produkt

Princip testu

Tato souprava je založena na nepřímé konkurenční technologii ELISA.Mikrotitrační jamky jsou potaženy vazebným antigenem.Flumequinzbytek ve vzorku soutěží s antigenem potaženým na mikrotitrační destičce o protilátku.Po přidání enzymaticky značené protilátky se k zobrazení barvy použije substrát TMB.Absorbance vzorku je negativně úměrná tetracyklinu v něm obsaženému, po srovnání se standardní křivkou, vynásobené násobkem ředění, lze vypočítat množství flumequinového zbytku ve vzorku.

Aplikace

Tuto soupravu lze použít při kvantitativní a kvalitativní analýze reziduí flumequinu v medu.

Křížové reakce

Flumequin ………………………………………………… 100 %

Požadované materiály

Vybavení

┅┅ Mikrotitrační destičkový spektrofotometr (450nm/630nm)

┅┅Homogenizátor nebo Stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortexový mixér

┅┅Odstředivka

┅┅Analytická váha (indukčnost: 0,01g)

┅┅Odměrná pipeta: 15ml

┅┅Gumová pipeta

┅┅ Polystyrenová centrifugační zkumavka: 15ml, 50ml

┅┅Skleněná zkumavka：10ml

┅┅Mikropipety: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250 ml - multipipeta

Reagencie

┅┅n-hexan (AR)

┅┅Methylenchlorid (AR)

┅┅Acetonitril (AR)

┅┅Deionizovaná voda

-----Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (AR)

Součásti sady

● Mikrotitrační destička s 96 jamkami potaženými antigenem

● Standardní roztoky (6 lahviček × 1 ml/lahev)

0 ppb, 0,3 ppb, 1,2 ppb, 4,8 ppb, 19,2 ppb, 76,8 ppb

● Standardní kontrola vysoké koncentrace: (1 ml/lahev)

…………………………………………………………100 ppb

● Enzymový konjugát 12ml………………………... červený uzávěr

● Protilátkový roztok 7ml …………..……..….…..zelený uzávěr

● Roztok A 7ml……..………………………..………..bílý uzávěr

● Roztok B 7ml ………………….………………..………… červený uzávěr

● Stop roztok 7ml …………………………..…žlutý uzávěr

● 20XKoncentrovaný promývací roztok 40ml

………………………………………..…..průhledný uzávěr

●2X extrakční roztok 50ml…………………… modrý uzávěr

Příprava činidel

7.1 Vzorek medu

Roztok 1: 0,2 M roztok kyseliny chlorovodíkové

Hmotnost 41,5 ml Koncentrovaná kyselina chlorovodíková, zředěná deionizovanou vodou na 500 ml.

Řešení 2: Promývací roztok

Koncentrovaný promývací roztok nařeďte deionizovanou vodou v objemovém poměru 1:19, která bude použita k promývání desek.zředěný roztok lze skladovat při 4 °C po dobu 1 měsíce.

Řešení3: extrakční roztok

2× koncentrovaný extrakční roztok nařeďte deionizovanou vodou v objemovém poměru 1:1 (nebo dle požadavku), která bude použita pro extrakci vzorku.Tento zředěný roztok lze uchovat po dobu 1 měsíce při 4 °C.

Vzorové přípravky

8.1 Upozornění a bezpečnostní opatření pro uživatele před provozem

(a) V průběhu experimentu použijte jednorázové špičky a při absorbování jiného činidla je vyměňte.

(b) Ujistěte se, že jsou všechny experimentální přístroje čisté, jinak to ovlivní výsledek testu.

8.2Vzorek medu

----- Navažte 2 g ± 0,05 g vzorku medu do 50 ml polystyrenové centrifugační zkumavky,

----- Přidejte 2 ml 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkové (roztok 1), vortexujte, aby se zcela promíchal, poté přidejte 8 ml methylenchloridu, protřepávejte 5 minut na třepačce, aby se úplně rozpustilo;

-----Odstřeďujte 10 minut, alespoň 3000 g při pokojové teplotě (20-25℃);

----- Odstraňte supernatantovou fázi, vezměte 2 ml organického roztoku substrátu do 10 ml skleněné zkumavky. Sušte substrát ve vodní lázni s proudem dusíku (50-60℃)

-----Přidejte 1 ml n-hexanu, vortexujte po dobu 30 s, poté přidejte 1 ml extrakčního roztoku (roztok 3), znovu míchejte 1 min.Centrifugujte po dobu 5 minut, alespoň 3000 g při pokojové teplotě (20-25℃);

----- Odstraňte supernatantovou fázi, odeberte 50 ml pro analýzu;

9. Proces testu

9.1 Upozornění před analýzou

9.1.1 Ujistěte se, že všechna činidla a mikrojamky mají pokojovou teplotu (20-25 °C).

9.1.2 Ihned po použití vraťte všechna zbývající činidla na 2-8 °C.

9.1.3 Správné promytí mikrojamek je důležitým krokem v procesu testu;je to zásadní faktor pro opakovatelnost analýzy ELISA.

9.1.4 Během inkubace se vyhněte světlu a zakryjte mikrojamky.

9.2 Kroky testu

9.2.1 Všechny reagencie vyjměte při pokojové teplotě (20-25 °C) na více než 30 minut, před použitím je homogenizujte.

9.2.2 Vyjměte potřebné mikrojamky a zbytek okamžitě vraťte do sáčku se zipem při 2-8 °C.

9.2.3 Zředěný promývací roztok by měl být před použitím znovu zahřát na pokojovou teplotu.

9.2.4Číslo:Očíslujte každou pozici mikrojamek a všechny standardy a vzorky by měly být zpracovány v duplikátech.Zaznamenejte pozice standardů a vzorků.

9.2.5Přidejte standardní roztok/vzorek:Přidejte 50 µl standardního roztoku nebo připraveného vzorku do odpovídajících jamek.Přidejte 50 ul roztoku protilátky.Jemně promíchejte ručním protřepáním destičky a inkubujte 30 minut při 25 °C s krytem.

9.2.6Umýt:Jemně sejměte kryt a vyčistěte kapalinu z jamek a propláchněte mikrojamky 250 µl zředěného promývacího roztoku (roztok 2) v intervalu 10 s po dobu 4-5krát.Absorbujte zbytkovou vodu savým papírem (zbytkové vzduchové bubliny lze odstranit nepoužitou špičkou).

9.2.8.Enzymový konjugát:Do každé jamky přidejte 100 ml roztoku enzymového konjugátu, jemně promíchejte ručním třepáním destičky a inkubujte 30 minut při 25 °C s krytem.Opakujte krok mytí znovu.

9.2.8zbarvení:Přidejte 50 µl roztoku A a 50 µl roztoku B do každé jamky.Jemně promíchejte ručním protřepáním destičky a inkubujte 15 minut při 25 °C s krytem (viz 12.8).

9.2.9Opatření:Do každé jamky přidejte 50 µl zastavovacího roztoku.Jemně promíchejte ručním protřepáváním destičky a změřte absorbanci při 450 nm proti vzduchové slepé zkoušce (doporučuje se měření s duální vlnovou délkou 450/630 nm. Výsledek odečtěte do 5 minut po přidání stop roztoku.) (Můžeme také měřit zrakem bez zastavovacího roztoku pouze s přístrojem ELIASA)

Výsledek

10.1 Procentní absorbance

Průměrné hodnoty hodnot absorbance získané pro standardy a vzorky se vydělí hodnotou absorbance prvního standardu (nulový standard) a vynásobí se 100 %.Nulový standard se tedy rovná 100 % a hodnoty absorbance jsou uvedeny v procentech.

Absorbance (%) = B/B0 × 100 %

B ——absorbční standard (nebo vzorek)

B0 ——norma nulové absorbance

10.2 Standardní křivka

Nakreslení standardní křivky: Vezměte hodnotu absorbance standardů jako osu y, semilogaritmickou hodnotu koncentrace roztoku standardů flumequinu (ppb) jako osu x.

--- Theflumequinkoncentrace každého vzorku (ppb), kterou lze odečíst z kalibrační křivky, se vynásobí odpovídajícím násobkem ředění každého sledovaného vzorku a získá se skutečná koncentrace vzorku.

Pro redukci dat souprav ELISA byl vyvinut speciální software, který může být poskytnut na vyžádání.

11. Citlivost, přesnost a preciznost

Test citlivosti：0,3 ppb

Med Faktor ředění vzorku: 2

Detekční limit

Vzorek medu------------------------------------------------ -1 ppb

Přesnost

Vzorek medu --------------------------------------------- 90±20 %

Přesnost

Variační koeficient soupravy ELISA je menší než 10 %.

12. Upozornění

12.1 Střední hodnoty hodnot absorbance získané pro standardy a vzorky budou sníženy, pokud reagencie a vzorky nebyly regulovány na pokojovou teplotu (20-25 °C).

12.2 Nenechávejte mikrojamky mezi jednotlivými kroky zaschnout, abyste předešli neúspěšnému opakování, a proveďte další krok ihned po klepnutí na držák mikrojamek.

12.3.Před použitím každé činidlo homogenizujte.

12.4.Udržujte svou pokožku mimo stop roztok, protože je to 2M H₂SO₄řešení.

12.5 Nepoužívejte zastaralé soupravy.Nevyměňujte reagencie z různých šarží, sníží se tím citlivost.

12.6 Podmínky skladování:

Uchovávejte soupravy ELISA při 2-8 °C, nezmrazujte.Mikrotitrační destičky uzavřete. Během všech inkubací se vyhněte přímému slunečnímu záření.Doporučuje se mikrotitrační destičky zakrýt.

12.7 Indikace špatného stavu činidel:

Roztok substrátu by měl být opuštěn, pokud se barví.

Reagencie se mohou zkazit, pokud je hodnota absorbance (450/630nm) nulového standardu menší než 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Barevná reakce potřebuje 15 minut po přidání roztoku A a roztoku B. A můžete prodloužit inkubační dobu v rozsahu od 20 minut na více, pokud je barva příliš světlá na to, aby byla určena.Nikdy nepřekračujte 25 minut, naopak inkubační dobu náležitě zkraťte.

12.9 Optimální reakční teplota je 25℃.Vyšší nebo nižší teplota povede ke změnám hodnot citlivosti a absorbance.

13. Skladování

Skladovací podmínky: 2-8℃.

Doba skladování: 12 měsíců.