táirge

Prionsabal Tástála

Tá an trealamh seo bunaithe ar theicneolaíocht ELISA indíreach-iomaíoch.Tá na toibreacha microtiter brataithe le hantaigin cúplála.Flumequinetá an t-iarmhar sa sampla in iomaíocht leis an antaigin atá brataithe ar an pláta micriteir don antashubstaint.Tar éis einsím lipéadaithe frith-antasubstainte a chur leis, úsáidtear substráit TMB chun an dath a thaispeáint.Tá baint diúltach ag ionsú an tsampla leis an tetracycline ina gcónaí ann, tar éis comparáid a dhéanamh leis an gCuar Caighdeánach, arna iolrú faoin iolrach caolaithe, is féidir cainníocht iarmhair Flumequine sa sampla a ríomh.

Feidhmchláir

Is féidir an trealamh seo a úsáid chun anailís chainníochtúil agus cháilíochtúil a dhéanamh ar iarmhar flumequine i mil.

Tras-imoibrithe

Fliúchas …………………..………………… 100%

Ábhair ag Teastáil

Trealamh

┅┅ speictreafótaiméadar pláta micreatitéar (450nm/630nm)

┅┅ Homogenizer nó stomacher

┅┅ Shaker

┅┅ meascthóir Vortex

┅┅ Lártheifneoir

┅┅ Cothromaíocht anailíseach (ionduchtúchán: 0.01g)

┅┅ Pípéad céimnithe: 15ml

┅┅ Bolgán pípéad rubair

┅┅ Feadán lártheifneoir polaistiréin: 15ml, 50ml

┅┅ Feadán tástála gloine: 10ml

┅┅ Micripéid: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - ilipéad

Imoibrithe

┅┅n- heacsán(AR)

┅ ┅ clóiríd meitiléine(AR)

┅┅ Aicéataitrile(AR)

┅┅ Uisce dí-ianaithe

----- Aigéad hidreaclórach tiubhaithe(AR)

Comhpháirteanna Kit

● Pláta microtiter le 96 tobar atá brataithe le hantaigin

● Réitigh chaighdeánacha (6 bhuidéal × 1ml / buidéal)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Rialú caighdeánach tiúchan ard:(1ml/buidéal)

…………………………………………………...100ppb

● Comhchuingeach einsím 12ml…………………... caipín dearg

● Tuaslagán antashubstainte 7ml …………..……..….…..caipín glas

● Réiteach Caipín bán 7ml ……..…………………..……..

● Tuaslagán B 7ml …………….…………..………… caipín dearg

● Tuaslagán stad 7ml ……………………………..………caipín buí

● Tuaslagán níocháin 20XConcentrated 40ml

………………………………………..…..caipín trédhearcach

●2X Tuaslagán eastósctha 50ml…………………………..… caipín gorm

Imoibrithe Ullmhúchán

7.1 Sampla mil

Tuaslagán 1 : 0.2 M Tuaslagán aigéid hidreaclórach

Meáchan 41.5ml Aigéad hidreaclórach tiubhaithe , caolaigh le huisce dí-ianaithe go 500 ml.

Réiteach 2: Nigh réiteach

Caolaigh an tuaslagán níocháin tiubhaithe le huisce dí-ianaithe sa chóimheas toirte de 1:19, a úsáidfear chun na plátaí a ní.is féidir an tuaslagán caolaithe a stóráil ag 4 ℃ ar feadh 1 mhí.

Réiteach3: réiteach eastóscadh

Caolaigh an tuaslagán eastósctha tiubhaithe 2 × le huisce dí-ianaithe sa chandam toirte 1:1 (nó ag brath ar riachtanas), a úsáidfear le haghaidh eastóscadh samplach.Is féidir an tuaslagán caolaithe seo a chaomhnú ar feadh 1 mhí ag 4 ℃.

Ullmhóidí Samplacha

8.1 Fógra agus réamhchúraimí do na húsáideoirí roimh oibriú

(a) Bain úsáid as leideanna aonuaire le linn an turgnaimh, agus athraigh na leideanna nuair a ionsúnn tú imoibrí difriúil.

(b) Cinntigh go bhfuil na hionstraimí turgnamhacha go léir glan, nó cuirfidh sé éifeacht ar thoradh an scrúdaithe.

8.2Sampla mil

----- Meáigh sampla meala 2g±0.05g isteach i bhfeadán lártheifneora polaistiréin 50ml,

----- Cuir 2ml 0.2 M tuaslagán aigéad hidreaclórach (Réiteach 1), vortex chun é a mheascadh go hiomlán, ansin cuir clóiríd meitiléine 8ml, croith le shaker ar feadh 5 nóiméad a thuaslagadh go hiomlán;

----- Lártheifneoir ar feadh 10 nóiméad, ar a laghad 3000g ag teocht an tseomra (20-25 ℃);

----- Bain an chéim sháithithe, tóg 2 ml den tuaslagán orgánach tsubstráit go feadán gloine 10 ml. triomaigh an foshraith faoi uisce de shreabhadh nítrigine (50-60 ℃)

----- Cuir 1 ml n-heacsán, vortex ar feadh 30s, ansin cuir tuaslagán eastósctha 1ml (réiteach 3), vortex arís ar feadh 1 nóiméad.Lártheifneoir ar feadh 5 nóiméad, ar a laghad 3000g ag teocht an tseomra (20-25 ℃);

----- Bain an chéim supernatant, a ghlacadh 50ml le haghaidh measúnachta;

9. Próiseas measúnaithe

9.1 Fógra roimh mheasúnú

9.1.1 Cinntigh go bhfuil gach imoibrí agus microwells go léir ag teocht an tseomra (20-25 ℃).

9.1.2 Cuir na himoibrithe go léir ar ais go 2-8 ℃ díreach tar éis iad a úsáid.

9.1.3 Is céim thábhachtach sa phróiseas measúnaithe é na microwells a ní i gceart;is é an fachtóir ríthábhachtach é maidir le hathchleachtais anailís ELISA.

9.1.4 Seachain an solas agus clúdaigh na micrithoibreacha le linn goir.

9.2 Céimeanna an Mheasúnaithe

9.2.1 Tóg amach gach imoibrí ag teocht an tseomra (20-25 ℃) ar feadh níos mó ná 30 nóiméad, homogenize roimh úsáid.

9.2.2 Faigh amach na microwells atá ag teastáil agus cuir an chuid eile ar ais isteach sa mhála zip-glas ag 2-8 ℃ láithreach.

9.2.3 Ba chóir an tuaslagán nigh caolaithe a athéamh le bheith ag teocht an tseomra roimh úsáid.

9.2.4Uimhir:Líon gach suíomh microwell agus ba chóir gach caighdeán agus sampla a rith i ndúblach.Taifead na caighdeáin agus seasaimh na samplaí.

9.2.5Cuir réiteach/sampla caighdeánach leis:Cuir 50 µl de thuaslagán caighdeánach nó de shampla ullmhaithe leis na toibreacha comhfhreagracha.Cuir tuaslagán antashubstainte 50µl leis.Measc go réidh tríd an pláta a chroitheadh ​​de láimh agus gor é ar feadh 30 nóiméad ag 25 ℃ le clúdach.

9.2.6Nigh:Bain an clúdach go réidh agus glan an leacht as na toibreacha agus sruthlaigh na microwells le tuaslagán níocháin caolaithe 250 µl (tuaslagán 2) ag eatraimh 10s ar feadh 4-5 huaire.Ionsúigh an t-uisce iarmharach le páipéar ionsúiteach (is féidir an chuid eile mboilgeog aeir a dhíchur le barr neamhúsáidte).

9.2.8.Comhchuingeach einsím:Cuir tuaslagán comhchuingeach einsím 100ml le gach tobar, Measc go réidh tríd an pláta a chroitheadh ​​de láimh agus gor ar feadh 30 nóiméad ag 25 ℃ le clúdach.Déan an chéim níocháin arís.

9.2.8Dathú:Cuir 50µl tuaslagán A agus 50µl tuaslagán B le gach tobar.Measc go réidh tríd an pláta a chroitheadh ​​de láimh agus gor ar feadh 15 nóiméad ag 25 ℃ le clúdach (féach 12.8).

9.2.9Tomhais:Cuir 50µl an stop-thuaslagán le gach tobar.Measc go réidh tríd an pláta a chroitheadh ​​de láimh agus déan an t-ionsúiteadh a thomhas ag 450nm in aghaidh an fholaimh aeir (Moltar é a thomhas le dé-thonnfhad 450/630nm. Léigh an toradh laistigh de 5min tar éis an tuaslagán stad a chur leis. ) (Is féidir linn a thomhas freisin de réir radharc réiteach gan stad i gearr ar an ionstraim ELIASA)

Torthaí

10.1 Céatadán ionsúcháin

Roinntear meánluachanna na luachanna ionsúcháin a fhaightear do na caighdeáin agus na samplaí faoi luach ionsúcháin an chéad chaighdeáin (caighdeán nialasach) agus iolraítear iad faoi 100%.Mar sin déantar an caighdeán nialasach cothrom le 100% agus luaitear na luachanna ionsúcháin i gcéatadáin.

Ionsú (%) = B/B0 × 100%

B —— caighdeán ionsúcháin (nó sampla)

B0 ——caighdeán ionsúite nialasach

10.2 Cuar Caighdeánach

Chun cuar caighdeánach a tharraingt: Glac luach ionsúcháin na gcaighdeán mar y-ais, leath-logartamach de thiúchan an tuaslagáin caighdeáin flumequine (ppb) mar x-ais.

--- Tá anflumequinedéantar tiúchan gach sampla (ppb), ar féidir a léamh ón gcuar calabrúcháin, a iolrú faoin iolracha caolaithe comhfhreagrach de gach sampla ina dhiaidh sin, agus faightear tiúchan iarbhír an tsampla.

Chun sonraí feiste ELISA a laghdú, forbraíodh bogearraí speisialta, ar féidir iad a sholáthar ach iad a iarraidh.

11. Íogaireacht, cruinneas agus cruinneas

Íogaireacht Tástála:0.3ppb

Mil Fachtóir caolaithe samplach: 2

Teorainn braite

Sampla mil --------------------------------------------- -1ppb

Cruinneas

Sampla mil -------------------------------------------- 90 ±20 %

Beachtas

Tá comhéifeacht athraithe an fheiste ELISA níos lú ná 10%.

12. Fógra

12.1 Laghdófar meánluachanna na luachanna ionsúcháin a fhaightear do na caighdeáin agus na samplaí mura bhfuil na himoibrithe agus na samplaí rialaithe go teocht an tseomra (20-25 ℃).

12.2 Ná lig do microwells a thriomú idir céimeanna chun athrá nár éirigh leo a sheachaint agus an chéad chéim eile a oibriú díreach tar éis an sealbhóir microwells a sconna.

12.3.Homogenize gach imoibrí roimh úsáid.

12.4.Coinnigh do chraiceann ar shiúl ón réiteach stad mar is é an 2M H é₂SO₄réiteach.

12.5 Ná húsáid na feisteáin as dáta.Ná malartóidh imoibrithe baisceanna éagsúla, mar laghdóidh sé an íogaireacht.

12.6 Coinníoll stórála:

Coinnigh na feisteáin ELISA ag 2-8 ℃, ná reoite.Plátaí micreathoibreacha do scíth a shéalú Seachain solas díreach le linn goir.Moltar na plátaí microtiter a chlúdach.

12.7 Tásca ag dul go dona leis na himoibrithe:

Ba chóir réiteach tsubstráit a thréigean má chasann sé dathanna.

D’fhéadfadh go n-iompódh na himoibrithe go dona má tá luach ionsúcháin (450/630nm) den chaighdeán nialasach níos lú ná 0.5 (A450nm ＜0.5).

12.8 Caithfidh an t-imoibriú dathúcháin 15 nóiméad tar éis Réiteach A agus Réiteach B a chur leis. Agus is féidir leat na raonta ama goir a shíneadh ó 20 nóiméad go dtí níos mó má tá an dath ró-éadrom le socrú.Ná níos mó ná 25 nóiméad, Ar a mhalairt, giorraigh an t-am goir i gceart.

12.9 Is é 25 ℃ an teocht imoibrithe is fearr.Beidh athruithe íogaireachta agus luachanna ionsúcháin mar thoradh ar theocht níos airde nó níos ísle.

13. Stóráil

Coinníoll stórála: 2-8 ℃.

Tréimhse stórála: 12 mhí.