cynnyrch

Prawf Egwyddor

Mae'r pecyn hwn yn seiliedig ar dechnoleg ELISA anuniongyrchol-gystadleuol.Mae'r ffynhonnau microtiter wedi'u gorchuddio ag antigen cyplu.Fflwmpynmae gweddillion yn y sampl yn cystadlu â'r antigen sydd wedi'i orchuddio ar y plât microtiter ar gyfer y gwrthgorff.Ar ôl ychwanegu ensym wedi'i labelu gwrth-gwrthgorff, defnyddir swbstrad TMB i ddangos y lliw.Mae cysylltiad negyddol rhwng amsugno'r sampl a'r tetracycline sy'n byw ynddo, ar ôl cymharu â'r Gromlin Safonol, wedi'i luosi â'r lluosrif gwanhau, gellir cyfrifo maint gweddillion Flumequine yn y sampl.

Ceisiadau

Gellir defnyddio'r pecyn hwn mewn dadansoddiad meintiol ac ansoddol o weddillion flumequine mewn mêl.

Traws-adweithiau

Flumequine …………………..………………… 100%

Deunyddiau Angenrheidiol

Offer

┅┅ sbectroffotomedr plât microteitr (450nm/630nm)

┅┅ Homogenizer neu stomacher

┅┅ Ysgwydwr

┅ ┅ Cymysgydd Vortex

┅┅ Centrifuge

┅┅ Cydbwysedd dadansoddol (anwythiad: 0.01g)

┅┅ Pibed graddedig: 15ml

┅┅ bwlb pibed rwber

┅┅ Tiwb Allgyrchu Polystyren: 15ml, 50ml

┅┅ Tiwb profi gwydr: 10ml

┅┅ Micropipettes: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250ml - amlipét

Adweithyddion

┅┅n-hecsan(AR)

┅ ┅ Methylen clorid (AR)

┅┅ Asetonitril(AR)

┅ ┅ dŵr deionized

----- Asid hydroclorig crynodedig (AR)

Cydrannau Kit

● Plât microtiter gyda 96 o ffynhonnau wedi'u gorchuddio ag antigen

● Atebion safonol (6 potel × 1ml / potel)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Rheolaeth safonol crynodiad uchel: (1ml / potel)

…………………………………………………...100ppb

● Ensym cyfun 12ml …………………... cap coch

● Hydoddiant gwrthgyrff 7ml …………..……..….…..cap gwyrdd

● Ateb A 7ml……..…………………..……..cap gwyn

● Ateb B 7ml …………….…………..………… cap coch

● Stop toddiant 7ml ……………………..………cap melyn

● 20XConcentrated ateb golchi 40ml

………………………………………..…..cap tryloyw

●2X Datrysiad echdynnu 50ml…………………………..… cap glas

Paratoi Adweithyddion

7.1 Sampl mêl

Ateb 1 : 0.2 M Hydoddiant asid hydroclorig

Pwysau 41.5ml Asid hydroclorig crynodedig, wedi'i wanhau â dŵr wedi'i ddadïoneiddio i 500 ml.

Ateb 2: Golchi ateb

Gwanhau'r hydoddiant golchi crynodedig gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio yn y gymhareb cyfaint o 1:19, a fydd yn cael ei ddefnyddio ar gyfer golchi'r platiau.gellir storio'r hydoddiant gwanedig ar 4 ℃ am 1 mis.

Ateb3: ateb echdynnu

Gwanhewch yr hydoddiant echdynnu crynodedig 2 × â dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio yn y dogn cyfaint o 1:1 (neu'n dibynnu ar y gofyniad), a ddefnyddir ar gyfer echdynnu sampl.Gellir cadw'r hydoddiant gwanedig hwn am 1 mis ar 4 ℃.

Paratoadau Sampl

8.1 Hysbysiad a rhagofalon ar gyfer y defnyddwyr cyn gweithredu

(a) Defnyddiwch awgrymiadau untro yn y broses o arbrofi, a newidiwch y tomenni wrth amsugno gwahanol adweithydd.

(b) Sicrhewch fod yr holl offer arbrofol yn lân, fel arall bydd yn effeithio ar ganlyniad yr assay.

8.2Sampl mêl

----- Pwyswch sampl mêl 2g±0.05g i mewn i diwb centrifuge polystyren 50ml,

----- Ychwanegu 2ml 0.2 M Hydoddiant asid hydroclorig (Ateb 1), fortecs i'w gymysgu'n llwyr, yna ychwanegu 8ml methylene clorid, ysgwyd gyda ysgydwr am 5min i hydoddi yn gyfan gwbl;

----- Centrifuge am 10 munud, o leiaf 3000g ar dymheredd ystafell (20-25 ℃);

----- Tynnwch y cyfnod supernatant, cymerwch 2 ml o'r hydoddiant organig swbstrad i diwb gwydr 10 ml. sychwch yr is-wladwriaeth o dan baddon dŵr llif Nitrogen (50-60 ℃)

----- Ychwanegu 1 ml n-hecsan, fortecs am 30au, yna ychwanegu hydoddiant echdynnu 1ml (ateb 3), fortecs eto am 1 munud.Centrifuge am 5 munud, o leiaf 3000g ar dymheredd ystafell (20-25 ℃);

----- Tynnwch y cyfnod supernatant, cymerwch 50ml ar gyfer assay;

9. Proses Assay

9.1 Hysbysiad cyn assay

9.1.1 Sicrhewch fod yr holl adweithyddion a microffynnon i gyd ar dymheredd ystafell (20-25 ℃).

9.1.2 Dychwelwch yr holl adweithyddion gweddill i 2-8 ℃ yn syth ar ôl eu defnyddio.

9.1.3 Mae golchi'r microwells yn gywir yn gam pwysig yn y broses o assay;dyma'r ffactor hanfodol i ailadrodd y dadansoddiad ELISA.

9.1.4 Osgowch y golau a gorchuddiwch y microwells yn ystod y cyfnod magu.

9.2 Camau Profi

9.2.1 Tynnwch yr holl adweithyddion allan ar dymheredd ystafell (20-25 ℃) am fwy na 30 munud, homogenize cyn ei ddefnyddio.

9.2.2 Cael y microwells sydd eu hangen allan a dychwelyd y gweddill i'r bag clo sip ar 2-8 ℃ ar unwaith.

9.2.3 Dylid ailgynhesu'r hydoddiant golchi gwanedig i fod ar dymheredd ystafell cyn ei ddefnyddio.

9.2.4Rhif:Rhifwch bob safle microwell a dylid rhedeg pob safon a sampl yn ddyblyg.Cofnodwch y safonau a safleoedd samplau.

9.2.5Ychwanegu datrysiad / sampl safonol:Ychwanegu 50 µl o hydoddiant safonol neu sampl wedi'i baratoi at ffynhonnau cyfatebol.Ychwanegu hydoddiant gwrthgorff 50µl.Cymysgwch yn ysgafn trwy ysgwyd y plât â llaw a deorwch am 30 munud ar 25 ℃ gyda gorchudd.

9.2.6Golchwch:Tynnwch y clawr yn ysgafn a phurwch yr hylif allan o'r ffynhonnau a rinsiwch y microwells gyda hydoddiant golchi wedi'i wanhau 250µl (hydoddiant 2) ar egwyl o 10s am 4-5 gwaith.Amsugno'r dŵr gweddilliol gyda phapur amsugnol (gellir dileu'r swigen aer gweddill gyda blaen heb ei ddefnyddio).

9.2.8.Cyfuniad ensymau:Ychwanegu hydoddiant cyfun ensym 100ml at bob ffynnon, Cymysgwch yn ysgafn trwy ysgwyd y plât â llaw a deorwch am 30 munud ar 25 ℃ gyda gorchudd.Ailadroddwch y cam golchi eto.

9.2.8Lliw:Ychwanegu 50µl hydoddiant A a 50µl hydoddiant B at bob ffynnon.Cymysgwch yn ysgafn trwy ysgwyd y plât â llaw a deorwch am 15 munud ar 25 ℃ gyda gorchudd (gweler 12.8).

9.2.9Mesur:Ychwanegwch 50µl yr hydoddiant stopio i bob ffynnon.Cymysgwch yn ysgafn trwy ysgwyd y plât â llaw a mesurwch yr amsugnedd ar 450nm yn erbyn gwag aer (Awgrymir mesur gyda'r donfedd ddeuol o 450/630nm. Darllenwch y canlyniad o fewn 5 munud ar ôl ychwanegu hydoddiant stop.) (Gallwn hefyd fesur yn ôl golwg.) heb ateb stop yn fyr o'r offeryn ELIASA)

Canlyniadau

10.1 Canran yr amsugnedd

Rhennir gwerthoedd cymedrig y gwerthoedd amsugno a gafwyd ar gyfer y safonau a'r samplau â gwerth amsugnedd y safon gyntaf (safon sero) a'i luosi â 100%.Felly gwneir y safon sero yn hafal i 100% a dyfynnir y gwerthoedd amsugno mewn canrannau.

Amsugno (%) = B/B0 × 100%

B —— safon amsugno (neu sampl)

B0 ——safon amsugno sero

10.2 Cromlin Safonol

I lunio cromlin safonol: Cymerwch werth amsugnedd safonau fel echel-y, lled logarithmig o grynodiad yr hydoddiant safonau flumequine (ppb) fel echelin-x.

--- Yrflumequinemae crynodiad pob sampl (ppb), y gellir ei ddarllen o'r gromlin graddnodi, yn cael ei luosi â lluosrif gwanhau cyfatebol pob sampl a ddilynir, a cheir crynodiad gwirioneddol y sampl.

Ar gyfer lleihau data citiau ELISA, mae meddalwedd arbennig wedi'i ddatblygu, y gellir ei ddarparu ar gais.

11. Sensitifrwydd, cywirdeb a manwl gywirdeb

Sensitifrwydd Prawf:0.3ppb

Ffactor gwanhau Sampl Mêl: 2

Terfyn canfod

Sampl mêl -------------------------------------------- -1ppb

Cywirdeb

Sampl mêl -------------------------------------------- 90 ±20 %

Manwl

Mae cyfernod amrywiad pecyn ELISA yn llai na 10%.

12. Hysbysiad

12.1 Bydd gwerthoedd cymedrig y gwerthoedd amsugno a gafwyd ar gyfer y safonau a'r samplau yn cael eu lleihau os nad yw'r adweithyddion a'r samplau wedi'u rheoleiddio i dymheredd ystafell (20-25 ℃).

12.2 Peidiwch â gadael i microwells sychu rhwng camau er mwyn osgoi ailadrodd aflwyddiannus a gweithredu'r cam nesaf yn syth ar ôl tapio deiliad y microwells.

12.3.Homogenize pob adweithydd cyn ei ddefnyddio.

12.4.Cadwch eich croen i ffwrdd o'r toddiant stopio oherwydd ei fod yn 2M H₂SO₄ateb.

12.5 Peidiwch â defnyddio'r pecynnau sydd wedi dyddio.Peidiwch â chyfnewid adweithyddion gwahanol sypiau, oherwydd bydd yn gollwng y sensitifrwydd.

12.6 Amod storio:

Cadwch y pecynnau ELISA ar 2-8 ℃, peidiwch â rhewi.Selio platiau microwellt gorffwys Osgoi golau haul syth yn ystod pob deor.Argymhellir gorchuddio'r platiau microtiter.

12.7 Arwyddion bod yr adweithyddion yn mynd yn wael:

Dylid rhoi'r gorau i ateb swbstrad os yw'n troi lliwiau.

Gall yr adweithyddion droi'n ddrwg os yw gwerth amsugnedd (450/630nm) y safon sero yn llai na 0.5 (A450nm ＜0.5).

12.8 Mae angen 15 munud ar yr adwaith lliwio ar ôl ychwanegu Ateb A ac Ateb B. A gallwch chi ymestyn yr amser deori o 20 munud i fwy os yw'r lliw yn rhy ysgafn i'w bennu.Peidiwch byth â bod yn fwy na 25 munud, I'r gwrthwyneb, cwtogwch yr amser deori yn iawn.

12.9 Y tymheredd adwaith gorau posibl yw 25 ℃.Bydd tymheredd uwch neu is yn arwain at newid gwerthoedd sensitifrwydd ac amsugno.

13. storio

Cyflwr storio: 2-8 ℃.

Cyfnod storio: 12 mis.