ઉત્પાદન

પરીક્ષણ સિદ્ધાંત

આ કિટ પરોક્ષ-સ્પર્ધાત્મક ELISA ટેક્નોલોજી પર આધારિત છે.માઇક્રોટાઇટર કુવાઓ કપલિંગ એન્ટિજેન સાથે કોટેડ છે.ફ્લુમક્વિનનમૂનામાં રહેલા અવશેષો એન્ટિબોડી માટે માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ પર કોટેડ એન્ટિજેન સાથે સ્પર્ધા કરે છે.એન્ટિ-એન્ટિબોડી લેબલવાળા એન્ઝાઇમ ઉમેર્યા પછી, રંગ બતાવવા માટે TMB સબસ્ટ્રેટનો ઉપયોગ થાય છે.નમૂનાનું શોષણ તેમાં રહેલ ટેટ્રાસાયક્લાઇન સાથે નકારાત્મક રીતે સંબંધિત છે, સ્ટાન્ડર્ડ કર્વ સાથે સરખામણી કર્યા પછી, મંદન બહુવિધ દ્વારા ગુણાકાર કર્યા પછી, નમૂનામાં ફ્લુમક્વિન અવશેષની માત્રાની ગણતરી કરી શકાય છે.

અરજીઓ

આ કીટનો ઉપયોગ મધમાં ફ્લુમેક્વિન અવશેષોના માત્રાત્મક અને ગુણાત્મક વિશ્લેષણમાં થઈ શકે છે.

ક્રોસ-પ્રતિક્રિયાઓ

ફ્લુમક્વિન ……………………………………………… 100%

જરૂરી સામગ્રી

સાધનો

┅┅માઈક્રોટાઈટર પ્લેટ સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટર (450nm/630nm)

┅┅હોમોજેનાઇઝર અથવા પેટર

┅┅શેકર

┅┅વોર્ટેક્સ મિક્સર

┅┅સેન્ટ્રીફ્યુજ

┅┅ વિશ્લેષણાત્મક સંતુલન (ઇન્ડક્ટન્સ: 0.01 ગ્રામ)

┅┅ગ્રેજ્યુએટેડ પીપેટ: 15ml

┅┅રબર પિપેટ બલ્બ

┅┅પોલીસ્ટાયરીન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબ: 15ml, 50ml

┅┅ગ્લાસ ટેસ્ટ ટ્યુબ: 10 મિલી

┅┅માઈક્રોપીપેટ્સ: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -મલ્ટિપીપેટ

રીએજન્ટ્સ

┅┅n-હેક્સેન(AR)

┅┅મેથિલિન ક્લોરાઇડ(AR)

┅┅એસિટોનાઈટ્રાઈલ(AR)

┅┅ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી

-----કેન્દ્રિત હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ(AR)

કિટ ઘટકો

● એન્ટિજેન સાથે કોટેડ 96 કુવાઓ સાથે માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ

● માનક ઉકેલો(6 બોટલ×1ml/બોટલ)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● ઉચ્ચ સાંદ્રતા પ્રમાણભૂત નિયંત્રણ:(1ml/બોટલ)

………………………………………………………………100ppb

● એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ 12 મિલી………………………... લાલ કેપ

● એન્ટિબોડી સોલ્યુશન 7 મિલી ………………………………………………ગ્રીન કેપ

● સોલ્યુશન A 7 મિલી…………………………………….. સફેદ કેપ

● સોલ્યુશન B 7 મિલી ……………………………………… લાલ કેપ

● સ્ટોપ સોલ્યુશન 7ml ……………………..……… પીળી કેપ

● 20XConcentrated wash solution 40ml

…………………………………………………..પારદર્શક ટોપી

●2X એક્સ્ટ્રેક્શન સોલ્યુશન 50ml……………………………… બ્લુ કેપ

રીએજન્ટ્સ તૈયારી

7.1 મધનો નમૂનો

ઉકેલ 1 : 0.2 M હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ સોલ્યુશન

વજન 41.5ml કેન્દ્રિત હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ, ડીયોનાઇઝ્ડ પાણીથી 500 મિલી સુધી પાતળું કરો.

ઉકેલ 2: ઉકેલ ધોવા

1:19 ના જથ્થાના ગુણોત્તરમાં ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી સાથે કેન્દ્રિત ધોવાનું દ્રાવણ પાતળું કરો, જેનો ઉપયોગ પ્લેટો ધોવા માટે કરવામાં આવશે.પાતળું દ્રાવણ 1 મહિના માટે 4℃ પર સંગ્રહિત કરી શકાય છે.

ઉકેલ3: નિષ્કર્ષણ ઉકેલ

2×કેન્દ્રિત નિષ્કર્ષણ સોલ્યુશનને ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી સાથે 1:1 (અથવા જરૂરિયાત પર આધાર રાખે છે) ની માત્રામાં પાતળું કરો, જેનો ઉપયોગ નમૂનાના નિષ્કર્ષણ માટે કરવામાં આવશે.આ પાતળું સોલ્યુશન 4℃ તાપમાને 1 મહિના માટે સાચવી શકાય છે.

નમૂના તૈયારીઓ

8.1 ઓપરેશન પહેલા વપરાશકર્તાઓ માટે સૂચના અને સાવચેતીઓ

(a) મહેરબાની કરીને પ્રયોગની પ્રક્રિયામાં વન-ઑફ ટીપ્સનો ઉપયોગ કરો અને જ્યારે વિવિધ રીએજન્ટને શોષી લે ત્યારે ટીપ્સ બદલો.

(b) ખાતરી કરો કે તમામ પ્રાયોગિક સાધનો સ્વચ્છ છે, અન્યથા તે પરીક્ષાના પરિણામને અસર કરશે.

8.2મધનો નમૂનો

----- 50ml પોલિસ્ટરીન સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબમાં 2g±0.05g મધના નમૂનાનું વજન કરો,

----- 2ml 0.2 M હાઇડ્રોક્લોરિક એસિડ સોલ્યુશન (સોલ્યુશન 1), વમળને સંપૂર્ણ રીતે મિશ્રિત કરવા માટે ઉમેરો, પછી 8ml મિથિલિન ક્લોરાઇડ ઉમેરો, સંપૂર્ણપણે ઓગળી જવા માટે 5 મિનિટ માટે શેકર વડે હલાવો;

-----10 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ, ઓરડાના તાપમાને ઓછામાં ઓછું 3000g (20-25℃);

-----સુપરનેટન્ટ તબક્કો દૂર કરો, 2 મિલી સબસ્ટ્રેટ ઓર્ગેનિક સોલ્યુશનને 10 મિલી ગ્લાસ ટ્યુબમાં લો. સબસ્ટેટને નાઈટ્રોજન ફ્લો (50-60℃) ના પાણીના સ્નાન હેઠળ સૂકવો.

-----1 ml n-hexane ઉમેરો, 30s માટે વમળ, પછી 1ml નિષ્કર્ષણ સોલ્યુશન ઉમેરો(સોલ્યુશન 3), 1 મિનિટ માટે ફરી વમળ.5 મિનિટ માટે સેન્ટ્રીફ્યુજ, ઓછામાં ઓછા 3000 ગ્રામ ઓરડાના તાપમાને (20-25℃);

-----સુપરનેટન્ટ તબક્કાને દૂર કરો, પરીક્ષણ માટે 50ml લો;

9. પરીક્ષા પ્રક્રિયા

9.1 પરીક્ષા પહેલાં સૂચના

9.1.1 ખાતરી કરો કે બધા રીએજન્ટ્સ અને માઇક્રોવેલ ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) છે.

9.1.2 ઉપયોગ કર્યા પછી તરત જ બાકીના તમામ રીએજન્ટ્સને 2-8℃ પર પાછા ફરો.

9.1.3 માઇક્રોવેલને યોગ્ય રીતે ધોવા એ પરીક્ષાની પ્રક્રિયામાં એક મહત્વપૂર્ણ પગલું છે;ELISA વિશ્લેષણની પુનરાવર્તિતતા માટે તે મહત્વપૂર્ણ પરિબળ છે.

9.1.4 ઇન્ક્યુબેશન દરમિયાન પ્રકાશને ટાળો અને માઇક્રોવેલને આવરી લો.

9.2 પરીક્ષણ પગલાં

9.2.1 ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) બધા રીએજન્ટ્સને 30 મિનિટથી વધુ સમય માટે બહાર કાઢો, ઉપયોગ કરતા પહેલા એકરૂપ બનાવો.

9.2.2 જરૂરી માઇક્રોવેલ મેળવો અને બાકીનાને 2-8℃ પર તરત જ ઝિપ-લોક બેગમાં પરત કરો.

9.2.3 પાતળું ધોવાનું સોલ્યુશન ઉપયોગ કરતા પહેલા ઓરડાના તાપમાને ફરીથી ગરમ કરવું જોઈએ.

9.2.4નંબર:દરેક માઇક્રોવેલ પોઝિશનને નંબર આપો અને તમામ ધોરણો અને નમૂનાઓ ડુપ્લિકેટમાં ચલાવવા જોઈએ.ધોરણો અને નમૂનાઓની સ્થિતિ રેકોર્ડ કરો.

9.2.5પ્રમાણભૂત ઉકેલ/નમૂનો ઉમેરો:50 µl પ્રમાણભૂત દ્રાવણ અથવા તૈયાર નમૂનાને અનુરૂપ કુવાઓમાં ઉમેરો.50µl એન્ટિબોડી સોલ્યુશન ઉમેરો.પ્લેટને મેન્યુઅલી હલાવીને હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 25°C પર 30 મિનિટ માટે પકાવો.

9.2.6ધોવું:કવરને હળવેથી દૂર કરો અને કુવાઓમાંથી પ્રવાહીને શુદ્ધ કરો અને 4-5 વખત 10 સેકન્ડના અંતરે 250µl પાતળું ધોવાનું સોલ્યુશન (સોલ્યુશન 2) વડે માઇક્રોવેલને ધોઈ નાખો.અવશેષ પાણીને શોષક કાગળ વડે શોષી લો (બાકીના હવાના બબલને ન વપરાયેલ ટીપથી દૂર કરી શકાય છે).

9.2.8.એન્ઝાઇમ સંયુગેટ:દરેક કૂવામાં એન્ઝાઇમ કન્જુગેટ સોલ્યુશન 100ml ઉમેરો, પ્લેટને મેન્યુઅલી હલાવીને હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 25°C પર 30 મિનિટ માટે પકાવો.ધોવાનું પગલું ફરીથી પુનરાવર્તન કરો.

9.2.8રંગ:દરેક કૂવામાં 50µl સોલ્યુશન A અને 50µl સોલ્યુશન B ઉમેરો.પ્લેટને મેન્યુઅલી હલાવીને હળવા હાથે મિક્સ કરો અને કવર સાથે 25°C પર 15 મિનિટ સુધી પકાવો (જુઓ 12.8).

9.2.9માપ:દરેક કૂવામાં 50µl સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેરો.પ્લેટને મેન્યુઅલી હલાવીને હળવેથી મિક્સ કરો અને એર બ્લેન્ક સામે 450nm પર શોષકતા માપો (તે 450/630nm ની ડ્યુઅલ-વેવલન્થ સાથે માપવાનું સૂચન કર્યું છે. સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેર્યા પછી 5 મિનિટની અંદર પરિણામ વાંચો.) (અમે દૃષ્ટિ દ્વારા પણ માપી શકીએ છીએ. ELIASA સાધનની ટૂંકમાં સ્ટોપ સોલ્યુશન વિના)

પરિણામો

10.1 ટકા શોષણ

ધોરણો અને નમૂનાઓ માટે મેળવેલા શોષક મૂલ્યોના સરેરાશ મૂલ્યોને પ્રથમ ધોરણ (શૂન્ય ધોરણ) ના શોષક મૂલ્ય દ્વારા વિભાજિત કરવામાં આવે છે અને 100% દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે.શૂન્ય ધોરણ આમ 100% ની બરાબર બનાવવામાં આવે છે અને શોષક મૂલ્યો ટકાવારીમાં ટાંકવામાં આવે છે.

શોષણ (%) = B/B0 × 100%

B ——શોષક ધોરણ (અથવા નમૂના)

B0 ——શોષક શૂન્ય ધોરણ

10.2 પ્રમાણભૂત વળાંક

પ્રમાણભૂત વળાંક દોરવા માટે: ધોરણોના શોષક મૂલ્યને y-અક્ષ તરીકે લો, ફ્લુમક્વિન સ્ટાન્ડર્ડ સોલ્યુશન (ppb) ની સાંદ્રતાના અર્ધ લઘુગણકને x-અક્ષ તરીકે લો.

--- આફ્લુમેક્વિનદરેક નમૂના (ppb) ની સાંદ્રતા, જે કેલિબ્રેશન વળાંકમાંથી વાંચી શકાય છે, તેને અનુસરવામાં આવેલા દરેક નમૂનાના અનુરૂપ મંદન બહુવિધ દ્વારા ગુણાકાર કરવામાં આવે છે, અને નમૂનાની વાસ્તવિક સાંદ્રતા પ્રાપ્ત થાય છે.

ELISA કિટ્સના ડેટા ઘટાડવા માટે, ખાસ સોફ્ટવેર વિકસાવવામાં આવ્યું છે, જે વિનંતી પર પ્રદાન કરી શકાય છે.

11. સંવેદનશીલતા, ચોકસાઈ અને ચોકસાઈ

ટેસ્ટ સંવેદનશીલતા:0.3ppb

મધ સેમ્પલ ડિલ્યુશન ફેક્ટર: 2

તપાસ મર્યાદા

મધનો નમૂનો ---------------------------------- -1 પીપીબી

ચોકસાઈ

મધનો નમૂનો --------------------------------------------- 90±20 %

ચોકસાઇ

ELISA કિટનો ભિન્નતા ગુણાંક 10% કરતા ઓછો છે.

12. સૂચના

12.1 ધોરણો અને નમૂનાઓ માટે મેળવેલા શોષક મૂલ્યોના સરેરાશ મૂલ્યોમાં ઘટાડો થશે જો રીએજન્ટ્સ અને નમૂનાઓ ઓરડાના તાપમાને (20-25℃) પર નિયમન કરવામાં આવ્યાં નથી.

12.2 અસફળ પુનરાવર્તિતતાને ટાળવા અને માઇક્રોવેલ ધારકને ટેપ કર્યા પછી તરત જ આગળનું પગલું ચલાવવા માટે પગલાંઓ વચ્ચે માઇક્રોવેલને સૂકવવા ન દો.

12.3.ઉપયોગ કરતા પહેલા દરેક રીએજન્ટને એકરૂપ બનાવો.

12.4.તમારી ત્વચાને સ્ટોપ સોલ્યુશનથી દૂર રાખો કારણ કે તે 2M H છે₂SO₄ઉકેલ

12.5 જૂની કીટનો ઉપયોગ કરશો નહીં.વિવિધ બેચના રીએજન્ટની આપ-લે કરશો નહીં, કારણ કે તેનાથી સંવેદનશીલતા ઘટી જશે.

12.6 સંગ્રહ સ્થિતિ:

ELISA કિટ્સને 2-8℃ પર રાખો, ફ્રીઝ ન કરો.બાકીની માઈક્રોવેલ પ્લેટો સીલ કરો તમામ ઇન્ક્યુબેશન દરમિયાન સીધો સૂર્યપ્રકાશ ટાળો.માઇક્રોટાઇટર પ્લેટોને આવરી લેવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.

12.7 રીએજન્ટ ખરાબ થવાના સંકેતો:

સબસ્ટ્રેટ સોલ્યુશનનો ત્યાગ કરવો જોઈએ જો તે રંગ કરે છે.

જો શૂન્ય ધોરણનું શોષક મૂલ્ય (450/630nm) 0.5 (A450nm＜0.5) કરતાં ઓછું હોય તો રીએજન્ટ ખરાબ થઈ શકે છે.

12.8 સોલ્યુશન A અને સોલ્યુશન B ઉમેર્યા પછી કલરેશન રિએક્શનને 15 મિનિટની જરૂર પડે છે. અને જો રંગ નક્કી કરવા માટે ખૂબ હલકો હોય તો તમે ઇન્ક્યુબેશન સમયની રેન્જને 20 મિનિટથી વધુ લંબાવી શકો છો.25 મિનિટથી વધુ કદી ન કરો, તેનાથી વિપરીત, સેવનનો સમય યોગ્ય રીતે ઓછો કરો.

12.9 શ્રેષ્ઠ પ્રતિક્રિયા તાપમાન 25℃ છે.ઉચ્ચ અથવા નીચું તાપમાન સંવેદનશીલતા અને શોષક મૂલ્યોમાં ફેરફાર તરફ દોરી જશે.

13. સંગ્રહ

સંગ્રહ સ્થિતિ: 2-8℃.

સંગ્રહ સમયગાળો: 12 મહિના.