produkto

Testa Principo

Ĉi tiu ilaro estas bazita sur nerekte-konkurenciva ELISA-teknologio.La mikrotiterputoj estas kovritaj per kunliga antigeno.Flumequinerestaĵo en la provaĵo konkuras kun la antigeno kovrita sur la mikrotiterplato por la antikorpo.Post la aldono de enzimo etikedita kontraŭ-antikorpo, TMB-substrato estas uzata por montri la koloron.Absorbance de la specimeno estas negative rilatita al la tetracycline loĝas en ĝi, post kompari kun la Norma Kurbo, multiplikita per la diluo oblo, Flumequine restaĵo kvanto en la specimeno povas esti kalkulita.

Aplikoj

Ĉi tiu ilaro povas esti uzata en kvanta kaj kvalita analizo de flumequine-restaĵo en mielo.

Krucreagoj

Flumequine ……………………………..……………………………… 100%

Materialoj Bezonataj

Ekipaĵoj

┅┅Mikrotiterplata spektrofotometro (450nm/630nm)

┅┅Homogenizilo aŭ stomako

┅┅Skuujo

┅┅Vortex-miksilo

┅┅Centrifugilo

┅┅Analitika pesilo (induktanco: 0.01g)

┅┅Diplomita pipeto: 15ml

┅┅Kaŭĉuka pipetbulbo

┅┅Polystirene Centrifuga tubo: 15ml, 50ml

┅┅Vitra provtubo: 10ml

┅┅Mikropipetoj: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml -multippeto

Reakciiloj

┅┅n-heksano (AR)

┅┅Metilenklorido (AR)

┅┅Acetonitrilo (AR)

┅┅Dejonigita akvo

-----Koncentrita klorida acido (AR)

Ilaro Komponantoj

● Microtiter-plato kun 96 putoj kovritaj per antigeno

● Normaj solvoj (6 boteloj × 1 ml/botelo)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Alta koncentriĝo norma kontrolo: (1 ml/botelo)

……………………………………………………………………100ppb

● Enzima konjugacio 12ml………………………………... ruĝa ĉapo

● Antikorpa solvo 7ml …………..……..….…..verda ĉapo

● Solvo A 7ml……..…………………..………..blanka ĉapo

● Solvo B 7ml …………….…………..………… ruĝa ĉapo

● Haltiga solvo 7ml ……………………..………flava ĉapo

● 20XKoncentrita lava solvo 40ml

………………………………………..…..travidebla ĉapo

●2X Eltira solvo 50ml……………………………… blua ĉapo

Preparado de Reakciiloj

7.1 Specimeno de mielo

Solvo 1 : 0,2 M Klorida acida solvaĵo

Pezo 41,5 ml Koncentrita klorida acido, diluu per dejonigita akvo al 500 ml.

Solvo 2: Lavu solvo

Diluu la koncentritan lavan solvon kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:19, kiu estos uzata por lavi la telerojn.la diluita solvo povas esti stokita je 4℃ dum 1 monato.

Solvo3: eltira solvo

Diluu la 2×koncentran eltiran solvon kun dejonigita akvo en la volumena proporcio de 1:1 (aŭ dependu de postulo), kiu estos uzata por specimena eltiro.Ĉi tiu diluita solvo povas esti konservita dum 1 monato je 4℃.

Specimenaj Preparoj

8.1 Avizo kaj antaŭzorgoj por la uzantoj antaŭ operacio

(a) Bonvolu uzi unufojajn konsiletojn en la procezo de eksperimento, kaj ŝanĝi la konsiletojn kiam sorbas malsaman reakciilon.

(b) Certiĝu, ke ĉiuj eksperimentaj instrumentoj estas puraj, alie ĝi efikos la analizrezulton.

8.2Specimeno de mielo

----- Pezu 2g±0.05g mielprovaĵon en 50ml polistirenan centrifugilon,

-----Aldonu 2ml 0.2 M Klorida acida solvo (Solvo 1), vortex por miksi ĝin tute, tiam aldonu 8ml metilen-klorido, skuu per skuilo dum 5min por tute solvi;

-----Centrifugu dum 10 min, almenaŭ 3000g ĉe ĉambra temperaturo (20-25℃);

-----Forigu la supernatan fazon, prenu 2 ml da la substrata organika solvaĵo al 10 ml vitra tubo. Sekigu la subŝtaton sub akvobanon de fluo de Nitrogeno (50-60 ℃)

-----Aldonu 1 ml n-heksanon, vortigu dum 30'oj, poste aldonu 1ml eltiran solvon (solvo 3), vortigu denove dum 1 min.Centrifugu dum 5 minutoj, almenaŭ 3000 g ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃);

-----Forigu la supernatan fazon, prenu 50ml por analizo;

9. Procezo

9.1 Rimarku antaŭ analizo

9.1.1 Certigu, ke ĉiuj reakciiloj kaj mikroputoj estas ĉiuj ĉe ĉambra temperaturo (20-25℃).

9.1.2 Remetu ĉiujn ceterajn reakcilojn al 2-8℃ tuj post uzo.

9.1.3 Lavi la mikroputojn ĝuste estas grava paŝo en la procezo de analizo;ĝi estas la esenca faktoro al la ripetemo de la ELISA-analizo.

9.1.4 Evitu la lumon kaj kovru la mikroputojn dum kovado.

9.2 Analizaj Paŝoj

9.2.1 Elprenu ĉiujn reakciulojn ĉe ĉambra temperaturo (20-25 ℃) dum pli ol 30 minutoj, homogeniĝu antaŭ uzo.

9.2.2 Eligu la mikroputojn necesajn kaj redonu la reston en la zipŝlosan sakon je 2-8℃ tuj.

9.2.3 La diluita lavsolvo devas esti revarmigita por esti ĉe ĉambra temperaturo antaŭ uzo.

9.2.4Nombro:Nombri ĉiun mikroputan pozicion kaj ĉiuj normoj kaj specimenoj devas esti kuritaj duplikate.Registri la normojn kaj specimenajn poziciojn.

9.2.5Aldonu norman solvon/specimenon:Aldonu 50 µl da norma solvo aŭ preta specimeno al respondaj putoj.Aldonu 50 µl de antikorpa solvo.Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 30 minutoj je 25 ℃ kun kovrilo.

9.2.6Lavu:Forigu la kovrilon milde kaj purigu la likvaĵon el la putoj kaj lavu la mikroputojn per 250µl diluita lavsolvo (solvo 2) je intervalo de 10s dum 4-5 fojojn.Sorbi la restan akvon per sorba papero (la cetera aerveziko povas esti forigita per neuzata pinto).

9.2.8.Enzima konjugacio:Aldonu enzimkonjugatan solvon 100 ml al ĉiu puto, Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 30 minutoj je 25 ℃ kun kovrilo.Ripetu la lavan paŝon denove.

9.2.8Koloro:Aldonu 50µl da solvo A kaj 50µl da solvo B al ĉiu puto.Miksu milde skuante la teleron permane kaj kovu dum 15 minutoj je 25℃ kun kovrilo (vidu 12.8).

9.2.9Mezuro:Aldonu 50µl la haltan solvon al ĉiu puto.Miksu milde skuante la teleron permane kaj mezuru la absorbadon je 450nm kontraŭ aerblankaĵo (Sugestas mezuri kun la duobla ondolongo de 450/630nm. Legu la rezulton ene de 5 minutoj post aldono de halta solvo. ) (Ni ankaŭ povas mezuri per vido). sen halta solvo krom la ELIASA-instrumento)

Rezulto

10.1 Procenta absorbo

La averaĝaj valoroj de la sorbaj valoroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estas dividitaj per la absorbadvaloro de la unua normo (nul normo) kaj multobligitaj per 100%.La nula normo estas tiel egala al 100% kaj la absorbadvaloroj estas cititaj en procentoj.

Sorbaco (%) = B/B0 × 100%

B ——sorba normo (aŭ specimeno)

B0 ——sorba nula normo

10.2 Norma Kurbo

Por desegni norman kurbon: Prenu la absorban valoron de normoj kiel y-akso, duonlogaritma de la koncentriĝo de la flumequine normsolvo (ppb) kiel x-akso.

--- Laflumequinekoncentriĝo de ĉiu specimeno (ppb), kiu povas esti legita de la kalibrada kurbo, estas multobligita per la responda diluooblo de ĉiu specimeno sekvita, kaj la reala koncentriĝo de specimeno estas akirita.

Por datumredukto de la ELISA-kompletoj, speciala programaro estis evoluigita, kiu povas esti disponigita laŭpeto.

11. Sentemo, precizeco kaj precizeco

Testo-Sentemo：0.3ppb

Faktoro de diluo de mielo-provaĵo: 2

Detekta limo

Specimeno de mielo------------------------------------------------ -1ppb

Precizeco

Specimeno de mielo -------------------------------------------- 90±20 %

Precizeco

Varia koeficiento de la ELISA ilaro estas malpli ol 10%.

12. Rimarku

12.1 La averaĝaj valoroj de la sorbaj valoroj akiritaj por la normoj kaj la specimenoj estos reduktitaj se la reakciiloj kaj specimenoj ne estis reguligitaj al ĉambra temperaturo (20-25 ℃).

12.2 Ne permesu al mikroputoj sekiĝi inter paŝoj por eviti malsukcesan ripeton kaj funkciigu la sekvan paŝon tuj post frapado de la mikroputotenilo.

12.3.Homgenigu ĉiun reakciilon antaŭ ol uzi.

12.4.Tenu vian haŭton for de la halta solvo ĉar ĝi estas la 2M H₂SO₄solvo.

12.5 Ne uzu la ilojn malmodernajn.Ne interŝanĝu la reactivojn de malsamaj aroj, ĉar ĝi faligos la sentemon.

12.6 Kondiĉo de konservado:

Konservu la ELISA-kompletojn je 2-8℃, ne frostigu.Sigelu ripozajn mikroputajn platojn Evitu rektan sunlumon dum ĉiuj kovadoj.Oni rekomendas kovri la mikrotiterajn platojn.

12.7 Indikoj por la malboniĝo de la reakciiloj:

Substrata solvo devas esti forlasita se ĝi iĝas koloroj.

La reakciiloj povas malboniĝi se la absorba valoro (450/630nm) de la nula normo estas malpli ol 0.5 (A450nm<0.5).

12.8 La kolora reago bezonas 15 minutojn post aldono de Solvo A kaj Solvo B. Kaj vi povas plilongigi la inkubacion de 20 minutoj ĝis pli, se la koloro estas tro malpeza por esti determinita.Neniam superu 25min, Male, mallongigu la inkubacion ĝuste.

12.9 La optimuma reakcia temperaturo estas 25℃.Pli alta aŭ pli malalta temperaturo kondukos al la ŝanĝoj de sentemo kaj absorbadvaloroj.

13. Stokado

Kondiĉo de konservado: 2-8 ℃.

Stokado: 12 monatoj.