proizvod

Princip testa

Ovaj komplet je baziran na indirektno-kompetitivnoj ELISA tehnologiji.Jažice za mikrotitar su obložene kupložnim antigenom.Flumequineostatak u uzorku se takmiči sa antigenom obloženim na mikrotitarskoj ploči za antitijelo.Nakon dodavanja enzimom označenog anti-antitijela, TMB supstrat se koristi za prikaz boje.Apsorbancija uzorka je negativno povezana sa tetraciklinom koji se nalazi u njemu, nakon poređenja sa standardnom krivom, pomnoženom sa višestrukim razblaženjem, može se izračunati količina ostatka Flumequine u uzorku.

Prijave

Ovaj komplet se može koristiti u kvantitativnoj i kvalitativnoj analizi ostatka flumekina u medu.

Unakrsne reakcije

Flumequine …………………………………………… 100%

Potrebni materijali

Oprema

┅┅ Spektrofotometar mikrotitarske ploče (450nm/630nm)

┅┅Homogenizator ili stomacher

┅┅Shaker

┅┅Vortex mikser

┅┅Centrifuga

┅┅Analitička vaga (induktivnost: 0,01g)

┅┅Gradovana pipeta: 15ml

┅┅Gumena sijalica za pipetu

┅┅Cijev za centrifugu od polistirena: 15ml, 50ml

┅┅Staklena epruveta: 10ml

┅┅Mikropipete: 20ml-200ml, 100ml-10000ml,

250ml -multipipeta

Reagensi

┅┅n-heksan (AR)

┅┅metilen hlorid (AR)

┅┅acetonitril (AR)

┅┅Dejonizovana voda

-----Koncentrirana hlorovodonična kiselina (AR)

Kit Components

● Mikrotitarska ploča sa 96 jažica obloženih antigenom

● Standardna rješenja (6 boca×1ml/boca)

0ppb, 0,3ppb, 1,2ppb, 4,8ppb, 19,2ppb, 76,8ppb

● Standardna kontrola visoke koncentracije: (1ml/boca)

………………………………………………………………...100ppb

● Enzimski konjugat 12ml………………………………... crvena kapica

● Rastvor antitela 7ml …………..……..….…..zelena kapica

● Rastvor A 7ml……..…………………..………..bijeli poklopac

● Rastvor B 7ml …………….…………..………… crveni poklopac

● Stop rastvor 7ml ………………………………..………žuti poklopac

● 20XKoncentrovani rastvor za pranje 40ml

………………………………………..…..prozirna kapa

●2X rastvor za ekstrakciju 50ml……………………………… plavi poklopac

Priprema reagensa

7.1 Uzorak meda

Rastvor 1: 0,2 M rastvor hlorovodonične kiseline

Težina 41,5 ml Koncentrovana hlorovodonična kiselina, razrijeđena dejoniziranom vodom do 500 ml.

Rješenje 2: Rastvor za pranje

Koncentrovani rastvor za pranje razblažite dejonizovanom vodom u volumnom odnosu 1:19, koja će se koristiti za pranje ploča.razblaženi rastvor se može čuvati na 4℃ 1 mesec.

Rješenje3: rastvor za ekstrakciju

Razrijedite 2×koncentrovani rastvor za ekstrakciju dejonizovanom vodom u volumnom omjeru 1:1 (ili ovisno o zahtjevu), koji će se koristiti za ekstrakciju uzorka.Ovaj razrijeđeni rastvor može se čuvati 1 mjesec na 4℃.

Pripreme uzoraka

8.1 Obavijesti i mjere opreza za korisnike prije rada

(a) Koristite jednokratne vrhove u procesu eksperimenta i promijenite vrhove kada apsorbirate drugačiji reagens.

(b) Uvjerite se da su svi eksperimentalni instrumenti čisti, inače će to uticati na rezultat analize.

8.2Uzorak meda

----- Izvagajte 2 g ± 0,05 g uzorka meda u epruvetu za centrifugu od polistirena od 50 ml,

-----Dodajte 2 ml 0,2 M rastvora hlorovodonične kiseline (rastvor 1), promešajte da se potpuno promeša, zatim dodajte 8 ml metilen hlorida, mućkajte 5 min da se potpuno rastvori;

-----Centrifugirajte 10 min, najmanje 3000g na sobnoj temperaturi (20-25℃);

-----Uklonite supernatantnu fazu, uzmite 2 ml organskog rastvora supstrata u staklenu epruvetu od 10 ml. osušite podlogu u vodenom kupatilu sa protokom azota (50-60℃)

-----Dodajte 1 ml n-heksana, vrtite 30 s, zatim dodajte 1 ml ekstrakcijske otopine (rastvor 3), ponovo miješajte 1 min.Centrifugirajte 5 minuta, najmanje 3000 g na sobnoj temperaturi (20-25℃);

-----Ukloniti supernatantnu fazu, uzeti 50ml za analizu;

9. Proces analize

9.1 Napomena prije analize

9.1.1 Uverite se da su svi reagensi i mikrojažice na sobnoj temperaturi (20-25℃).

9.1.2 Vratite sve ostale reagense na 2-8℃ odmah nakon upotrebe.

9.1.3 Pravilno pranje mikro-jažica je važan korak u procesu analize;to je vitalni faktor za ponavljanje ELISA analize.

9.1.4 Izbjegavajte svjetlost i pokrijte mikrojažice tokom inkubacije.

9.2 Koraci analize

9.2.1 Izvadite sve reagense na sobnoj temperaturi (20-25℃) duže od 30 minuta, homogenizirajte prije upotrebe.

9.2.2 Izvadite potrebne mikro jažice, a ostatak odmah vratite u vrećicu sa zatvaračem na 2-8 ℃.

9.2.3 Razrijeđeni rastvor za pranje treba ponovo zagrijati da bude na sobnoj temperaturi prije upotrebe.

9.2.4Broj:Označite svaki položaj mikrojažice i sve standarde i uzorke treba izvoditi u duplikatu.Zabilježite standarde i položaje uzoraka.

9.2.5Dodajte standardno rješenje/uzorak:Dodajte 50 µl standardnog rastvora ili pripremljenog uzorka u odgovarajuće jažice.Dodati 50 µl rastvora antitela.Lagano promiješajte ručnim protresanjem ploče i inkubirajte 30 minuta na 25 ℃ sa poklopcem.

9.2.6oprati:Pažljivo uklonite poklopac i očistite tečnost iz jažica i isperite mikrojažice sa 250 µl razblaženog rastvora za pranje (rastvor 2) u intervalima od 10 sekundi 4-5 puta.Apsorbirajte preostalu vodu upijajućim papirom (ostatak mjehurića zraka se može eliminirati neiskorištenim vrhom).

9.2.8.Enzimski konjugat:Dodati rastvor enzimskog konjugata 100 ml u svaku jažicu, lagano promešati ručnim protresanjem ploče i inkubirati 30 minuta na 25℃ sa poklopcem.Ponovite korak pranja ponovo.

9.2.8Boja:Dodajte 50 µl rastvora A i 50 µl rastvora B u svaku jažicu.Lagano promiješajte ručnim protresanjem ploče i inkubirajte 15 minuta na 25 ℃ sa poklopcem (pogledajte 12.8).

9.2.9mjera:Dodajte 50 µl otopine za zaustavljanje u svaku jažicu.Lagano promiješajte ručnim protresanjem ploče i izmjerite apsorbanciju na 450 nm u odnosu na praznu površinu (Predlaže se mjerenje s dvostrukom talasnom dužinom od 450/630 nm. Očitajte rezultat u roku od 5 minuta nakon dodavanja otopine za zaustavljanje.) (Također možemo mjeriti očima bez zaustavnog rastvora osim ELIASA instrumenta)

Rezultati

10.1 Procenat apsorpcije

Srednje vrijednosti vrijednosti apsorpcije dobijene za standarde i uzorke podijeljene su vrijednošću apsorpcije prvog standarda (nulti standard) i pomnožene sa 100%.Nulti standard je stoga jednak 100%, a vrijednosti apsorpcije su navedene u procentima.

Upijanje (%) = B/B0 ×100%

B ——standard apsorpcije (ili uzorak)

B0 ——standard nulte apsorpcije

10.2 Standardna kriva

Da biste nacrtali standardnu ​​krivu: Uzmite vrijednost apsorbancije standarda kao y-osu, polulogaritamsku koncentraciju otopine standarda flumequina (ppb) kao x-os.

--- Theflumequinekoncentracija svakog uzorka (ppb), koja se može očitati iz kalibracijske krivulje, množi se odgovarajućim višekratnikom razrjeđenja svakog uzorka koji se prati, i dobiva se stvarna koncentracija uzorka.

Za smanjenje podataka ELISA kompleta razvijen je poseban softver koji se može dobiti na zahtjev.

11. Osetljivost, tačnost i preciznost

Test Sensitivity：0.3ppb

Med Faktor razblaženja uzorka: 2

Granica detekcije

Uzorak meda------------------------------------------------ -1ppb

Preciznost

Uzorak meda ----------------------------------------------------- 90±20 %

Preciznost

Koeficijent varijacije ELISA kompleta je manji od 10%.

12. Napomena

12.1 Srednje vrijednosti vrijednosti apsorbancije dobijene za standarde i uzorke će se smanjiti ako reagensi i uzorci nisu regulirani na sobnu temperaturu (20-25 ℃).

12.2 Ne dozvolite da se mikro-jažice osuše između koraka kako biste izbjegli neuspješno ponavljanje i izvršite sljedeći korak odmah nakon dodirivanja držača mikro-jažica.

12.3.Homogenizirajte svaki reagens prije upotrebe.

12.4.Držite kožu podalje od rješenja za zaustavljanje jer to je 2M H₂SO₄rješenje.

12.5 Ne koristite komplete zastarjele.Nemojte mijenjati reagense različitih serija, jer će se smanjiti osjetljivost.

12.6 Uvjeti skladištenja:

Držite ELISA komplete na 2-8℃, nemojte zamrzavati.Ploče sa mikro jažicom za zaptivanje Izbegavajte direktnu sunčevu svetlost tokom svih inkubacija.Preporučuje se pokrivanje mikrotitarskih ploča.

12.7 Indikacije da se reagensi pokvare:

Rastvor supstrata treba napustiti ako poprimi boju.

Reagensi mogu biti loši ako je vrijednost apsorpcije (450/630nm) nulte standarda manja od 0,5 (A450nm＜0,5).

12.8 Za reakciju bojenja potrebno je 15 minuta nakon dodavanja otopine A i otopine B. Možete produžiti vrijeme inkubacije od 20 minuta na više ako je boja presvijetla da bi se odredila.Nikada ne prelazite 25 minuta, naprotiv, skratite vrijeme inkubacije na odgovarajući način.

12.9 Optimalna temperatura reakcije je 25℃.Viša ili niža temperatura će dovesti do promjena vrijednosti osjetljivosti i apsorpcije.

13. Skladištenje

Uvjeti skladištenja: 2-8℃.

Rok skladištenja: 12 meseci.