

6. Nā ʻāpana Kit

l ka pā Microtiter me nā pūnāwai 96 i uhi ʻia me ka antigen

l Nā hāʻina maʻamau (5 ʻōmole, 1ml / ʻōmole)

0ppb, 0.5ppb, 1.5ppb, 4.5ppb, 13.5ppb

l Ka mana maʻamau o Spiking: (1ml/'ōmole)1ppm

l Hoʻohui ʻia ka Enzyme 1ml…………………..….palena ʻulaʻula

l Hoʻonā antibody 7ml………………………………

l Hoʻonā A 7ml…………………………………..pale keʻokeʻo

l Hoʻonā B 7ml...……………………………..pale ʻulaʻula

l Hoʻokuʻu i ka hoʻonā 7ml.………………………………….pale melemele

l 20× hoʻonā holoi holoi 40ml

…………………………………..…palena alohilohi

l 4×ka hoʻoheheʻe ʻana i ka hopena 50ml

…………………………………………….pale uliuli

7. Hoʻomākaukau Reagents:

Pane 1:0.1mol/L NaOH solution

Kauona 0.4g NaOH i 100ml wai deionized a hui pono.

Haʻina 2: 1mol/L NaOH solution

E kaupaona i 4g NaOH i 100ml wai deionized a hui pono.

Haʻina 3: ka paʻakai pale kalapona

Hoʻoholo1: 0.2M PB

E hoopau i 51.6g o Na₂HPO₄· 12H₂O, 8.7g o NaH₂PO₄·2H₂O me ka wai deionized a dilute i 1000ml.

Hoʻoholo2: Hoʻonā hoʻoneʻe

E hoʻoheheʻe i ka 2×concentrated extraction solution me ka wai deionized ma ka ratio leo o 1:1(e laʻa me 10ml o 2×extraction solution + 10ml o ka wai deionized), e hoʻohana ʻia no ka unuhi ʻana i nā laʻana,Hiki ke mālama ʻia kēia hopena ma 4 ℃ no 1 mahina.

Hoʻoholo3: Holoi holoi

E hoʻoheheʻe i ka wai holoi holoi 20x concentrated me ka wai deionized ma ka ratio volume o 1:19(e laʻa me 5ml o 20×holoi wai + 95ml o ka wai deionized), e hoʻohana ʻia no ka holoi ʻana i nā pā.Hiki ke mālama ʻia kēia hopena ma 4 ℃ no 1 mahina.

8. Hoʻomākaukau Laʻana

8.1 Hoʻolaha a me ka mālama ʻana ma mua o ka hana ʻana:

(a) E ʻoluʻolu e hoʻohana i nā ʻōlelo aʻoaʻo hoʻokahi i ke kaʻina hana o ka hoʻokolohua, a hoʻololi i nā ʻōlelo aʻoaʻo i ka wā e komo ai i nā reagent like ʻole.

(b) E hōʻoia i ka maʻemaʻe o nā mea kani a pau.

(c) E mālama i ka laʻana o ka ʻiʻo i loko o ka pahu hau.

(d) Pono e hoʻohana ʻia ka laʻana i hoʻomākaukau ʻia no ka hoʻāʻo ʻana i ka manawa hoʻokahi.

8.2 Mea holoholona (moa, puaʻa, etc.)

---- Homogenize i ka hāpana me ka homogenizer;

----E lawe i ka 2.0±0.05g o ka homogenate i loko o ka 50ml polystyrene centrifuge tube;hoʻohui i 2ml o 0.2M PB (hoʻonā1), lulu e hoʻoheheʻe, a laila hoʻohui i 8ml o ka ethyl acetate a lulu ikaika no 3min;

----Centrifuge no ka hoʻokaʻawale: 3000g / ambient wela / 5min.

---- E hoʻoneʻe i 4ml o ka supernatant organic phase i loko o ka ipu aniani 10ml, maloʻo me 50-60 ℃ ʻauʻau wai ma lalo o ke kahawai kinoea nitrogen;

----E hoʻoheheʻe i ke koena maloʻo me ka 1ml o ka n-hexane, vortex no 30s e hoʻoheheʻe, a laila e hoʻohui i 1ml o ka hopena hoʻoneʻe (hoʻonā2), vortex no 1 min.centrifuge no ka hoʻokaʻawale: 3000g / ambient wela / 5min

----Wehe i ka mana n-hexane supernatant;e lawe i 50μl o ka substrate aqueous phase no ka ho'āʻo.

Mea hoʻoheheʻe: 1

8.2 Waiu

---- E lawe i 100μl o ka waiu waiu maka, hui me 900μl o ka hoʻonā ʻana (hoʻonā2), a hui pono.

----E lawe i 50μl o ka hopena i hoʻomākaukau ʻia no ka hoʻāʻo.

Mea hoʻoheheʻe: 10

9. Kaʻina hoʻokolohua

9.1 Hoʻolaha ma mua o ka hoʻāʻo ʻana

9.1.1E hōʻoia i nā reagents a me nā microwell a pau ma ka lumi wela (20-25 ℃).

9.1.2E hoʻihoʻi i nā mea hou i koe i ka 2-8℃ma hope koke iho o ka hoʻohana ʻana.

9.1.3ʻO ka holoi pono ʻana i nā microwells kahi hana koʻikoʻi i ke kaʻina hana hoʻāʻo;ʻo ia ka mea koʻikoʻi i ka reproducibility o ka ELISA analysis.

9.1.4 Awehe i ke kukui a uhi i nā microwells i ka wā e hoʻoulu ai.

9.2 Nā ʻanuʻu hōʻike

9.2.1 Wehe i nā mea hoʻoponopono a pau ma ka lumi wela (20-25 ℃) no 30 mau minuke, lulu mālie ma mua o ka hoʻohana ʻana.

9.2.2 E kiʻi i nā microwells pono a hoʻihoʻi i ke koena i loko o ka ʻeke paʻa zip ma 2-8 ℃ koke.

9.2.3 Pono e hoʻomaʻamaʻa hou ʻia ka mea holoi holoi i hoʻoheheʻe ʻia ma ka lumi wela ma mua o ka hoʻohana ʻana.

9.2.4Helu:E helu ʻia kēlā me kēia kūlana microwell a me nā kūlana a me nā laʻana a pau e holo pālua.E hoʻopaʻa i nā kūlana maʻamau a me nā laʻana.

9.2.5Add hoʻonā maʻamau / hāpana a me ka hoʻonā antibody: Hoʻohui i 50µl o ka hopena maʻamau((kit i hāʻawi ʻia)) a i ʻole ka laʻana i hoʻomākaukau ʻia i nā luawai pili.Hoʻohui i 50µl o ka hopena antibody (kit i hāʻawi ʻia).E hoʻokuʻi mālie me ka lulu ʻana i ka pā me ka lima a hoʻomoʻa no 30 mau minuke ma 37 ℃ me ka uhi.

9.2.6Holoi: Wehe mālie i ka uhi a hoʻomaʻemaʻe i ka wai mai nā pūnāwai a holoi i nā microwells me 250µl wai holoi holoi (hoʻonā3) ma ka manawa o 10s no 4-5 manawa.E hoʻopau i ke koena wai me ka pepa hoʻoheheʻe (hiki ke hoʻopau ʻia ke koena o ka ea me ka ʻaoʻao i hoʻohana ʻole ʻia).

9.2.7E hoʻohui i ka enzyme conjugate: Hoʻohui i 100ml o ka hopena conjugate enzyme(kit i hāʻawi ʻia) i kēlā me kēia pūnāwai, hui mālie a hoʻomohu no 30min ma 37 ℃ me ka uhi.E hana hou i ka hana holoi.

9.2.8kala kala: Hoʻohui i 50µl o ka hoʻonā A(kit i hāʻawi ʻia) a me 50µl o ka hoʻonā B(kit i hāʻawi ʻia) i kēlā me kēia pūnāwai.Hoʻohui mālie a hoʻokomo no 15min ma 37 ℃ me ka uhi.

9.2.9Ana: E hoʻohui i 50µl o ka hopena hoʻomaha (kit i hāʻawi ʻia) i kēlā me kēia pūnāwai.E hoʻohui mālie a ana i ka absorbance ma 450nm (Ua manaʻo ʻia ke ana me ka lōʻihi hawewe ʻelua o 450/630nm. E heluhelu i ka hopena i loko o 5min ma hope o ka hoʻohui ʻana i ka hopena hoʻomaha).

10. Nā hopena

10.1 Pākēneka o ke komo ʻana

Hoʻokaʻawale ʻia nā kumukūʻai kumu o nā waiwai absorbance i loaʻa no nā maʻamau a me nā laʻana e ka waiwai absorbance o ka maʻamau mua (zero standard) a hoʻonui ʻia e 100%.No laila, ua like ka zero standard me 100% a ua helu ʻia nā helu absorbance ma nā pākēneka.

B

Ka hoʻopalekana (%) = —— ×100%

B0

B ——absorbance maʻamau (a i ʻole ka laʻana)

B0 ——absorbance zero standard

10.2 Pipi maʻamau

----No ke kaha kiʻi maʻamau: E lawe i ka waiwai hoʻopaneʻe o nā maʻamau ma ke ʻano he axis y, semi logarithmic o ka ʻike ʻana o ka hopena maʻamau tylosin (ppb) ma ke ʻano he x-axis.

----O ka tylosin concentration o kela a me keia lapana (ppb), i hiki ke heluhelu mai ka calibration curve, ua hoonuiia e ka Dilution factor like o kela a me keia la'ana i ukaliia, a ua loaa ka manao maoli o ka la'ana.

E ʻoluʻolu e hoʻomaopopo:

ua hoʻomohala ʻia nā polokalamu kūikawā no ka ʻikepili ʻikepili, hiki ke hāʻawi ʻia ma ke noi.

11. Ka noʻonoʻo, ka pololei a me ka pololei

Hoʻāʻo ʻike:1.5ppb

palena ʻike:

ʻiʻo holoholona……………………………………………………1.5ppb Waiu………………………………………………………………15ppb pololei:

Nā mea holoholona……………………………………………… 80±15%

Waiu…………………………………………………… 80±10%

pololei:

ʻOi aku ka liʻiliʻi o ka helu hoʻololi o ka pahu ELISA ma mua o 10%.

12. Hoolaha

12.1 E hoʻemi ʻia nā kumu waiwai o nā waiwai absorbance i loaʻa no nā maʻamau a me nā laʻana inā ʻaʻole i hoʻoponopono ʻia nā reagents a me nā laʻana i ka lumi wela (20-25 ℃).

12.2 Mai ʻae i nā microwells e maloʻo ma waena o nā ʻanuʻu e pale i ka hana hou ʻole ʻana a hana i ka ʻanuʻu aʻe ma hope koke o ka paʻi ʻana i ka mea paʻa microwells.

12.3 E lulu mālie i kēlā me kēia reagent ma mua o ka hoʻohana ʻana.

12.4 E hoʻokaʻawale i kou ʻili mai ka hopena hoʻomaha no ka mea he 0.5MH₂SO₄hoʻonā.

12.5 Mai hoʻohana i nā kit i ka wā kahiko.Mai hoʻololi i nā reagents o nā pūʻulu like ʻole, a i ʻole e hāʻule ka naʻau.

12.6 E mālama i nā pahu ELISA ma 2-8 ℃, mai maloʻo.Hoʻopaʻa i nā papa microwell hoʻomaha, E pale pololei i ka lā i ka wā e hoʻoulu ai.Paipai ʻia ka uhi ʻana i nā papa microtiter.

12.7 E haʻalele ʻia ka hoʻonā substrate inā e ʻano kala.Hiki ke ho'ololi 'ino 'ia nā reagents inā emi ka waiwai o ka absorbance (450/630nm) o ka zero ma mua o 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 Pono 15min ka hopena kala ma hope o ka hoʻohui ʻana o ka solution A a me ka solution B. A hiki iā ʻoe ke hoʻolōʻihi i ka manawa incubation a hiki i 20min a ʻoi aku paha inā ʻoi aku ka māmā o ke kala e ʻike ʻia.Mai ʻoi aku ma mua o 30min, akā, e hoʻopōkole pono i ka manawa incubation.

12.9 ʻO 37 ℃ ka mahana wela kūpono.ʻO ke kiʻekiʻe a i ʻole ka haʻahaʻa haʻahaʻa e alakaʻi i nā loli o ka naʻau a me nā waiwai absorbance.

13. Waihona

Kūlana mālama: 2-8 ℃.

Ka manawa mālama: 12 mahina.