продукт

Принцип на теста

Този комплект е базиран на индиректно-конкурентна ELISA технология.Микротитърните ямки са покрити със свързващ антиген.Флумеквиностатъкът в пробата се конкурира с антигена, покрит върху микротитърната плака за антитялото.След добавянето на ензимно белязано анти-антитело се използва TMB субстрат за показване на цвета.Абсорбцията на пробата е отрицателно свързана с оставащия тетрациклин в нея, след сравняване със стандартната крива, умножена по многократното разреждане, може да се изчисли количеството на остатъка от Flumequine в пробата.

Приложения

Този комплект може да се използва при количествен и качествен анализ на остатъците от флумехин в меда.

Кръстосани реакции

Flumequine …………………..……………………… 100%

Необходими материали

Оборудване

┅┅Спектрофотометър за микротитърна плака (450nm/630nm)

┅┅Хомогенизатор или стомахер

┅┅Шейкър

┅┅Вортекс миксер

┅┅центрофуга

┅┅Аналитична везна (индуктивност: 0.01g)

┅┅Градуирана пипета: 15мл

┅┅Гумена накрайник за пипета

┅┅Епруветка за центрофуга от полистирол: 15 ml, 50 ml

┅┅Стъклена епруветка: 10 мл

┅┅Микропипети: 20ml-200ml, 100ml -10000ml,

250мл - мултипипета

Реактиви

┅┅n-хексан (AR)

┅┅Метилен хлорид (AR)

┅┅Ацетонитрил (AR)

┅┅Дейонизирана вода

-----Концентрирана солна киселина (AR)

Компоненти на комплекта

● Микротитърна плака с 96 ямки, покрити с антиген

● Стандартни разтвори (6 бутилки × 1 ml/бутилка)

0ppb, 0.3ppb, 1.2ppb, 4.8ppb, 19.2ppb, 76.8ppb

● Стандартен контрол с висока концентрация: (1 ml/бутилка)

…………………………………………………......100ppb

● Ензимен конюгат 12 ml………………………... червен кап

● Разтвор на антитела 7 ml …………..……..….…..зелена капачка

● Разтвор A 7ml……..…………………..………..бяла капачка

● Разтвор B 7ml …………….…………..………… червена капачка

● Стоп разтвор 7 ml ……………………..………жълта капачка

● 20X Концентриран измивен разтвор 40мл

………………………………………..…..прозрачна капачка

●2X Разтвор за екстракция 50 ml…………………… синя капачка

Приготвяне на реагенти

7.1 Проба мед

Разтвор 1: 0,2 М разтвор на солна киселина

Тегло 41,5 ml Концентрирана солна киселина, разредена с дейонизирана вода до 500 ml.

Разтвор 2: Промивен разтвор

Разредете концентрирания промивен разтвор с дейонизирана вода в обемно съотношение 1:19, която ще се използва за измиване на плаките.разреденият разтвор може да се съхранява при 4 ℃ за 1 месец.

Решение3: разтвор за екстракция

Разредете 2 × концентрирания екстракционен разтвор с дейонизирана вода в обемно съотношение 1:1 (или в зависимост от изискването), който ще се използва за екстракция на пробата.Този разреден разтвор може да се съхранява 1 месец при 4 ℃.

Приготвяне на проби

8.1 Забележка и предпазни мерки за потребителите преди работа

(a) Моля, използвайте еднократни накрайници в процеса на експеримента и сменете накрайниците, когато абсорбирате различен реагент.

(b) Уверете се, че всички експериментални инструменти са чисти, в противен случай това ще повлияе на резултата от анализа.

8.2Проба мед

----- Претеглете 2 g±0,05 g проба от мед в 50 ml полистиролова центрофужна епруветка,

-----Добавете 2 ml 0,2 M разтвор на солна киселина (Разтвор 1), разбъркайте на вортекс, за да го смесите напълно, след това добавете 8 ml метилен хлорид, разклатете с шейкър за 5 минути, за да се разтвори напълно;

----- Центрофугирайте за 10 минути, поне 3000 g при стайна температура (20-25 ℃);

-----Отстранете супернатантната фаза, вземете 2 ml от органичния разтвор на субстрата в стъклена епруветка от 10 ml. Изсушете субстрата във водна баня с поток от азот (50-60 ℃)

-----Добавете 1 ml n-хексан, разбъркайте на вортекс за 30 s, след това добавете 1 ml разтвор за екстракция (разтвор 3), разбъркайте отново на вортекс за 1 минута.Центрофугирайте за 5 минути, най-малко 3000 g при стайна температура (20-25 ℃);

-----Отстранете супернатантната фаза, вземете 50 ml за анализ;

9. Процес на анализ

9.1 Забележка преди анализа

9.1.1 Уверете се, че всички реагенти и микроямки са на стайна температура (20-25 ℃).

9.1.2 Върнете всички останали реактиви до 2-8 ℃ веднага след употреба.

9.1.3 Правилното измиване на микроямките е важна стъпка в процеса на анализ;това е жизненоважен фактор за повторяемостта на ELISA анализа.

9.1.4 Избягвайте светлината и покривайте микроямките по време на инкубацията.

9.2 Стъпки на анализа

9.2.1 Извадете всички реагенти на стайна температура (20-25 ℃) за повече от 30 минути, хомогенизирайте преди употреба.

9.2.2 Извадете необходимите микроямки и незабавно върнете останалите в торбичката с цип при 2-8 ℃.

9.2.3 Разреденият промивен разтвор трябва да се затопли отново до стайна температура преди употреба.

9.2.4Номер:Номерирайте всяка позиция в микрогнездото и всички стандарти и проби трябва да се проведат в два екземпляра.Запишете позициите на стандартите и пробите.

9.2.5Добавете стандартен разтвор/проба:Добавете 50 µl стандартен разтвор или приготвена проба към съответните ямки.Добавете 50 µl разтвор на антитяло.Разбъркайте внимателно чрез разклащане на плаката ръчно и инкубирайте за 30 минути при 25 ℃ с капак.

9.2.6Мия:Отстранете внимателно капака и изчистете течността от ямките и изплакнете микроямките с 250 µl разреден промивен разтвор (разтвор 2) на интервал от 10 s за 4-5 пъти.Попийте остатъчната вода с абсорбираща хартия (останалото въздушно мехурче може да се отстрани с неизползван накрайник).

9.2.8.Ензимен конюгат:Добавете 100 ml разтвор на ензимен конюгат към всяка ямка, разбъркайте внимателно, като разклатите плочата ръчно и инкубирайте за 30 минути при 25 ℃ с капак.Повторете стъпката на измиване отново.

9.2.8Оцветяване:Добавете 50 µl разтвор A и 50 µl разтвор B към всяка ямка.Разбъркайте внимателно чрез разклащане на плаката ръчно и инкубирайте за 15 минути при 25 ℃ с капак (вижте 12.8).

9.2.9Мярка:Добавете 50 µl стоп разтвор към всяка ямка.Разбъркайте внимателно, като разклатите плочата ръчно и измерете абсорбцията при 450 nm спрямо празна проба с въздух (Препоръчва се измерване с двойна дължина на вълната от 450/630 nm. Прочетете резултата в рамките на 5 минути след добавяне на стоп разтвор.) (Можем също да измерваме визуално без решение за спиране накратко с инструмента ELIASA)

Резултати

10.1 Процентна абсорбция

Средните стойности на стойностите на абсорбцията, получени за стандартите и пробите, се разделят на стойността на абсорбция на първия стандарт (нулев стандарт) и се умножават по 100%.По този начин нулевият стандарт се прави равен на 100% и стойностите на абсорбция се цитират в проценти.

Абсорбция (%) = B/B0 ×100%

B ——стандарт за абсорбция (или проба)

B0 ——стандарт за нулева абсорбция

10.2 Стандартна крива

За да начертаете стандартна крива: Вземете стойността на абсорбцията на стандартите като y-ос, полулогаритмична на концентрацията на стандартния разтвор на флумехин (ppb) като х-ос.

--- Theфлумехинконцентрацията на всяка проба (ppb), която може да бъде разчетена от кривата на калибриране, се умножава по съответното кратно разреждане на всяка следвана проба и се получава действителната концентрация на пробата.

За намаляване на данните от комплектите ELISA е разработен специален софтуер, който може да бъде предоставен при поискване.

11. Чувствителност, точност и прецизност

Тест за чувствителност:0,3ppb

Фактор на разреждане на пробата за мед: 2

Граница на откриване

Проба мед ------------------------------------------------- -1ppb

точност

Проба мед -------------------------------------------------- 90±20 %

Точност

Коефициентът на вариация на комплекта ELISA е по-малък от 10%.

12. Забележка

12.1 Средните стойности на стойностите на абсорбцията, получени за стандартите и пробите, ще бъдат намалени, ако реактивите и пробите не са регулирани до стайна температура (20-25 ℃).

12.2 Не позволявайте микроямките да изсъхнат между стъпките, за да избегнете неуспешно повторение, и изпълнете следващата стъпка веднага след почукване на държача на микроямките.

12.3.Хомогенизирайте всеки реагент преди употреба.

12.4.Пазете кожата си от стоп разтвора, тъй като той е 2M H₂SO₄решение.

12.5 Не използвайте остарелите комплекти.Не разменяйте реагентите от различни партиди, защото това ще намали чувствителността.

12.6 Условия на съхранение:

Съхранявайте комплектите ELISA при 2-8 ℃, не замразявайте.Плаки с микрогнезда за запечатване. Избягвайте пряка слънчева светлина по време на всички инкубации.Препоръчва се покриване на микротитърните плаки.

12.7 Индикации за повреждане на реагентите:

Субстратният разтвор трябва да се изостави, ако се оцвети.

Реагентите може да са повредени, ако стойността на абсорбцията (450/630 nm) на нулевия стандарт е по-малка от 0,5 (A450 nm <0,5).

12.8 Реакцията на оцветяване се нуждае от 15 минути след добавяне на разтвор А и разтвор Б. И можете да удължите времето на инкубация от 20 минути до повече, ако цветът е твърде светъл, за да бъде определен.Никога не превишавайте 25 минути, напротив, съкратете правилно времето за инкубация.

12.9 Оптималната реакционна температура е 25 ℃.По-висока или по-ниска температура ще доведе до промени в стойностите на чувствителността и абсорбцията.

13. Съхранение

Условия на съхранение: 2-8 ℃.

Срок на съхранение: 12 месеца.